本文關(guān)鍵詞：抵抗素作為促炎因子對(duì)非酒精性脂肪肝病發(fā)生發(fā)展的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 模擬非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)體外及體內(nèi)模型，通過(guò)觀察抵抗素對(duì)肝酶學(xué)指標(biāo)、細(xì)胞和組織形態(tài)學(xué)改變、核因子κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）、腫瘤壞死因子a（tumornecrosis factor-a，TNF-a）表達(dá)及纖維化指標(biāo)的影響，探討抵抗素作為促炎因子對(duì)NAFLD發(fā)生發(fā)展的影響。 方法 1.體外實(shí)驗(yàn)選用軟脂酸誘導(dǎo)L02細(xì)胞脂肪變性模擬NAFLD體外模型。實(shí)驗(yàn)分為4組：C組（正常對(duì)照組）、P組（模型組：軟脂酸20ug/ml）、CR組（重組人抵抗素50ug/l）和PR組（軟脂酸20ug/ml+重組人抵抗素50ug/l）。各組給予相應(yīng)處理72小時(shí)后,油紅O染色觀察細(xì)胞的脂變并測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清中甘油三酯(TG)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）及谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）的含量；采用半定量RT-PCR及Western blot法檢測(cè)細(xì)胞胰島素受體底物-2（IRS-2）、NF-κB、TNF-a的基因及蛋白表達(dá)水平。 2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 應(yīng)用高脂飲食喂養(yǎng)Wistar大鼠建立NAFLD體內(nèi)模型。健康雄性Wistar大鼠30只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組和模型組，各15只，分別給予普通飼料和高脂飼料喂養(yǎng)。分別于第15、18、21周末將對(duì)照組和模型組隨機(jī)各處理5只。檢測(cè)空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、 Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、透明質(zhì)酸（HA）、Ⅳ型膠原（CIV）、層粘連蛋白（LN）水平，，采用穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估法(HOMA)評(píng)估抵抗素抵抗（insulinresistance, IR）（HOMA-IR）；取肝組織HE、VG染色及電鏡觀察肝臟纖維化情況。RT-PCR法檢測(cè)大鼠肝組織中抵抗素轉(zhuǎn)錄水平。 結(jié)果 1.選用軟脂酸誘導(dǎo)L02細(xì)胞脂肪變性，成功建立NALFD體外模型。 （1）油紅O染色觀察：C組肝細(xì)胞邊緣清晰，細(xì)胞核居中，未見(jiàn)明顯橘紅色脂滴形成；P組胞漿內(nèi)可見(jiàn)橘紅色脂滴；CR組胞漿內(nèi)見(jiàn)少量橘紅色脂滴；PR組見(jiàn)大量脂滴，脂滴不同程度融合。 （2）與C組比較，P組、CR組及PR組細(xì)胞培養(yǎng)上清中TG、ALT、AST、 GGT的含量升高。 2. RT-PCR及Western blot結(jié)果顯示：與C組比較， P組、CR組及PR組NF-κB mRNA、TNFα mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯升高，而IRS-2mRNA明顯降低（P值均＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P組與CR組間比較（P值均＞0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量變化趨勢(shì)同mRNA變化趨勢(shì)。 3.肝組織形態(tài)學(xué)和血清學(xué)指標(biāo)評(píng)價(jià)成功建立NAFLD體外模型。 (1)隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，肝組織病理學(xué)觀察大鼠肝臟脂肪變性及肝纖維化程度逐漸加重。 (2)NAFLD模型組HOMA-IR、PCⅢ、LN、CIV、HA隨造模時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，均以21周時(shí)升高最為明顯，與相應(yīng)時(shí)相對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05或P0.01）。 4. RT-PCR結(jié)果示：resistin mRNA變化趨勢(shì)同血清學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)。 5.Spearman相關(guān)性分析顯示抵抗素與HOMA-IR、PCⅢ、LN、CIV、HA呈顯著正相關(guān)（P0.05或P0.01）。 結(jié)論 抵抗素上調(diào)脂肪變性LO2細(xì)胞內(nèi)NF-κB和TNF-a的表達(dá)，并且下調(diào)IRS-2的表達(dá)；隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠肝組織抵抗素表達(dá)逐漸升高，并且與血清肝纖維化指標(biāo)和IR成正相關(guān)，提示抵抗素可能通過(guò)NF-κB依賴途徑發(fā)揮促炎和促IR作用并加快肝臟由炎癥向肝纖維化進(jìn)展。
【關(guān)鍵詞】：抵抗素 非酒精性脂肪肝 核因子κB 腫瘤壞死因子a 肝纖維化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 第一部分 抵抗素對(duì)脂肪變性肝細(xì)胞核因子κB和腫瘤壞死因子a表達(dá)的影響16-30
• 前言16
• 1 材料與方法16-25
• 2 結(jié)果25-28
• 3 討論28-30
• 第二部分 抵抗素在非酒精性脂肪肝病中對(duì)胰島素抵抗和肝纖維化進(jìn)展的影響30-38
• 前言30
• 1 材料與方法30-32
• 2 結(jié)果32-35
• 3 討論35-38
• 全文小結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 附圖44-46
• 文獻(xiàn)綜述：抵抗素及其在炎癥性疾病中的作用研究進(jìn)展46-57
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 致謝57-58
• 碩士期間發(fā)表論文58-59

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：抵抗素作為促炎因子對(duì)非酒精性脂肪肝病發(fā)生發(fā)展的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：285351