急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是由多種病因引起的胰酶激活,以胰腺局部炎癥為主要特點(diǎn),伴或者不伴有其他器官功能障礙的疾病,重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)須伴有持續(xù)性的器官衰竭,按照亞特蘭大分類標(biāo)準(zhǔn),約10%急性胰腺炎患者歸為嚴(yán)重分級(jí),病死率較高,急性肺損傷是急性胰腺炎的一個(gè)嚴(yán)重的并發(fā)癥,在SAP中,急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征的死亡率為30%~40%,目前對(duì)于SAP相關(guān)性肺損傷沒(méi)有特效的治療方法。核因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)是一個(gè)中心轉(zhuǎn)錄因子,NF-κB家族由P50,P52,REL,P65和REL-B組成,控制著多種炎癥基因的表達(dá),例如腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶。水通道蛋白是一種小的膜蛋白,選擇性和雙向通過(guò)細(xì)胞膜快速促進(jìn)水的轉(zhuǎn)運(yùn),通過(guò)AQP5可以反應(yīng)肺組織水的轉(zhuǎn)運(yùn)情況,進(jìn)而反應(yīng)肺水腫的嚴(yán)重程度。姜黃素是一種植物多酚,由姜科植物黃色香料中提取。調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子如NF-κB,粘附分子,酶等,在炎癥和癌癥中具有重要作用,聯(lián)苯二氟酮EF24是一種合成的姜黃素的類似物,研究發(fā)現(xiàn)姜黃素類似物EF24可以抑制NF-κB活性,減少促炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)和分泌,在炎癥反應(yīng)中起作用。研究顯示在大鼠出血性休克模型中給予聯(lián)苯二氟酮EF24治療,能夠抑制IL-1受體通路,減少血清中TNF-α、IL-6濃度,減少出血性休克引起的肺炎癥。本實(shí)驗(yàn)研究目的是探索聯(lián)苯二氟酮EF24對(duì)重癥胰腺炎的肺損傷的炎癥抑制作用。目的:本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)HE染色觀察SAP時(shí)胰腺、肺組織組織學(xué)的變化,檢測(cè)肺濕干重比,瑞氏染色觀察肺泡灌洗液細(xì)胞計(jì)數(shù),Real-Time PCR、Western-blot方法檢測(cè)肺AQP5 mRNA、p65 mRNA及蛋白表達(dá),ELISA方法測(cè)定血清TNF-α、IL-6、肺泡灌洗液中TNF-α水平,探索聯(lián)苯二氟酮EF24對(duì)重癥胰腺炎肺損傷的作用,為治療重癥急性胰腺炎肺損傷提供新的方法。方法:1將60只sprague-dawley(sd)大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組(con組)、重癥急性胰腺炎組(sap組)和聯(lián)苯二氟酮ef24組(ef24組),每組再分為6h、12h2個(gè)亞組,每組大鼠各10只。2重癥急性胰腺炎sap組、聯(lián)苯二氟酮ef24組大鼠分別給予間隔1h,共2次,每次腹腔內(nèi)注射同等劑量的20%l-精氨酸(3.0g/kg);對(duì)照con組大鼠給予間隔1h,共2次,每次腹腔內(nèi)注射與l-精氨酸同等劑量的0.9%nacl;造模成功后1h,聯(lián)苯二氟酮ef24組大鼠給予腹腔內(nèi)注射聯(lián)苯二氟酮ef24(0.4mg/kg);con組、sap組大鼠給予腹腔內(nèi)注射聚乙二醇400溶劑(聚乙二醇:nacl=1:1)。3分別于造模后6h、12h留取胰腺組織、肺組織和血液,通過(guò)he染色觀察胰腺、肺的組織學(xué)變化,留取肺組織標(biāo)本,檢測(cè)肺濕干重比,瑞氏染色觀察肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù),elisa法檢測(cè)血清內(nèi)il-6、tnf-α水平及檢測(cè)肺泡灌洗液中tnf-α水平,采用real-timepcr、western-blot的方法檢測(cè)比較三組肺組織aqp5mrna、p65mrna及蛋白的表達(dá)變化。4所有計(jì)量數(shù)據(jù)資料采用(mean±sd)表示,利用spss21.0軟件包行統(tǒng)計(jì)分析。p0.05為差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1he染色:結(jié)果示sap組、ef24組分別與con組比較,胰腺組織損傷嚴(yán)重程度增加,并且隨著時(shí)間發(fā)展,胰腺損傷逐漸加重。依據(jù)mayer、osman等評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),肺組織病理評(píng)分結(jié)果顯示sap組、ef24組的肺組織病理?yè)p傷加重,其中ef24組肺組織損傷程度較sap組減輕;2肺濕干重比:統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:sap組、ef24組分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,肺濕干重比明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(均為p0.01);ef24組與sap組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,肺濕干重比顯著降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.01);各組中兩個(gè)亞組相比,con組兩個(gè)亞組相比,肺濕干重比無(wú)明顯差異(p0.05),在sap組、ef24組中,12h組肺濕干重比比6h肺濕干重比顯著升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(分別p0.01,p0.05);3肺泡灌洗液細(xì)胞計(jì)數(shù):統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:sap組、ef24組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,肺泡灌洗液總細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為p0.01);ef24組與sap組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,ef24組肺泡灌洗液總細(xì)胞計(jì)數(shù)降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);各個(gè)組的兩個(gè)亞組相比,con組6h組、12h組肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),sap組、ef24組12h組肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)高于6h組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均為p0.01);sap組、ef24分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,肺泡灌洗液巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于con組(均為p0.01),ef24組與sap相比較,肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞明顯減少,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);4血清il-6的水平:sap組、ef24組分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,sap組、ef24組血清il-6水平顯著升高(均為p0.01);ef24組與sap組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,血清il-6水平顯著下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.01);con組、ef24組兩個(gè)亞組之間相比,6h、12h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間均無(wú)顯著差異(均為p0.05),sap組6h、12h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,12h血清il-6水平明顯高于6h組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01);5血清tnf-α的水平:sap組、ef24組分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較,大鼠血清tnf-α濃度顯著升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(均為p0.01);ef24組與sap組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,ef24組明顯下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.01);三個(gè)組的兩個(gè)亞組之間相比,con組、ef24組6h、12h兩個(gè)亞組無(wú)顯著差異(均為p0.05),sap組12h組顯著高于6h組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.01);6肺泡灌洗液tnf-α的水平:sap組、ef24組分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,sap組、ef24組肺泡灌洗液tnf-α的水平明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(均為p0.01);ef24組與sap組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,ef24組明顯下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.01);三個(gè)組的亞組相比較,其中con組、ef24組6h、12h組的肺泡灌洗液tnf-α水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均為p0.05),sap組的6h、12h相比較,12h肺泡灌洗液tnf-α水平明顯高于6h肺泡灌洗液tnf-α水平,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01);7肺組織aqp5蛋白表達(dá):sap組、ef24組分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,sap組、ef24組肺組織aqp5蛋白量均明顯降低(均為p0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別;ef24組與sap組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,aqp5蛋白量明顯上升(p0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別;con組、ef24組6h、12haqp5蛋白表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(均為p0.05),sap組兩個(gè)亞組相比,6haqp5蛋白表達(dá)的量明顯高于12haqp5蛋白表達(dá)的量,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.05);8肺組織p65蛋白表達(dá):sap組、ef24組分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,sap組、ef24組肺組織p65蛋白量均顯著升高(均為p0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別;ef24組與sap組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,ef24組p65蛋白表達(dá)顯著下降(p0.01);三個(gè)組的亞組相比,con組、ef24組6h、12hp65蛋白表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(均為p0.05),sap組兩個(gè)亞組相比,12h組p65蛋白表達(dá)的量明顯高于6h組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.01);9肺組織aqp5mrna表達(dá):sap組、ef24組分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,sap組、ef24組aqp5mrna表達(dá)的量較con組明顯下降(均為p0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別;ef24組與sap組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較,aqp5mrna表達(dá)的量明顯升高,有的統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.01);con組、ef24組6h、12h相比,aqp5mrna表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均為p0.05),sap組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,6haqp5mrna的量明顯高于12haqp5mrna的量,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.05);10肺組織p65mrna表達(dá):sap組、ef24組分別與con組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,sap組、ef24組p65mrna表達(dá)量明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(均為p0.01);ef24組與sap組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,ef24組p65mrna的量明顯減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.01);三組的各個(gè)亞組之間相比較,con組、ef24組p65mrna量6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比,p65mrna表達(dá)量無(wú)顯著差異(p0.05),sap組6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比,12h肺組織p65mrna的表達(dá)量明顯高于6hp65mrna表達(dá)量,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1ef24能上調(diào)aqp5的表達(dá)量,下調(diào)p65表達(dá)量,減輕sap時(shí)肺部炎癥,對(duì)sap大鼠肺損傷有保護(hù)作用。2ef24降低促進(jìn)炎癥因子tnf-α、il-6的表達(dá),減輕sap肺組織的炎癥反應(yīng)。3ef24對(duì)于減輕sap肺損傷的機(jī)制可能是抑制nf-κb信號(hào)通路激活,下調(diào)炎癥細(xì)胞因子tnf-α、il-6表達(dá),上調(diào)aqp5表達(dá)。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R576;R563
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮寫
前言
材料與方法
結(jié)果
附圖
附表
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 重癥急性胰腺炎肺損傷的機(jī)制和治療
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷

【參考文獻(xiàn)】

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