發(fā)布時(shí)間：2020-10-23 06:06

　　 目的通過(guò)建立酒精性肝纖維化大鼠模型,從組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)方面觀(guān)察肝纖維化的起始——肝竇毛細(xì)血管化的發(fā)生,探討MMP2、DDR2在酒精性肝纖維化大鼠肝竇毛細(xì)血管化病理進(jìn)程中的表達(dá)及可能發(fā)揮的作用,進(jìn)一步闡明酒精性肝纖維化的發(fā)病機(jī)制,并為下一步以DDR2為靶點(diǎn)治療酒精性肝纖維化提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 材料與方法50只雄性Wistar大鼠正常飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組(N組)、吡唑?qū)φ战M(P組)及模型組。模型組38只,橄欖油拌平衡飼料喂養(yǎng)大鼠的基礎(chǔ)上給予每日兩次白酒、吡唑混合液胃內(nèi)灌注,白酒折算成酒精后其量及濃度每?jī)芍苓f增一次,吡唑按25mg/kg·d溶于灌胃酒精中。正常對(duì)照組(6只)給予等量生理鹽水每日兩次灌胃。吡唑?qū)φ战M(6只)給予模型組等量的吡唑溶于等量生理鹽水每日兩次灌胃。模型組分別于4周(M1組)、8周(M2組)、12周(M3組)和20周(M4組)隨機(jī)處死8只大鼠,正常對(duì)照組和吡唑?qū)φ战M于16周全部處死。取肝組織標(biāo)本,通過(guò)HE染色、Masson染色觀(guān)察肝臟病理學(xué)改變,通過(guò)網(wǎng)狀纖維染色、免疫組化染色(Ⅰ、Ⅳ型膠原及層粘連蛋白)及電鏡觀(guān)察肝竇毛細(xì)血管化的發(fā)生,最后通過(guò)熒光定量-PCR和Western blot檢測(cè)肝組織MMP2、DDR2基因和蛋白表達(dá)并與酒精性肝纖維化中肝竇毛細(xì)血管化的各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果模型組隨造模時(shí)間延長(zhǎng)依次出現(xiàn)肝組織脂肪變性、氣球樣變、炎癥及纖維化等病理過(guò)程,膠原纖維及網(wǎng)狀纖維沉積逐漸增多(P＜0.05),電鏡下肝竇內(nèi)皮細(xì)胞失窗孔及連續(xù)性基底膜形成的現(xiàn)象與肝竇周Ⅳ型膠原及LN表達(dá)逐漸增加提示建模12周出現(xiàn)肝竇毛細(xì)血管化。DDR2、MMP2基因和蛋白量表達(dá)也隨建模進(jìn)行逐漸增加(P＜0.05)。相關(guān)性分析顯示MMP2表達(dá)量與肝竇毛細(xì)血管化評(píng)價(jià)指標(biāo)(網(wǎng)狀纖維、Ⅳ型膠原、LN)呈正相關(guān),同時(shí)DDR2表達(dá)量與MMP2表達(dá)量及肝竇毛細(xì)血管化評(píng)價(jià)指標(biāo)也呈正相關(guān)。正常對(duì)照組和吡唑?qū)φ战M病理檢測(cè)無(wú)明顯異常,且兩者之間各指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,MMP2及DDR2微量表達(dá)。 結(jié)論通過(guò)給予橄欖油拌平衡飼料喂養(yǎng)及白酒、吡唑混合液灌胃可以成功建立酒精性肝纖維化大鼠模型,并觀(guān)察到病理發(fā)展過(guò)程中的肝竇毛細(xì)血管化現(xiàn)象。隨造模時(shí)間延長(zhǎng),DDR2、MMP2基因和蛋白表達(dá)量逐漸增加,DDR2與MMP2表達(dá)量及肝竇毛細(xì)血管化評(píng)價(jià)指標(biāo)呈正相關(guān),提示DDR2可能通過(guò)MMP2介導(dǎo)膠原與肝星狀細(xì)胞間的相互作用,參與酒精性肝纖維化及肝竇毛細(xì)血管化的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類(lèi)】：R575.2
【部分圖文】：

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NIMP2基因RTPCR熔解峰
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號(hào)：2852646