目的通過建立酒精性肝纖維化大鼠模型,從組織學和超微結(jié)構(gòu)方面觀察肝纖維化的起始——肝竇毛細血管化的發(fā)生,探討MMP2、DDR2在酒精性肝纖維化大鼠肝竇毛細血管化病理進程中的表達及可能發(fā)揮的作用,進一步闡明酒精性肝纖維化的發(fā)病機制,并為下一步以DDR2為靶點治療酒精性肝纖維化提供實驗基礎。 材料與方法50只雄性Wistar大鼠正常飼養(yǎng)1周后隨機分為3組:正常對照組(N組)、吡唑?qū)φ战M(P組)及模型組。模型組38只,橄欖油拌平衡飼料喂養(yǎng)大鼠的基礎上給予每日兩次白酒、吡唑混合液胃內(nèi)灌注,白酒折算成酒精后其量及濃度每兩周遞增一次,吡唑按25mg/kg·d溶于灌胃酒精中。正常對照組(6只)給予等量生理鹽水每日兩次灌胃。吡唑?qū)φ战M(6只)給予模型組等量的吡唑溶于等量生理鹽水每日兩次灌胃。模型組分別于4周(M1組)、8周(M2組)、12周(M3組)和20周(M4組)隨機處死8只大鼠,正常對照組和吡唑?qū)φ战M于16周全部處死。取肝組織標本,通過HE染色、Masson染色觀察肝臟病理學改變,通過網(wǎng)狀纖維染色、免疫組化染色(Ⅰ、Ⅳ型膠原及層粘連蛋白)及電鏡觀察肝竇毛細血管化的發(fā)生,最后通過熒光定量-PCR和Western blot檢測肝組織MMP2、DDR2基因和蛋白表達并與酒精性肝纖維化中肝竇毛細血管化的各項評價指標進行相關(guān)性分析。 結(jié)果模型組隨造模時間延長依次出現(xiàn)肝組織脂肪變性、氣球樣變、炎癥及纖維化等病理過程,膠原纖維及網(wǎng)狀纖維沉積逐漸增多(P＜0.05),電鏡下肝竇內(nèi)皮細胞失窗孔及連續(xù)性基底膜形成的現(xiàn)象與肝竇周Ⅳ型膠原及LN表達逐漸增加提示建模12周出現(xiàn)肝竇毛細血管化。DDR2、MMP2基因和蛋白量表達也隨建模進行逐漸增加(P＜0.05)。相關(guān)性分析顯示MMP2表達量與肝竇毛細血管化評價指標(網(wǎng)狀纖維、Ⅳ型膠原、LN)呈正相關(guān),同時DDR2表達量與MMP2表達量及肝竇毛細血管化評價指標也呈正相關(guān)。正常對照組和吡唑?qū)φ战M病理檢測無明顯異常,且兩者之間各指標無統(tǒng)計學差異,MMP2及DDR2微量表達。 結(jié)論通過給予橄欖油拌平衡飼料喂養(yǎng)及白酒、吡唑混合液灌胃可以成功建立酒精性肝纖維化大鼠模型,并觀察到病理發(fā)展過程中的肝竇毛細血管化現(xiàn)象。隨造模時間延長,DDR2、MMP2基因和蛋白表達量逐漸增加,DDR2與MMP2表達量及肝竇毛細血管化評價指標呈正相關(guān),提示DDR2可能通過MMP2介導膠原與肝星狀細胞間的相互作用,參與酒精性肝纖維化及肝竇毛細血管化的發(fā)生發(fā)展。
【學位單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2008
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

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NIMP2基因RTPCR熔解峰
【參考文獻】

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本文編號：2852646