發(fā)布時間：2020-10-22 22:18

　　 研究背景:肝纖維化是肝硬化的前期病變,各種原因引起的慢性肝病都可以引起肝纖維化。我國是慢性肝病人口大國,從這個角度來看肝纖維化的發(fā)生率較高,目前臨床上仍仍缺乏抗肝纖維化療效切確的藥物。已有大量高質(zhì)量的研究表明鈣通道阻滯劑可抑制肝纖維化甚至逆轉(zhuǎn)早期肝硬化,但其詳細(xì)機(jī)制尚不明確。本研究的目的是探討肝星狀細(xì)胞溶酶體TPC2蛋白的表達(dá)及其對HSC活化、膠原表達(dá)的影響。方法:免疫蛋白印跡檢測TGFβ1、PDGF及NAADP-TPC2通路阻滯劑Bafilomycin作用下肝星狀細(xì)胞(HSC)溶酶體鈣通道蛋白TPC2及肝星狀細(xì)胞活化標(biāo)志物a-SMA的表達(dá),同時qRT-PCR檢測膠原I mRNA的表達(dá),然后共聚焦顯微鏡檢測鈣信號在促肝纖維化因子TGFβ1作用下的變化。結(jié)果:1.TGFβ1、PDGF刺激下肝星狀細(xì)胞溶酶體鈣通道蛋白TPC2表達(dá)下調(diào),TGFβ1、PDGF刺激下HSC-lx2細(xì)胞膠原ⅠmRNA的表達(dá)上調(diào),TPC2表達(dá)水平與TGFβ1誘導(dǎo)的膠原表達(dá)呈負(fù)相關(guān);2.TGFβ1、PDGF及Bafilomycin刺激下TPC2表達(dá)下調(diào),同時a-SMA的表達(dá)上調(diào),TPC2及a-SMA的表達(dá)均表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)關(guān)系;3.TGFβ1刺激條件下細(xì)胞內(nèi)代表Ca2+水平的Fluo-3am 340nm/380nm熒光信號呈“雙峰”樣改變,提示TGFβ1刺激下出現(xiàn)了溶酶體鈣動員的“Two pool”效應(yīng)。結(jié)論:TPC2蛋白可能參與肝纖維化的發(fā)生機(jī)制,肝纖維化因子可通過下調(diào)TPC2的表達(dá),活化肝星狀細(xì)胞,誘導(dǎo)膠原的生成,進(jìn)而導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生,TPC2可能是肝纖維化潛在的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

圖 1.1 western-blot 檢測 HSC 在 TGFβ1、PDGF 刺激下 TPC2 的表達(dá)情況，P<0.01。Figure 1.1 Western blotting was used to detect the expression level of TPC2 of HSC under the stimulationof TGFβ1 and PDGF , P<0.01.圖 1.2 熒光定量 PCR 檢測肝星狀細(xì)胞膠原的表達(dá), P <0.01。Figure 1.2 qRT-PCR was used to determine the COL1A2 mRNA expression，P<0.01

圖 1.1 western-blot 檢測 HSC 在 TGFβ1、PDGF 刺激下 TPC2 的表達(dá)情況，P<0.01。Figure 1.1 Western blotting was used to detect the expression level of TPC2 of HSC under the stimulationof TGFβ1 and PDGF , P<0.01.

胞溶酶體 TPC2 蛋白的表達(dá)及意義研究 2018 屆碩士表1 TGFβ1刺激下TPC2與Collagen I mRNA表達(dá)的相關(guān)性Control TGFβ1（2.5ng/ml） TGFβ1（5.0ng/ml） TGFβ1（1達(dá)量 1 0.8028±0.1598 0.5361±0.0664 0.443ImRNA 1 1.819±0.1660 1.984±0.3126 1.933-0.828 -0.902 -0.042*0.014*0注：*表示在 0.05 水平上相關(guān),**表示在 0.01 水平上顯著相關(guān)。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2852160