研究背景:肝纖維化是肝硬化的前期病變,各種原因引起的慢性肝病都可以引起肝纖維化。我國是慢性肝病人口大國,從這個角度來看肝纖維化的發(fā)生率較高,目前臨床上仍仍缺乏抗肝纖維化療效切確的藥物。已有大量高質(zhì)量的研究表明鈣通道阻滯劑可抑制肝纖維化甚至逆轉(zhuǎn)早期肝硬化,但其詳細機制尚不明確。本研究的目的是探討肝星狀細胞溶酶體TPC2蛋白的表達及其對HSC活化、膠原表達的影響。方法:免疫蛋白印跡檢測TGFβ1、PDGF及NAADP-TPC2通路阻滯劑Bafilomycin作用下肝星狀細胞(HSC)溶酶體鈣通道蛋白TPC2及肝星狀細胞活化標志物a-SMA的表達,同時qRT-PCR檢測膠原I mRNA的表達,然后共聚焦顯微鏡檢測鈣信號在促肝纖維化因子TGFβ1作用下的變化。結果:1.TGFβ1、PDGF刺激下肝星狀細胞溶酶體鈣通道蛋白TPC2表達下調(diào),TGFβ1、PDGF刺激下HSC-lx2細胞膠原ⅠmRNA的表達上調(diào),TPC2表達水平與TGFβ1誘導的膠原表達呈負相關;2.TGFβ1、PDGF及Bafilomycin刺激下TPC2表達下調(diào),同時a-SMA的表達上調(diào),TPC2及a-SMA的表達均表現(xiàn)為負相關關系;3.TGFβ1刺激條件下細胞內(nèi)代表Ca2+水平的Fluo-3am 340nm/380nm熒光信號呈“雙峰”樣改變,提示TGFβ1刺激下出現(xiàn)了溶酶體鈣動員的“Two pool”效應。結論:TPC2蛋白可能參與肝纖維化的發(fā)生機制,肝纖維化因子可通過下調(diào)TPC2的表達,活化肝星狀細胞,誘導膠原的生成,進而導致肝纖維化的發(fā)生,TPC2可能是肝纖維化潛在的治療靶點。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

圖 1.1 western-blot 檢測 HSC 在 TGFβ1、PDGF 刺激下 TPC2 的表達情況，P<0.01。Figure 1.1 Western blotting was used to detect the expression level of TPC2 of HSC under the stimulationof TGFβ1 and PDGF , P<0.01.圖 1.2 熒光定量 PCR 檢測肝星狀細胞膠原的表達, P <0.01。Figure 1.2 qRT-PCR was used to determine the COL1A2 mRNA expression，P<0.01

圖 1.1 western-blot 檢測 HSC 在 TGFβ1、PDGF 刺激下 TPC2 的表達情況，P<0.01。Figure 1.1 Western blotting was used to detect the expression level of TPC2 of HSC under the stimulationof TGFβ1 and PDGF , P<0.01.

胞溶酶體 TPC2 蛋白的表達及意義研究 2018 屆碩士表1 TGFβ1刺激下TPC2與Collagen I mRNA表達的相關性Control TGFβ1（2.5ng/ml） TGFβ1（5.0ng/ml） TGFβ1（1達量 1 0.8028±0.1598 0.5361±0.0664 0.443ImRNA 1 1.819±0.1660 1.984±0.3126 1.933-0.828 -0.902 -0.042*0.014*0注：*表示在 0.05 水平上相關,**表示在 0.01 水平上顯著相關。
【參考文獻】

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本文編號：2852160