既往研究表明，非成熟的胸腺細胞若遭遇抗原、抗CD_3單克隆抗體、 植物血凝素（PHA）或糖皮質(zhì)激素刺激時，通常會發(fā)生凋亡。近年來發(fā)現(xiàn) 這種現(xiàn)象并不限于非成熟的免疫細胞，同樣能在成熟的外周血淋巴細胞中 出現(xiàn)。淋巴細胞經(jīng)刺激活化后再發(fā)生凋亡的現(xiàn)象被稱為激活誘導(dǎo)細胞死亡 （activation-induced cell death，AICD）。研究發(fā)現(xiàn)20％～30％的反應(yīng)性T細胞 在同種抗原的再刺激下發(fā)生凋亡，這種淋巴細胞經(jīng)活化增殖到凋亡的現(xiàn)象 被稱作本體自殺性或本體自溶性調(diào)節(jié)（propriocidal or propriolytic regulation）。這種調(diào)節(jié)可能是T細胞生理性反應(yīng)機制的一部分，同時也可 能形成一種外周淋巴細胞免疫耐受機制。 細胞免疫對于機體抵抗病毒感染起非常重要的作用，然而病原體如病 毒在巨大的生存壓力下也演化出若干能對抗機體免疫的能力。一方面，感 染細胞的凋亡是機體細胞免疫清除病毒感染的一種手段，另一方面，病毒 可利用調(diào)節(jié)免疫細胞凋亡等手段力求在體內(nèi)生存、復(fù)制及播散。目前已發(fā) 現(xiàn)一些病毒能誘導(dǎo)外周血淋巴細胞的凋亡，如人免疫缺陷病毒（HIV）、Ⅰ 型單純瘧疾病毒（HSV-1）、淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒（LCMV）等。 激活誘導(dǎo)細胞死亡（AICD）現(xiàn)象一方面限制過強的免疫反應(yīng)對機體造成的 損害，另一方面，AICD引起的外周淋巴細胞免疫耐受可能是病毒得以在 體內(nèi)長期存在的重要原因。 研究病毒感染時淋巴細胞發(fā)生的AICD現(xiàn)象及淋巴細胞的狀況對了解 病毒感染慢性化和重型化機理是非常必要的。乙型肝炎病毒（HBV）常致 慢性化和重型化感染，其機制迄今尚未充分闡明，弄清以下問題對揭示乙 型肝炎發(fā)病機理具有重要意義：HBV能否誘導(dǎo)外周血淋巴細胞發(fā)生凋亡； AICD在HBV感染中的存在情況及意義；HBV感染期間機體淋巴細胞及 其亞群狀況；ThllThZ細胞因子在HBV感染中的變化與AICD的關(guān)系。為 此，本課題就上述問題進行了系列的研究。主要研究結(jié)果及結(jié)論如下。 1．乙型肝炎患者外周血單個核細胞凋亡的檢測 通過設(shè)置不同誘導(dǎo)劑在不同濃度、不同時相誘導(dǎo)PBMC凋亡，以探索慢 性乙型肝炎PBMC發(fā)生AICD恰當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)劑類型、濃度和時間，實驗結(jié)果 顯示 PHA是一種良好的 AICD誘導(dǎo)劑，PHAo u g／10‘cells處理組接種 培養(yǎng) 72 h對 PBMC凋亡的誘導(dǎo)是恰當(dāng)?shù)摹?分離14例慢性乙型肝炎，6例漫性重型乙型肝炎病人與10例健康獻 血員外周血單個核細胞0BMC人 在PHAI的刺激下培養(yǎng)7211后收集細 胞，采用PI染色法經(jīng)流式細胞儀檢測凋亡。以研究AICD現(xiàn)象在乙型肝炎 慢性化和重型化機制中的意義。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎組PBMC凋亡率 （30．57土13．43％）高于正常對照組PBMC凋亡率（11．45土5．27％）（WO．01）， 高于慢性重型乙型肝炎組 PBMC凋亡率（13．59土 6．44％）（peo．01）；乙型 肝炎HBeAg（＋）組PBMC凋亡率高于正常對照組PBMC凋亡率門．50土 12．25％VSll．45土5．27％，peo．of）。實驗顯示不同類型的乙型肝炎PBMC 存在不同程度的AICD。 2．朋V陽性血清誘導(dǎo)人外周血單個核細胞凋亡的研究 利用 10名健康獻血員外周血分離 PBMC，分為加 HBV陽性血清組和 加健康人血清對照組，經(jīng)培養(yǎng)72 h后，采用PI染色法在流式細胞儀上檢 測細胞凋亡；利用8例慢性乙型肝炎、5例慢性重型乙型肝炎新鮮分離 PBMC、5例健康獻血員加 HBV陽性血清培養(yǎng) 72 h后的 PBMC涂片，采 用SP免疫細胞化學(xué)染色法檢測PBMC HBSAg、HBCAg的表達。研究 HBV對PBMC凋亡的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加 HBV陽性血清組培養(yǎng)細胞凋亡 率高于加健康人血清組培養(yǎng)細胞凋亡率u9．56土7．03％VS27．57土7．78％， P＜O刀2人 免疫細胞化學(xué)染色顯示，慢性／慢性重型乙型肝炎患者＊＊＊C與 加 HBV陽性血清培養(yǎng)后的健康人PBMC皆有HBSAg、HBCAg的陽性表達。 結(jié)果提示，HBV感染可能具有誘導(dǎo)PBMC凋亡的能力，這可能是形成HBV t＠性感染兔疫耐受的一個重要機制。HBV感染PBMC是否強化誘導(dǎo)AICD， XI 、O 尚需進一步研究加以證明。 3．乙型肝炎患者外周血單個核細胞Fas表達的檢測 分離 16例慢性乙型肝炎患者、14例慢性重型乙型肝炎患者和 12例健 康獻血員PBMC，利用間接兔疫熒光染色法，通過流式細胞儀檢測PBMC Fas的表達以探討活化誘導(dǎo)細胞死亡（AICD）在乙型肝炎中的發(fā)生機制及 意義。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎組 PBMC Fas表達率u3．31土14．53們 高于正常刑照組 PBMC Fas表達率（39．32土 11．28％）（P＜0．05）和慢性 重型乙型肝炎組 PBMC Fas表達率（37．93土15．89％）（P＜0．of）。結(jié) 合第一部分實驗，慢性乙型肝炎組PBMC凋亡率＊0．57士13．43肋高于正 常對照組 PBMC凋亡率（11．45土5．27％）（P（．of）和慢性重型乙型肝炎組 PBMC凋亡率（1
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2001
【中圖分類】：R512.62
【文章目錄】：
英文縮寫注釋
英文摘要
中文摘要
論文正文 激活誘導(dǎo)細胞死亡在乙型肝炎發(fā)病機制中的意義
    第一部分 乙型肝炎患者外周血單個核細胞凋亡的檢測
    第二部分 HBV陽性血清誘導(dǎo)人外周血單個核細胞凋亡的研究
    第三部分 乙型肝炎患者外周血單個核細胞Fas表達的檢測
    第四部分 慢性重型乙型肝炎肝內(nèi)淋巴細胞激活誘導(dǎo)細胞死亡現(xiàn)象的探測
    第五部分 乙型肝炎患者淋巴細胞亞群的檢測與AICD變化的關(guān)系
    第六部分 乙型肝炎患者血清和PBMC培養(yǎng)上清Th1細胞因子（IL-2）與Th2細胞因子（IL-10）的檢測
總結(jié)
研究中存在的問題及展望
致謝
照片
參考文獻
文獻綜述
    文獻綜述一 病毒的反防御手段
    文獻綜述二 細胞凋亡的分子機制及其調(diào)控因子
    文獻綜述三 Th1/Th2細胞平衡與病毒性肝炎
攻讀博士學(xué)位期間撰寫的文章

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 何東茍,陳柏銘,林勇平;病毒性肝炎患者兩類免疫效應(yīng)細胞的功能變化[J];臨床肝膽病雜志;2000年01期

2 駱抗先,朱幼芙,何海棠,王新生,章廉;慢性乙型肝炎和肝病中Fas和FasL表達的原位研究[J];中華傳染病雜志;1998年03期

3 胡瑾華,張玲霞,朱克順,王松山,趙景民,程云,王慧芬,王琳杰;慢性乙型肝炎肝組織表達FasL蛋白、mRNA及Fas的實驗研究[J];中華傳染病雜志;1999年01期

4 郭亞兵,張繼鎖,侯金林,姜榮龍,楊云芬,章廉,顧小維,駱抗先;外周血單個核細胞與血清中HBV DNA及其變異比較[J];中華傳染病雜志;1999年01期

本文編號：2852096