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干擾素治療慢性丙型肝炎患者T細(xì)胞亞群及PD-1、B細(xì)胞的表達(dá)變化

發(fā)布時間：2020-10-22 01:03

　　目前全球大約有2億人感染HCV，而丙型肝炎慢性化的比列高達(dá)60%-70%，其中5%-20%發(fā)展為纖維化，所以慢性丙型肝炎（chronic hepatitis C，CHC）已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類健康的公共衛(wèi)生問題。有研究發(fā)現(xiàn)，丙型肝炎慢性化的主要成因包括病毒迅速變異導(dǎo)致對機體的免疫逃避，以及人體內(nèi)的淋巴細(xì)胞出現(xiàn)功能缺失而不能有效清除病毒。人體內(nèi)淋巴細(xì)胞出現(xiàn)功能缺失可能與T細(xì)胞凋亡、外周組織耐受和T細(xì)胞疲耗等機制有關(guān)，也可能與B細(xì)胞功能失調(diào)有關(guān)。B細(xì)胞功能失調(diào)，國外有學(xué)者報道認(rèn)為HCV感染者B淋巴細(xì)胞升高，考慮CHC患者長期丙肝病毒抗原刺激，導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞不斷克隆增殖所致，而在國內(nèi)尚未見有關(guān)B淋巴細(xì)胞變化報道。國外許多學(xué)者認(rèn)為T細(xì)胞（包括HCV特異性效應(yīng)CD8+T細(xì)胞和輔助性CD4+T細(xì)胞）功能失調(diào)與PD-1及其配體表達(dá)上調(diào)有關(guān)。 PD-1,被命名為程序性死亡分子，可在CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、自然殺傷性T細(xì)胞（NKT）、B細(xì)胞和單核細(xì)胞等表面誘導(dǎo)表達(dá)。功能分析表明，PD-1的胞質(zhì)功能域包含兩個酪氨酸信號傳遞基序，磷酸化后可與酪氨酸磷酸化酶SHP-2結(jié)合，使下游效應(yīng)分子如酪氨酸激酶（Syk）和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)脫磷酸化，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。PD-1和相應(yīng)配體PD-L結(jié)合后，產(chǎn)生一種免疫抑制信號，抑制了CD4+T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能及CD8+T細(xì)胞的病毒清除功能，使HCV不能被有效的清除，導(dǎo)致丙肝感染的慢性化。慢性丙型肝炎的治療主要以抗病毒為主，其公認(rèn)的國際標(biāo)準(zhǔn)治療方案是聚乙二醇干擾素(Pegylated interferon,PEG-IFN)聯(lián)合利巴韋林(ribavirin, RBV),主要通過免疫調(diào)節(jié)、增加機體抗病毒免疫功能和直接抑制病毒復(fù)制的雙重作用機制，可使治療的持續(xù)應(yīng)答率由普通干擾素的40%提高至70%左右,但在現(xiàn)有的治療條件下,仍有相當(dāng)一部分患者對治療無應(yīng)答或治療后復(fù)發(fā)。對于干擾素治療療效的預(yù)測一直是近年研究的熱點，目前認(rèn)為,病毒因素和宿主因素共同影響著干擾素治療的結(jié)局。此外,治療過程中不同的病毒學(xué)應(yīng)答模式對治療效果的預(yù)測有著重要價值。對于不同應(yīng)答模式下T細(xì)胞亞群及其表面PD-1的表達(dá)、B細(xì)胞的變化，目前國內(nèi)相關(guān)報道較少。本研究對采用PEG-IFNα-2a聯(lián)合利巴韋林治療的141例慢性丙型肝炎患者中篩選出出現(xiàn)快速病毒學(xué)應(yīng)答20例及無應(yīng)答患者20例進(jìn)行了回顧性分析.觀察干擾素治療過程中慢性丙型肝炎患者T細(xì)胞亞群及其表面PD-1、B細(xì)胞表達(dá)水平，探討CHC患者干擾素治療過程中出現(xiàn)快速病毒學(xué)應(yīng)答及無應(yīng)答患者的機體免疫狀況及其與PD-1的關(guān)系。研究目的觀察干擾素治療慢性丙型肝炎患者T細(xì)胞亞群(CD4T+、CD8T+)及其表面PD-l、B細(xì)胞表達(dá)水平變化及其臨床意義。研究方法受試對象為接受聚乙二醇化干擾素α-2a抗病毒治療的141例慢性丙型肝炎患者中篩選出快速病毒學(xué)應(yīng)答者(RVR)20例，無應(yīng)答者(NR)20例。并以20例健康體檢者作為正常對照組。采用流式細(xì)胞儀分別檢測慢丙肝治療前及治療12周時外周血T細(xì)胞亞群及其表面PD-1的表達(dá)、B細(xì)胞的表達(dá)水平；全自動生化分析儀檢測ALT、TBIL水平；采用COBAS AmpliPrep/COBASTaqMan48自動載量儀檢測HCV-RNA載量。研究結(jié)果 1.與正常對照組比較，慢性丙型肝炎患者CD4+T細(xì)胞增高,CD4+T/CD8+T增高,CD19+B細(xì)胞增高,CD8+T細(xì)胞降低, T細(xì)胞亞群(CD4T+、CD8T+)表面PD-1的表達(dá)明顯升高，結(jié)果均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。 2.慢性丙型肝炎患者血清ALT水平、TBIL水平與外周血T細(xì)胞亞群(CD4T+、CD8T+)表面PD-1的表達(dá)之間，其相關(guān)性分析的結(jié)果呈現(xiàn)負(fù)數(shù)，但統(tǒng)計學(xué)分析其差異無顯著性意義（P0．05）。外周血T細(xì)胞亞群(CD4T+、CD8T+)表面PD-1的表達(dá)與與HCV-RNA載量無相關(guān)性（r=-O．105，0．268，P0．05）。 3.聚乙二醇化干擾素治療慢性丙型肝炎患者12周時，無應(yīng)答組與快速病毒學(xué)應(yīng)答組患者比較，CD4+T細(xì)胞增高，CD4+T/CD8+T增高，CD19+B細(xì)胞增高,CD8+T細(xì)胞降低，結(jié)果均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01或＜0.05）。無應(yīng)答組患者T細(xì)胞亞群（CD4T+、CD8T+）上表達(dá)的PD-1明顯升高，其差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。研究結(jié)論 1.慢性丙型肝炎患者體內(nèi)存在T細(xì)胞亞群失衡及B淋巴細(xì)胞升高，經(jīng)PEG-IFN治療后，其免疫功能得到一定恢復(fù)。 2.PD-1的高表達(dá)與HCV持續(xù)感染有關(guān)，可能是導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞應(yīng)答能力下降的重要原因。 3.PD-1的表達(dá)與血清HCV-RNA水平、ALT水平、TBIL水平均無相關(guān)性。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R512.63
【部分圖文】：

外周血,患者,細(xì)胞,情況

表 3.CHC 患者與正常對照組外周血 T、B 細(xì)胞比較Table 3.The comparison on the frequency of peripheral blood T cell subsets 、B cells in CHCpatients and control groupGroup Cases CD4+T（%） CD8+T（%） CD4+T/CD8+T CD19+B（%）CHC 40 50.06±3.54 22.89±2.03 2.19±0.16 15.68±2.83Control 20 36.56±3.36 30.59±2.86 1.20±0.07 10.73±2.70t -12.38 9.81 25.80 -5.65P <0.01 <0.01 <0.01 <0.01

外周血,患者,細(xì)胞,情況

圖 2.CHC 患者外周血 CD4+T 細(xì)胞和 CD8+T 細(xì)胞、CD19+B 細(xì)胞表達(dá)情況Fig 2. the frequency of peripheral blood T cell subsets、B cells in CHC patients3. CHC 患者與正常對照組外周血 CD4+T 細(xì)胞和 CD8+T 細(xì)胞表面 PD-1 的表達(dá)比較與正常對照組比較，慢性丙型肝炎患者 CD4+T 細(xì)胞及 CD8+T 細(xì)胞上表達(dá)的PD‐1 明顯升高，具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），見表 4、圖 3、圖 4。表 4. CHC 患者與正常對照組外周血 T 細(xì)胞亞群表面 PD-1 表達(dá)比較Table 4. The comparison on the PD-1 expression of CD4+and CD8+T cells in CHC patients andcontrol group

外周血T細(xì)胞亞群,表面