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高鹽對(duì)幽門(mén)螺旋桿菌粘附相關(guān)基因表達(dá)以及粘附能力的影響

發(fā)布時(shí)間:2020-10-21 16:32
   目的幽門(mén)螺旋桿菌是全球廣泛流行的嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的革蘭氏陰性桿菌。幽門(mén)螺旋桿菌粘附定植于胃黏膜之后,進(jìn)行大量增殖,并且毒力因子CagA通過(guò)T4SS系統(tǒng)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn)高鹽可以導(dǎo)致更多的CagA進(jìn)入細(xì)胞。本研究旨在探討不同鹽濃度對(duì)幽門(mén)螺旋桿菌黏附能力以及粘附相關(guān)基因表達(dá)的影響。方法用選擇性的固體培養(yǎng)基進(jìn)行幽門(mén)螺旋桿菌培養(yǎng)。采用革蘭氏染色對(duì)幽門(mén)螺旋桿菌進(jìn)行染色,并在顯微鏡下觀(guān)察不同鹽濃度對(duì)其形態(tài)學(xué)的影響。用TRIzol提取總RNA,用實(shí)時(shí)定量PCR (qRT-PCR)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)和不同鹽濃度下粘附相關(guān)基因babA2、sabA、alpA/B、oipA、hopZ的表達(dá)。采用Skindersoe等學(xué)者開(kāi)發(fā)的定量檢測(cè)粘附能力的方法檢測(cè)高鹽對(duì)幽門(mén)螺旋桿菌的粘附能力的影響。采用SPSS 19進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果高鹽能夠抑制幽門(mén)螺旋桿菌的增殖,隨著鹽濃度的增加,球形的幽門(mén)螺旋桿菌比例越來(lái)越大。qRT-PCR的結(jié)果顯示,在48小時(shí),粘附相關(guān)基因babA2、sabA、 alpA/B、oipA、hopZ的表達(dá)隨著鹽濃度的增加而上升,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在24和72小時(shí),粘附相關(guān)基因的表達(dá)并沒(méi)有統(tǒng)一的規(guī)律。選擇在不同鹽濃度培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)的幽門(mén)螺旋桿菌和胃癌細(xì)胞SGC-7901進(jìn)行粘附實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)在不同的感染指數(shù)(MOI為100:1和200:1)時(shí),高鹽對(duì)幽門(mén)螺旋桿菌粘附細(xì)胞的能力沒(méi)有明顯影響(P0.05)。結(jié)論高鹽能夠抑制幽門(mén)螺旋桿菌的增殖,隨著鹽濃度的增加,球形的幽門(mén)螺旋桿菌比例越來(lái)越多。在48小時(shí),粘附相關(guān)基因babA2、sabA、alpA/B、oipA、hopZ的表達(dá)隨著鹽濃度的增加而上升。幽門(mén)螺旋桿菌的粘附能力不隨著鹽濃度的增加而升高。
【學(xué)位單位】:蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2015
【中圖分類(lèi)】:R735.2;R573
【部分圖文】:

菌落,革蘭氏染色,培養(yǎng)的,微需氧


按照方法學(xué)中的流程進(jìn)行幽口螺旋桿菌的復(fù)蘇,微需氧培養(yǎng)72小時(shí)之,培??養(yǎng)板可見(jiàn)針尖樣的、透明的菌落;用無(wú)菌牙簽挑取少許菌落進(jìn)行革蘭氏染色,濕??微鏡下可レッ看見(jiàn)大量的螺旋形、海轉(zhuǎn)狀的革蘭巧陰性的細(xì)菌(圖1)。用無(wú)菌牙??簽挑取少許菌落進(jìn)行快速尿素酶試驗(yàn),放入菌落時(shí)反應(yīng)液立即由黃色變?yōu)槊倒寮t??(圖2)。通過(guò)革蘭氏染色和快速尿素酶試驗(yàn)證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)茜是幽口螺旋桿菌。??I?k-'?,?(?-??‘?,’?■?.?.?.??-?■.??????、???-二?'??巧/—?j??<?-?'?,i:'?‘??-0?^?興????-?’、?i?-????I.?r.?i?■'??/■、,???????-?一??.-'V?'?、乂?'?、一??,分?’‘手'恭1??I';.、?■為??t??.??圖1幽口螺旋桿菌的革氏染色(400X?)??Fig.l?Gram?staining?of?H.pylori?(40〇x?)??3.2高鹽對(duì)巧口巧旋巧菌増殖能力的巧響??將正常培養(yǎng)的細(xì)茵接種于不同鹽濃度的血平板培養(yǎng)基上,在24、48和72小??時(shí)用1?mLPBS沖洗、收集幽口螺旋桿菌

革蘭氏染色,鹽濃度,螺旋桿,油鏡


采用革蘭氏染色,400?X油鏡下觀(guān)察不同鹽濃度對(duì)幽口螺旋桿菌形態(tài)學(xué)的影??響。發(fā)現(xiàn)隨著鹽濃度的増加,桿狀的幽口螺旋桿菌明顯減少,球形的幽口螺旋桿??菌明顯増加。(圖4)??A?0?,?B??->??????I?■、??.?■?-;?.?■—??I?/?'?—?’?*??■?<?'八'一??*?〇??J?^??C?D.?.?'?‘V;,.’..■??4?r?.?.?..?.一?J?'■??'?..V/'Y/''一;?d'?>?’??V.?■?0?V.'??*r?'??圖4不同濃度NaCl對(duì)W.巧沁n?形態(tài)學(xué)的影響(A!正常:B!?0.5%NaCl;?C:?1.0%NaCl:?D!??1.5%NaCl)(革蘭氏染色400X)??Fig.4?Impact?of?different?salt?concentrations?to?morphology?of?H.pylori?(A:?Normal;?B:?0.5%??NaCl;?C:?1.0%?NaCl;?0:1.5%?NaCl)?(Gram?staining?400?X?)??3.4高鹽對(duì)于幽口巧旋桿菌巧附相關(guān)基因的巧響??3.4.1?babA2??在24小時(shí),H組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(/?〉0.05)。在48小時(shí),1.0%NaCl組??和1.5%?NaCl組的表達(dá)量均明顯高于0.5%?NaCl組,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(戶(hù)<??0.05)。在72小時(shí),1.0%?NaCl組的表達(dá)量與0.5〇/〇?NaCl組無(wú)差異(戶(hù)>0.05),??1.5%?NaCl組的表達(dá)量明顯高于0.5%?NaCl組

菌落,革蘭氏染色,培養(yǎng)的,微需氧


按照方法學(xué)中的流程進(jìn)行幽口螺旋桿菌的復(fù)蘇,微需氧培養(yǎng)72小時(shí)之,培??養(yǎng)板可見(jiàn)針尖樣的、透明的菌落;用無(wú)菌牙簽挑取少許菌落進(jìn)行革蘭氏染色,濕??微鏡下可レッ看見(jiàn)大量的螺旋形、海轉(zhuǎn)狀的革蘭巧陰性的細(xì)菌(圖1)。用無(wú)菌牙??簽挑取少許菌落進(jìn)行快速尿素酶試驗(yàn),放入菌落時(shí)反應(yīng)液立即由黃色變?yōu)槊倒寮t??(圖2)。通過(guò)革蘭氏染色和快速尿素酶試驗(yàn)證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)茜是幽口螺旋桿菌。??I?k-'?,?(?-??‘?,’?■?.?.?.??-?■.??????、???-二?'??巧/—?j??<?-?'?,i:'?‘??-0?^?興????-?’、?i?-????I.?r.?i?■'??/■、,???????-?一??.-'V?'?、乂?'?、一??,分?’‘手'恭1??I';.、?■為??t??.??圖1幽口螺旋桿菌的革氏染色(400X?)??Fig.l?Gram?staining?of?H.pylori?(40〇x?)??3.2高鹽對(duì)巧口巧旋巧菌増殖能力的巧響??將正常培養(yǎng)的細(xì)茵接種于不同鹽濃度的血平板培養(yǎng)基上,在24、48和72小??時(shí)用1?mLPBS沖洗、收集幽口螺旋桿菌
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;咖啡可抑制幽門(mén)螺旋桿菌[J];浙江中醫(yī)雜志;2001年06期

2 ;幽門(mén)螺旋桿菌感染研究與治療進(jìn)展(五) 第五節(jié) 根除幽門(mén)螺旋桿菌治療的關(guān)鍵[J];中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào);2002年05期

3 ;幽門(mén)螺旋桿菌的適應(yīng)性[J];廣西科學(xué);2004年03期

4 ;幽門(mén)螺旋桿菌根除治療評(píng)價(jià)[J];山西中醫(yī);2006年02期

5 湯朝騫;徐冰;;幽門(mén)螺旋桿菌的研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2007年12期

6 李瑜元 ,胡品津;第4屆東京國(guó)際幽門(mén)螺旋桿菌會(huì)議[J];新醫(yī)學(xué);1991年09期

7 ;新的清除幽門(mén)螺旋桿菌的兩藥合用療法[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);1994年01期

8 ;根除幽門(mén)螺旋桿菌治療三注意[J];醫(yī)藥與保健;2012年10期

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

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2 王秀蓮;幽門(mén)螺旋桿菌在阿爾茨海默病發(fā)病中的作用和機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2014年


相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 包雯婷;抗幽門(mén)螺旋桿菌治療于成人特發(fā)性血小板減少性紫癜的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 郭繼武;高鹽對(duì)幽門(mén)螺旋桿菌粘附相關(guān)基因表達(dá)以及粘附能力的影響[D];蘭州大學(xué);2015年

3 李彤;小兒幽門(mén)螺旋桿菌的流行病學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2006年

4 張大良;幽門(mén)螺旋桿菌感染與化療所致惡心、嘔吐的關(guān)系研究[D];鄭州大學(xué);2014年

5 王曉冬;雙歧三聯(lián)活菌制劑在根除幽門(mén)螺桿菌中作用的臨床研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

6 胡榮;幽門(mén)螺旋桿菌抗原檢測(cè)試劑生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制的研究[D];吉林大學(xué);2013年

7 白芳;C反應(yīng)蛋白及幽門(mén)螺旋桿菌與房顫的相關(guān)性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

8 潘虹;中藥根除幽門(mén)螺旋桿菌的研究(體外耐藥反應(yīng)實(shí)驗(yàn))[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2011年

9 康慧;具有抑制幽門(mén)螺旋桿菌黏附性的牛乳蛋白的研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2009年

10 楊欽磊;幽門(mén)螺旋桿菌甲酰胺酶催化羥胺和酰胺反應(yīng)機(jī)理的理論研究[D];西南大學(xué);2012年



本文編號(hào):2850354

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