背景與目的：共生菌Faecalibacterium prausnitzii(F. prausnitzii)近來受到廣泛關(guān)注,該細(xì)菌在炎癥性腸病(IBD)患者體內(nèi)減少,和IBD的發(fā)展有一定相關(guān)性。本研究旨在觀察F. prausnitzii及其產(chǎn)物對(duì)2、4、6三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎的保護(hù)作用和對(duì)離體細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響,初步探討F. prausnitzii抑制炎癥的機(jī)制。 方法：40只Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為正常組(control group)、結(jié)腸炎組(colitis group)、上清組(supernatant group)、FP組(F. prausnitzii group)、雙歧組(B.longum group),后四組用TNBS灌腸造模并于造模前5天和造模后1天分別用PBS緩沖液、F. prausnitzii上清液、F. prausnitzii活菌、雙歧桿菌活菌灌胃。造模48h后,處死大鼠,行結(jié)腸病理學(xué)檢查；用氣相色譜法檢測(cè)結(jié)腸糞便短鏈脂肪酸(short-chain fatty acid, SCFA)含量；ELISA檢測(cè)血漿白介素-10(IL-10)、血漿白介素-12(IL-12)、血漿白介素-17(IL-17)和血漿白介素-23(IL-23)水平；免疫組化法檢測(cè)腸粘膜IL-17的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)部分：分別使用PBS緩沖液、F. prausnitzii上清液、F. prausnitzii菌、雙歧桿菌和丁酸鈉干預(yù)骨髓來源大鼠DC細(xì)胞(Bone marrow DC cells, BMDC)和細(xì)胞因子(transforming growth factor p, TGF-β和IL-6)刺激后的離體大鼠脾臟細(xì)胞；另分別使用F. prausnitzii培養(yǎng)基、不同濃度的F.prausnitzii上清液、F. prausnitzii菌、雙歧桿菌刺激正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC).使用ELISA方法檢測(cè)脾細(xì)胞和PBMC培養(yǎng)液中IL-10,IL-12,IL-17,IL-23的含量。 結(jié)果：與正常組大鼠相比,結(jié)腸炎組大鼠體重下降[(7.14±7.54)%對(duì)(-4.88±4.05)%]、腸粘膜病理評(píng)分升高[(1+0.99)對(duì)(3.34±0.38)]、血漿[(16.61±2.45)pg/ml對(duì)(20.47±1.45)pg/m1]和結(jié)腸組織中IL-17表達(dá)評(píng)分上調(diào)[(0.83±0.98)對(duì)(5.14±0.9)](P值均0.05)。而相對(duì)結(jié)腸炎組,F. prausnitzii上清液可以明顯抑制大鼠體重下降[(0.5±4.34)%]、降低結(jié)腸粘膜病理評(píng)分(2.5±0.44)、使血漿[(17.54±1.51)pg/ml]和結(jié)腸組織中IL-17表達(dá)評(píng)分下調(diào)(2.86±0.69)(P值均0.05)。相對(duì)正常組大鼠,結(jié)腸炎組大鼠糞便SCFA,總量減少[(34.13±10.97)umol/g對(duì)(30.89±9.12)umol/g],未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.53),但是丁酸比例明顯減少[(0.19±0.09)對(duì)(0.11±0.02),P0.01]。相對(duì)于結(jié)腸炎組,FP組大鼠糞便丁酸比例明顯升高[(0.11±0.02)對(duì)(0.2±0.05),P0.01],并且丁酸含量[(4.37±2.94)μmol/g對(duì)(9.98±4.43) μmol/g,(P0.01)]和SCFA,總量[(30.89±9.12)umol/g對(duì)(43.97±5.6)μmol/g, P0.05]均明顯增加。體外實(shí)驗(yàn)部分：與陰性對(duì)照組(cont, control group)相比,BMDC和細(xì)胞因子(TGF-13和IL-6)均顯著提高了脾細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-17的表達(dá)[(182.2±89.12)pg/ml對(duì)(309.24±21.3)pg/ml；(17.36±0.38)pg/ml對(duì)(20.54±2.12)pg/ml](P值均0.05),而相對(duì)陽性對(duì)照組(PBS, PBS group),上清液組(Fps, supernatant group)培養(yǎng)液中IL-17的表達(dá)明顯降低[(309.24±21.3)pg/ml對(duì)(58.11±19.2)pg/ml；(20.54±2.12)pg/ml對(duì)(17.25±0.42)pg/ml](P值均0.05)。PBMC刺激實(shí)驗(yàn)中,相對(duì)于F. prausnitzi培養(yǎng)基組(medium),各濃度F. prausnitzii上清液組的IL-10和IL-10/IL-12表達(dá)均顯著升高并呈劑量依賴性,其中一倍上清液組(1supernatant)IL-10和IL-10/IL-12表達(dá)最高：[(3.52±2.08)pg/ml對(duì)(768.95±263.57)pg/ml,P0.001)]和(3.99±2.43對(duì)914.68±579.67,P0.001)。 結(jié)論：F. prausnitzii及其產(chǎn)物可以通過調(diào)節(jié)IL-17在內(nèi)的炎癥相關(guān)細(xì)胞因子分泌來發(fā)揮對(duì)TNBS模型大鼠的保護(hù)作用,但兩者作用方式不同：F. prausnitzii作用于Th17的效應(yīng)階段,通過抑制機(jī)體表達(dá)IL-23從而抑制IL-17介導(dǎo)的促炎作用,而F prausnitzii產(chǎn)物作用于Th17的分化階段,通過抑制Th17的產(chǎn)生從而抑制免疫反應(yīng)。F. prausnitzii產(chǎn)物的抗炎效應(yīng)強(qiáng)于F. prausnitzii.此外,F. prausnitzii于人類可能也存在類似效應(yīng)。
【學(xué)位單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R574.62
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄一 縮略詞表
附錄二 試劑配制
致謝
作者簡(jiǎn)介

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2 賴遠(yuǎn)全,孫燕,余琴,章金艷,劉南植;核因子-κB在結(jié)腸炎的表達(dá)及地塞米松對(duì)其影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2004年04期

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本文編號(hào)：2847875