發(fā)布時間：2020-10-19 23:02

　　 目的：篩選能有效治療實驗性結(jié)腸炎的適宜的嗜酸乳酸桿菌濃度,并對其進(jìn)行治療結(jié)腸炎的療效評價。 方法：采用2.5%DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎模型,70只Balb/c小鼠隨機(jī)分為7組：模型組、陰性對照組(菌粉保護(hù)劑組)、陽性對照組(美沙拉嗪組)、嗜酸乳桿菌低劑量組(1×106CFU/mL)、中劑量組(1×107CFU/mL)、高劑量組(1×108CFU/mL)、正常組。實驗期間每日觀察小鼠進(jìn)食、飲水、活動等一般情況,稱量體重,觀察糞便性狀及糞便隱血、便血情況,計算DAI積分,評估結(jié)腸炎嚴(yán)重程度。實驗第7天,乙醚麻醉狀態(tài)下處死小鼠,解剖腹腔,觀察結(jié)腸的大體改變、測量長度。剪取距肛門2 cm左右病變的結(jié)腸段,縱向剖開冰生理鹽水沖洗干凈后,一部分結(jié)腸組織經(jīng)中性甲醛溶液固定后,石蠟包埋切片行HE染色,其余結(jié)腸組織液氮保存以備它用。 結(jié)果：模型組小鼠DAI積分及組織病理學(xué)積分要明顯高于正常組(7.81±1.02 VS 0,5.80±2.94 VS 0,P0.05),嗜酸乳桿菌低中高劑量組和美沙拉嗪干預(yù)后,小鼠DAI積分及組織病理學(xué)積分較模型組有明顯下降(6.20±2.64,5.00±1.21,5.72±2.63,5.81±1.32VS7.81±1.02：4.25±2.05,2.56±1.81,2.20±1.12,3.10±2.60VS 5.80±2.94,P0.05)。 結(jié)論：嗜酸乳桿菌可明顯改善小鼠結(jié)腸組織損傷,其中以高濃度級嗜酸乳酸桿菌干預(yù)組(1×108 CFU/mL)小鼠結(jié)腸炎癥狀緩解最明顯。 目的：針對腸道菌群生物群落結(jié)構(gòu)復(fù)雜,采用PCR-SSCP的方法獲得腸道菌群圖譜,平板培養(yǎng)計數(shù)的方法獲得常見菌群的變化。比較模型組和正常組小鼠的腸道菌群的圖譜變化,分析小鼠腸道微生物多樣性的總體變化和可培養(yǎng)細(xì)菌菌群的變化,為腸道菌群結(jié)構(gòu)解析提供有效手段。 方法：運用平板計數(shù)和基于細(xì)菌16sRNA的PCR-SSCP技術(shù)分析。20只Balb/c小鼠隨機(jī)分為2組,正常組和模型組各10只,模型組每天給與2.5%DSS自由飲用,造成急性潰瘍性結(jié)腸炎模型,在第7天乙醚麻醉狀態(tài)下處死小鼠,分離結(jié)腸,提取細(xì)菌組DNA進(jìn)行PCR-SSCP分析,針對優(yōu)勢條帶回收克隆測序,初步確定腸道中差異明顯的微生物細(xì)菌種類。并留取部分遠(yuǎn)端結(jié)腸進(jìn)行菌群定植數(shù)量分析。 結(jié)果：實驗性結(jié)腸炎小鼠與正常小鼠相比,腸道菌群中腸球菌和腸桿菌數(shù)量增多,乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量明顯減少。兩組研究對象的腸道菌叢存在整體差異。SSCP指紋圖譜分析顯示,實驗性結(jié)腸炎小鼠細(xì)菌微生物區(qū)系的多樣性明顯減少。正常組10個樣本主帶分布非常一致,均出現(xiàn)在約0.6-0.7 kb處,而模型組主帶位置無統(tǒng)一趨勢。測序結(jié)果表明模型組與正常小鼠菌群比較主要是不可培養(yǎng)細(xì)菌的差異。給予嗜酸乳桿菌干預(yù)后可以調(diào)節(jié)遠(yuǎn)端結(jié)腸中腸道菌群的組成,雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量增加,金黃色葡萄球菌數(shù)目減少,總需氧菌、擬桿菌無明顯變化。其中以嗜酸乳桿菌1×108CFU/ml濃度級組腸道菌群變化最明顯,干預(yù)效果最佳。 結(jié)論：實驗性結(jié)腸炎小鼠腸道菌群分析提示存在菌群失調(diào),乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量減少,金黃色葡萄球菌和總需氧菌明顯增多。腸道菌群多樣性減少,腸道優(yōu)勢菌群種類少,細(xì)菌種群發(fā)生變化,與正常小鼠相比較主要是不可培養(yǎng)細(xì)菌的差異。平板培養(yǎng)結(jié)果表明,給予不同濃度嗜酸乳桿菌干預(yù)后,可以調(diào)節(jié)腸道菌群的組成,總?cè)樗釛U菌和雙歧桿菌數(shù)目增加,金黃色葡萄球菌數(shù)目明顯減少,總需氧菌數(shù)目無明顯變化；其中以嗜酸乳桿菌1×108CFU/ml濃度級組有療效最佳。 目的：探討不同濃度的嗜酸乳酸桿菌對實驗性結(jié)腸炎模型鼠起治療作用的免疫學(xué)機(jī)制。研究嗜酸性乳酸桿菌對與IBD發(fā)病密切相關(guān)的Th1/Th2免疫軸相關(guān)IL-12/STAT4/T-bet.IFN-γ/STAT1／T-bet、IL-4/GATA3信號途徑中的主要相關(guān)細(xì)胞因子和信號因子的影響,為進(jìn)一步探索嗜酸乳酸桿菌治療實驗性結(jié)腸炎機(jī)制以及用量提供幫助。 方法：實驗動物、分組、模型建立及給藥方案與第一章相同,在實驗結(jié)束時處死動物留取各組結(jié)腸標(biāo)本,RT-PCR方法檢測小鼠結(jié)腸黏膜中細(xì)胞因子IL-12、IL-4、IFN-γ及信號因子T-bet、STAT1、STAT4和GATA3的表達(dá),western blotting和免疫組化檢測T-bet在結(jié)腸組織的表達(dá)量及表達(dá)部位。 結(jié)果：嗜酸乳桿菌低中高劑量組及美沙拉嗪干預(yù)后在細(xì)胞因子水平,嗜酸乳桿菌可明顯降低IFN-γ、IL-12的表達(dá)(0.79±0.21,0.68±0.01,0.62±0.09,0.77±0.12 VS 0.76±0.03,P0.05；0.36±0.02,0.37±0.04,0.35±0.13,0.35±0.05 VS0.52±0.02,P0.05),增加IL-4(0.78±0.11,0.75±0.03,0.82±0.06,0.81±0.12 VS 0.60±0.04,P0.05)的表達(dá)。其中又以嗜酸乳桿菌高劑量組效果最佳(0.62±0.09 VS 0.76±0.03:0.35±0.13 VS0.52±0.02,P0.05：0.82±0.06 VS0.60±0.04,P0.05)。 嗜酸乳桿菌低中高劑量組及美沙拉嗪干預(yù)后在核酸水平轉(zhuǎn)錄因子STAT1、T-bet、STAT4的表達(dá)較模型組降低(0.59±0.05,0.55±0.04,0.54±0.06,0.45±0.04 VS0.76±0.05；0.28±0.12,0.27±0.03, 0.23±0.04VS0.41±0.01,P0.05；0.36±0.02VS0.41±0.01,P0.05；0.80±0.03,0.77±0.02,0.72±0.15,0.76±0.14 VS0.94±0.21,P0.05), GATA3的表達(dá)升高(0.78±0.25, 0.75±0.23, 0.82±0.16,0.81±0.09 VS 0.60±0.23,P0.05),但仍低于正常組(VSO.88±0.19,P0.05)。而T-bet的蛋白表達(dá)水平和免疫組織化學(xué)表達(dá)都與mRNA表達(dá)水平有相同的趨勢,較模型組降低(0.27±0.04,0.23±0.02,0.18±0.04,0.27±0.11VS0.30±0.04；0.263±0.045,0.234±0.015,0.114±0.025,0.252±0.024 VS 0.322±0.064,P0.05)。其中又以嗜酸乳桿菌高劑量組干預(yù)效果最佳(0.18±0.04VS0.30±0.04,0.114±0.025 VS 0.322±0.064,P0.05). 結(jié)論：嗜酸乳酸桿菌能有效改善實驗性結(jié)腸炎的黏膜炎癥,其部分作用機(jī)制可能是通過抑制IFN-γ／STAT1、IL-12/STAT4信號途徑,相對激活I(lǐng)L-4/GATA3信號途徑,從而達(dá)到對實驗性結(jié)腸炎的治療作用。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R574.62
【部分圖文】：

菌和美沙拉嗦治療后，小鼠體質(zhì)量下降變緩，腹瀉和糞便隱血情況好轉(zhuǎn)。在第7天各干預(yù)組體質(zhì)量下降要明顯低于模型組(尸<0.05)，嗜酸乳桿菌高劑量組對體質(zhì)量減輕的保護(hù)強(qiáng)于中低劑量組和美沙拉嗦(尸>0.05，圖1一1)。~~~人棋型組 組~~~B陰性對照 照 CCC陽性對照組 組一 一DIO6組 組一一E107組 組~~~F108組 組一一G正常組 組牟粼叫牲滋冷承圖1一 1UC急性期各組小鼠體質(zhì)量變化(相對于實驗第1天，體重增加為正值，體重減輕為負(fù)值)o1.2小鼠結(jié)腸大體情況及結(jié)腸長度的變化處死小鼠解剖腹腔，見正常小鼠結(jié)腸顏色呈淡紅色，腸腔內(nèi)糞便成形，縱行剖開觀察可見勃膜完整光滑，無糜爛和潰瘍。模型組和陰性對照組小鼠結(jié)腸腸壁變薄，結(jié)腸長度明顯縮短，腸腔內(nèi)可見不成形便，部分小鼠腸腔內(nèi)有暗紅色血便;縱行剖開觀察可見勃膜彌漫性的充血腫脹，表面糜爛，部分可見淺表潰瘍形成。其余各組結(jié)腸縮短有所緩解，腸腔內(nèi)出血少見，糞便基本成形;縱行剖開觀察可見勃膜充血腫脹減輕，較模型組及陰性對照組明顯好轉(zhuǎn)。分離從盲腸至肛門的全段結(jié)腸

菌和美沙拉嗦治療后，小鼠體質(zhì)量下降變緩，腹瀉和糞便隱血情況好轉(zhuǎn)。在第7天各干預(yù)組體質(zhì)量下降要明顯低于模型組(尸<0.05)，嗜酸乳桿菌高劑量組對體質(zhì)量減輕的保護(hù)強(qiáng)于中低劑量組和美沙拉嗦(尸>0.05，圖1一1)。~~~人棋型組 組~~~B陰性對照 照 CCC陽性對照組 組一 一DIO6組 組一一E107組 組~~~F108組 組一一G正常組 組牟粼叫牲滋冷承圖1一 1UC急性期各組小鼠體質(zhì)量變化(相對于實驗第1天，體重增加為正值，體重減輕為負(fù)值)o1.2小鼠結(jié)腸大體情況及結(jié)腸長度的變化處死小鼠解剖腹腔，見正常小鼠結(jié)腸顏色呈淡紅色，腸腔內(nèi)糞便成形，縱行剖開觀察可見勃膜完整光滑，無糜爛和潰瘍。模型組和陰性對照組小鼠結(jié)腸腸壁變薄，結(jié)腸長度明顯縮短，腸腔內(nèi)可見不成形便，部分小鼠腸腔內(nèi)有暗紅色血便;縱行剖開觀察可見勃膜彌漫性的充血腫脹，表面糜爛，部分可見淺表潰瘍形成。其余各組結(jié)腸縮短有所緩解，腸腔內(nèi)出血少見，糞便基本成形;縱行剖開觀察可見勃膜充血腫脹減輕，較模型組及陰性對照組明顯好轉(zhuǎn)。分離從盲腸至肛門的全段結(jié)腸

乳桿菌高中低劑量組DAI評分分別為5.72、5.00、6.20分，明顯低于模型組伊 <0.05)，而各干預(yù)組小鼠DAI積分水平相當(dāng)(P習(xí).05)，無明顯差異。其中又以嗜酸乳桿菌中劑量組DAI積分降低最明顯(圖1一)。
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉玉婷;郝微微;歷娜娜;溫紅珠;曹麗靜;李佳;;潰瘍性結(jié)腸炎與腸道菌群的研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2013年27期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 胡勝蘭;匹多莫德對巨噬細(xì)胞極化及其功能的影響[D];浙江大學(xué);2014年

本文編號：2847829