發(fā)布時(shí)間：2020-10-18 02:19

　　 目的 腹盆腔腫瘤的治療方法有很多種，放射治療是其中一種最重要方法，但放療在治療疾病的同時(shí)也會出現(xiàn)一些如放射性腸炎這樣的并發(fā)癥，急性期的表現(xiàn)是消化道出血及腹瀉，是由于放射線破壞了黏膜上皮細(xì)胞完整性，引起細(xì)胞功能發(fā)生紊亂；慢性期的表現(xiàn)是瘺管、腸梗阻及潰瘍，是由于腸壁硬化造成的。 目前對放射性腸炎的治療方法包括：①腸粘膜保護(hù)劑：如硫糖鋁、思密達(dá)等。但總體療效并不確切；②腸外營養(yǎng)：谷氨酰胺及腸外營養(yǎng)具有一定療效，但費(fèi)用高昂，且存在導(dǎo)管膿毒血癥、肝功能損害、代謝紊亂等并發(fā)癥；③高壓氧治療：可增加損傷腸道供氧，促進(jìn)損傷修復(fù)，但高壓氧治療需要特殊大型設(shè)備，難于在戰(zhàn)時(shí)條件下迅速、大量配備使用；④內(nèi)鏡及手術(shù)治療：內(nèi)鏡治療僅限于對癥局部止血作用，嚴(yán)重患者最終只能接受手術(shù)，切除病變腸段；⑤中醫(yī)藥治療：在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，針灸及中藥湯劑對于胃腸道疾病是一種非常重要的治療方法。國內(nèi)已有少數(shù)研究報(bào)道了中藥對放射性腸炎具有較好療效，能有效緩解各種癥狀，促進(jìn)機(jī)體康復(fù)。但多數(shù)限于臨床療效觀察，缺乏組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)、分子水平的深入研究。本課題擬在既往工作的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步建立核輻射腸損傷的大鼠模型，從組織學(xué)、分子水平、細(xì)胞學(xué)三方面研究涼血愈腸湯對放射性腸損傷的治療作用，明確其作用機(jī)制。 方法 1、放射性腸炎模型大鼠的分組及準(zhǔn)備 隨機(jī)將140只雄性SD大鼠按照放射劑量的不同分為4組，A組為正常對照組（n=20）、B組為低劑量照射組(n=40)，給予放射當(dāng)量為5Gy、C組為中劑量照射組(n=40)，給予放射當(dāng)量為10Gy、D組即15Gy劑量照射組(n=40)，建成輻射腸損傷模型。 2、分組 造模成功后， B、C、D實(shí)驗(yàn)組再隨機(jī)分為兩組，B1、C1、D1組為照射后不給藥組，給予蒸餾水灌胃， B2、C2、D2組為照射后給藥組，予喂涼血愈腸湯。 3、免疫組織化學(xué)方法檢測各組大鼠腸上皮細(xì)胞PCNA及Ki67的表達(dá)情況 通過SP免疫組化試劑盒的操作說明對石蠟切片的PCNA7及Ki67進(jìn)行染色。 4、Brdu法檢測腸上皮細(xì)胞的增殖 在各組大鼠處死之前，經(jīng)腹腔向大鼠注射Brdu溶液，然后按照相同的方法制備石蠟切片，通過免疫組織化學(xué)方法對Brdu陽性細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。 6、熒光實(shí)時(shí)定量Real-time PCR法分析各組組織中的炎癥因子的表達(dá)變化 處死各組大鼠后，取少量組織，用trizol法提取總RNA，用SYBR Green 法檢測IL-6、IL-8、IL-1、TNF-ɑ、IL-4、IL-10的表達(dá)變化 結(jié)果 1、大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞修復(fù)能力檢測 正常腸絨毛根部及腸腺可見大量散在PCNA陽性細(xì)胞。模型組的腸絨毛上皮細(xì)胞及腸腺上皮的PCNA表達(dá)明顯減少，涼血愈腸湯給藥處理后，腸絨毛上皮細(xì)胞及腸腺上皮的PCNA表達(dá)較模型對照組明顯增多，但是少于正常腸絨毛上皮細(xì)胞及腸腺細(xì)胞。 2、Brdu檢測腸粘膜上皮中處于S期的細(xì)胞數(shù)量 正常腸絨毛及腸腺可見大量散在Brdu標(biāo)記的陽性細(xì)胞（S期細(xì)胞），模型組中Brdu標(biāo)記的陽性細(xì)胞數(shù)明顯降低，涼血愈腸湯給藥處理后，Brdu標(biāo)記的陽性細(xì)胞數(shù)明顯對照組明顯增多，但是少于正常腸絨毛中Brdu標(biāo)記的陽性上皮細(xì)胞。 3、熒光實(shí)時(shí)定量Real-time PCR法分析各組組織中的炎癥因子的表達(dá)變化 正常大鼠的腸組織中，IL-6、IL-8、IL-1、TNF-ɑ、等炎癥因子表達(dá)量很少，模型大鼠中，各種因子的表達(dá)量明顯增多，涼血愈腸湯給藥處理后，模型大鼠腸組織中的IL-4、IL-10的表達(dá)量較不給藥組明顯升高，但是低于正常大鼠的表達(dá)量。 結(jié)論 涼血愈腸湯可以使受損腸道的黏膜得到修復(fù)，原理是使受損腸道的粘膜上皮細(xì)胞增殖加速，炎性因子的表達(dá)得到遏制，對維持腸道粘膜功能和結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性能起到良好的作用。
【學(xué)位單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R574
【部分圖文】：

結(jié)果1、在腸上皮細(xì)胞中PCNA的表達(dá)及其陽性細(xì)胞的數(shù)量正常的胃腸道黏膜細(xì)胞或胃腸道腫瘤組織中，判斷細(xì)胞增殖的指標(biāo)是細(xì)胞增殖抗原，細(xì)胞的增殖程度是通過觀察在電鏡下呈現(xiàn)PCNA陽性反應(yīng)的量的多來實(shí)現(xiàn)的。鏡下顯示正常對照組、蒸餾水組及涼血愈腸湯組的空、回腸上皮細(xì)的PCNA陽性細(xì)胞為棕色，核染色為藍(lán)色，三個(gè)組PCNA陽性細(xì)胞集中分布于小黏膜層的腺體內(nèi)，多數(shù)是呈棕黃色陽性反應(yīng)的上皮細(xì)胞，少數(shù)為陽性反應(yīng)的絨上皮細(xì)胞。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)涼血愈腸湯組的腸上皮細(xì)胞內(nèi)的PCNA陽性細(xì)胞數(shù)多蒸餾水組（p<0.05），少于正常對照組（p<0.05）結(jié)果見下圖1、2及表1。

照及各實(shí)驗(yàn)組大鼠腸上皮細(xì)胞中的表中PCNA的表達(dá)量;B1、B2：5Gy照射組大鼠不:10Gy照射組大鼠不給藥及給藥組PCNA的表達(dá)及給藥組PCNA的表達(dá)量，**p<0.01。胞中的表達(dá)和陽性細(xì)胞的計(jì)數(shù)的應(yīng)用于評價(jià)細(xì)胞增殖的一種方法，K胞周期中表達(dá)于細(xì)胞核[17]，在細(xì)胞有絲期，G2期表達(dá)，在細(xì)胞間期不表達(dá). K比率[19]密切相連。因此，我們檢測了、回腸的Ki67的表達(dá)情況，來檢測腸上蒸餾水組和涼血愈腸湯組的空、回腸上藍(lán)色，三個(gè)組Ki67陽性細(xì)胞均主要位于

i67在對照及各實(shí)驗(yàn)組大鼠腸上皮細(xì)胞中的織中Ki67的表達(dá)量;B1、B2：5Gy照射組大鼠不2：:10Gy照射組大鼠不給藥及給藥組Ki67的表達(dá)藥及給藥組Ki67的表達(dá)量，***p<0.001。的觀察和計(jì)數(shù)血愈腸湯在放射性腸炎中，對腸上皮細(xì)胞。結(jié)果顯示正常對照組、蒸餾水組和涼血性細(xì)胞鏡下顯示為棕色，胞核為藍(lán)染，B體內(nèi)，大多數(shù)為腺體基底部的上皮細(xì)胞。應(yīng)的絨毛上皮細(xì)胞，在10Gy劑量照射組，對于正常大鼠，給予涼血愈腸湯處理之后和正常對照大鼠相比仍然偏低。如圖5
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2845653