目的:通過觀察高原低氧環(huán)境下大鼠胃黏膜組織細胞形態(tài)、凋亡情況以及檢測凋亡相關(guān)蛋白P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的m RNA及蛋白的表達水平,揭示細胞凋亡在不同高原低氧時間點變化水平及其在高原低氧所致胃黏膜損傷中的作用。方法:選擇50只雄性Wistar大鼠(體重170±10g,平均年齡6-8周齡),按照隨機分配原則分為平原對照組(n=10只,西安,海拔500m)與高原低氧組(n=40只,青海省玉樹市雜多縣,海拔4300m),根據(jù)高原低氧暴露時間不同又隨機分為1d、7d、14d、21d,4個亞組,每組各10只;采集各組大鼠胃黏膜組織,分別用HE染色及透射電鏡觀察胃黏膜組織細胞形態(tài)變化及凋亡改變情況;采用Real-time PCR法檢測各組大鼠胃黏膜組織中P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9m RNA表達水平;采用Western blot法檢測各組大鼠胃黏膜組織中P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平。結(jié)果:(1)HE染色顯微鏡觀察結(jié)果:平原對照組胃黏膜正常,胃腺結(jié)構(gòu)完整,細胞排列基本規(guī)則,而高原實驗組大鼠胃黏膜組織隨高原低氧暴露時間延長,炎癥細胞浸潤逐漸增多,胃腺周圍局部出血,胃腺結(jié)構(gòu)破裂,局部細胞肥大,邊界不清,并且胃黏膜細胞出現(xiàn)細胞核固縮凋亡;(2)透射電鏡觀察結(jié)果:對照組胃黏膜細胞正常,隨著時間延長,無特殊表現(xiàn);而實驗組隨著高原低氧環(huán)境暴露時間延長,細胞排列紊亂,細胞核形狀不規(guī)則,細胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹明顯,細胞質(zhì)內(nèi)可見自噬樣結(jié)構(gòu)及被吞噬的凋亡細胞;(3)Real-time PCR法檢測結(jié)果:與對照組比較,實驗組各亞組大鼠胃黏膜組織P53、Caspase-3、Caspase-9 m RNA表達水平均升高,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05),且隨暴露時間的延長表達水平逐漸增加(p0.05),而Bcl-2 m RNA表達水平在低氧1d組升高(p0.05),隨后隨著高原低氧環(huán)境暴露時間延長,其表達水平逐漸降低(p0.05)(4)Western blot法結(jié)果:與對照組相比,實驗組大鼠胃黏膜組織P53、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平均升高(p0.05),且隨暴露時間的延長表達水平逐漸增加,Bcl-2蛋白表達水平降低,且隨著暴露時間的延長表達水平逐漸降低(p0.05)。結(jié)論:高原低氧可能通過升高細胞凋亡水平導致胃黏膜組織細胞損傷,并且細胞凋亡水平的升高與高原低氧暴露時間成正相關(guān)。
【學位單位】：青海大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R57;R-332
【部分圖文】：

第 3 章 結(jié)果3.1 HE 染色觀察大鼠胃黏膜組織大體形態(tài)結(jié)構(gòu)及凋亡改變情況通過建立高原低氧環(huán)境（海拔 4300m）暴露下的大鼠胃黏膜組織損傷模型，行 HE 染色后顯微鏡下觀察結(jié)果顯示（如圖 3.1）：對照組：胃黏膜正常，胃腺結(jié)構(gòu)完整，細胞排列基本規(guī)則；高原低氧第 1 天：少量炎細胞浸潤，胃腺周圍少量出血，少量胃腺結(jié)構(gòu)破裂；高原低氧第 7 天：大量炎細胞浸潤，胃腺周圍局部出血，少量胃腺結(jié)構(gòu)破裂，胃黏膜細胞出現(xiàn)局灶性嗜酸性變；高原低氧第14 天：大量炎細胞浸潤， 胃腺周圍少量出血，局部胃腺結(jié)構(gòu)破裂，胃黏膜細胞肥大并出現(xiàn)局灶性嗜酸性變；高原低氧第 21 天：大量炎細胞浸潤，大量胃腺變形破裂，局部細胞肥大，細胞邊界不清，胃黏膜細胞出現(xiàn)細胞核固縮凋亡。以上可以得出：高原低氧環(huán)境暴露下可致實驗組大鼠胃黏膜損傷，且隨著暴露時間延長，損傷逐漸加重，并且可見細胞核固縮凋亡。

3.3 各組大鼠胃黏膜組織的 P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA表達水平Real-time PCR 法檢測各組大鼠胃黏膜組織凋亡相關(guān)蛋白 P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA 表達水平，結(jié)果顯示（如圖 3.3-3.5，如表 3.1）：與對照組相比，高原低氧組（1d,7d,14d,21d）大鼠胃黏膜組織凋亡相關(guān)蛋白 P53、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA 表達水平均增加，且隨著高原低氧暴露的時間延長其表達逐漸增加（均 p>0.05），與 Western blot 法檢測蛋白表達水平基本一致，而 Bcl-2 的 mRNA 表達水平在高原低氧組 1d 升高，隨后其表達隨著時間的延長而逐漸降低（p<0.05）。圖 3.2 不同時間點大鼠胃黏膜組織細胞電鏡觀察結(jié)果（X30000）

表3.1 各組大鼠胃組織P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的mRNA表達水平（ x±s,n=10）組別 例數(shù) P53 Bcl-2 Caspase-3 Caspase-9對照組 10 0.98±0.32 3.39±1.16 1.00±0.23 0.68±0.10低氧 1d 10 1.74±0.13* 4.44±1.22* 2.29±0.58* 1.77±0.39*低氧 7d 10 2.49±0.57*△3.27±1.08△3.35±1.01*△2.98±0.87*△低氧 14d 10 4.06± 1.08*△#2.19±0.74*△#5.17±1.37*△#4.02±1.54*△#低氧 21d 10 5.14± 1.25*△#$1.26±0.33*△#$6.28±1.09*△#$5.71±1.66*△#$F 45.55 15.95 50.80 31.58P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001注：*：與對照組比較，p＜0.05;△：與低氧 1d 組比較，p＜0.05; #：與低氧 7d 組比較，p＜0.05；$：與低氧 14d 組比較，p＜0.05.
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本文編號：2844869