目的:建立小鼠慢性束縛應(yīng)激(chronic restraint stress,CRS)模型,分析實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠食管黏膜的變化和局部蛋白酶活化受體2(protei nase-activated receptor-2,PAR-2)、瞬時(shí)電位香草酸亞型 1(transient receptor potential vanilloid-1,TRPV-1)及活性氧自由基(ROS)的表達(dá)水平及意義,探討心理應(yīng)激在胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)食管高敏感性及食管炎癥發(fā)生中的作用,以及氧化應(yīng)激所產(chǎn)生的影響。方法:20只雄性無(wú)特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)昆明小鼠隨機(jī)分2組,即慢性束縛應(yīng)激組(CRS)和正常對(duì)照組(normal control,NC)。CRS組小鼠每天在自制式束縛器中限制活動(dòng)2h,其余時(shí)間兩組小鼠在相同環(huán)境中自由飲水?dāng)z食,實(shí)驗(yàn)持續(xù)14天。通過(guò)HE染色在光學(xué)顯微鏡下觀察食管組織病理學(xué)改變并進(jìn)行組織損傷評(píng)分。采用免疫組化方法檢測(cè)PAR-2,TRPV-1及還原型煙酰胺腺嗓吟二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NADPH oxidase 4,NOX-4)在小鼠食管中的表達(dá),進(jìn)一步通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)PAR-2,TRPV-1蛋白表達(dá)量,并采用逆轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)法檢測(cè)食管組織中 PAR-2、TRPV-1、氧化蛋白、抗氧化蛋白及相關(guān)炎癥因子微RNA的表達(dá)量。結(jié)果:與NC組小鼠相比,CRS組小鼠體重增加量低于NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。HE染色鏡下觀察可見(jiàn):CRS組小鼠食管黏膜可見(jiàn)上皮層增生,中性粒細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤(rùn)等炎癥性改變,NC組未見(jiàn)明顯異常;此外CRS組小鼠上皮細(xì)胞損傷及黏膜下炎癥細(xì)胞評(píng)分均高于NC組,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05);NC組與CRS組黏膜下水腫評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫組化結(jié)果顯示,PAR-2和TRPV-1陽(yáng)性著色細(xì)胞在大部分標(biāo)本中均可見(jiàn)到,但CRS組小鼠組織中陽(yáng)性著色較NC組染色深且豐富。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果表明,CRS組食管標(biāo)本中PAR-2和TRPV-1蛋白質(zhì)表達(dá)量顯著高于NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.001)。實(shí)時(shí)定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,CRS組PAR-2,TRPV-1和氧化蛋白NOX-4 mRNA表達(dá)水平高于NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.001);與NC組比較,CRS組抗氧化蛋白錳超氧化物歧化酶(Mn-Superoxide dismutase,Mn-SOD)和銅鋅超氧化物歧化酶(Cu Zn-SOD)mRNA表達(dá)水平明顯高于NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05);CRS組炎癥相關(guān)因子,如白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素8(IL-8)及腫瘤壞死因子α(TNF-α)mRNA表達(dá)水平較NC組顯著上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.001)。結(jié)論:(1)PAR-2、TRPV-1受體在慢性束縛應(yīng)激小鼠食管中過(guò)度表達(dá),提示慢性束縛應(yīng)激引起食管高敏感性的產(chǎn)生;(2)慢性束縛應(yīng)激小鼠食管ROS(Nox-4)及抗氧化酶(Mn-SOD、CuZn-SOD)異常表達(dá),提示慢性束縛應(yīng)激誘導(dǎo)食管ROS過(guò)量產(chǎn)生,并引起食管氧化、抗氧化防御系統(tǒng)紊亂,導(dǎo)致氧化應(yīng)激的產(chǎn)生;(3)心理應(yīng)激誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的發(fā)生可能參與食管高敏感性的產(chǎn)生。
【學(xué)位單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R571
【部分圖文】：

ａｎｄ?ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ?ｓｔａｔｅ?ｉｎ?ａ?ｍｕｒｉｎｅ?ｍｏｄｅｌ．?Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．?２０１６；７３：１８６－９５．）?〇??自制式束縛器是采用５０ｍｌ離心管用燒紅的探針將針筒的前壁及側(cè)壁布滿小孔（孔徑：??２－３ｍｍ，圖１），以減少塑料管內(nèi)溫度升高、保證使小鼠正常呼吸，并每五個(gè)束縛器??固定于平整的泡沫板上。到規(guī)定的束縛時(shí)間后應(yīng)激組小鼠放置于束縛器，關(guān)閉離心??管口限制其活動(dòng)，實(shí)驗(yàn)持續(xù)１４天。實(shí)驗(yàn)期間每７ｄ更換墊料１次，實(shí)驗(yàn)一開(kāi)始給予??足量水（４００ｍＬ）及飼料（１５０ｇ），之后每２天一次進(jìn)行體重、飲水、飲食量。對(duì)照??組除不進(jìn)行束縛以外，其它處理都相同（圖２）。??■?＿５??圖１自制式束縛器??Ｆｉｇ．２?Ｈｏｍｅ－ｍａｄｅ?ｒｅｓｔｒａｉｎｔ?ｄｅｖｉｓｅ??ａ?口涵醒??圖２造模過(guò)程??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｅ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｍｕｒｉｎｅ?ｍｏｄｅｌ??２．２．３造模成功評(píng)價(jià)??在慢性束縛應(yīng)激的１４天下午開(kāi)始對(duì)各組小鼠禁食水。束縛應(yīng)激結(jié)束后，于第１５??天對(duì)各組小鼠進(jìn)行深度麻醉（１０％水合氯醛，０．１ｍｌ／２０ｇ，?ｉ．ｐ．），采取平臥位固定，??腹部取正中切口約３ｃｍ，下腔靜脈取血，取靜脈血約１．５ｍｌ置于２ｍｌＥＰ管內(nèi)。血漿??樣品在取材后立刻以３５００ｒｐｍ的速度低溫離心５分鐘、留取上層血清、－８０°Ｃ保存

管口限制其活動(dòng)，實(shí)驗(yàn)持續(xù)１４天。實(shí)驗(yàn)期間每７ｄ更換墊料１次，實(shí)驗(yàn)一開(kāi)始給予??足量水（４００ｍＬ）及飼料（１５０ｇ），之后每２天一次進(jìn)行體重、飲水、飲食量。對(duì)照??組除不進(jìn)行束縛以外，其它處理都相同（圖２）。??■?＿５??圖１自制式束縛器??Ｆｉｇ．２?Ｈｏｍｅ－ｍａｄｅ?ｒｅｓｔｒａｉｎｔ?ｄｅｖｉｓｅ??ａ?口涵醒??圖２造模過(guò)程??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｅ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｍｕｒｉｎｅ?ｍｏｄｅｌ??２．２．３造模成功評(píng)價(jià)??在慢性束縛應(yīng)激的１４天下午開(kāi)始對(duì)各組小鼠禁食水。束縛應(yīng)激結(jié)束后，于第１５??天對(duì)各組小鼠進(jìn)行深度麻醉（１０％水合氯醛，０．１ｍｌ／２０ｇ，?ｉ．ｐ．），采取平臥位固定，??腹部取正中切口約３ｃｍ，下腔靜脈取血，取靜脈血約１．５ｍｌ置于２ｍｌＥＰ管內(nèi)。血漿??樣品在取材后立刻以３５００ｒｐｍ的速度低溫離心５分鐘、留取上層血清、－８０°Ｃ保存，??并且分兩份使用。一份用于后續(xù)ＥＬＩＳＡ檢測(cè)ＡＣＴＨ?（促腎上腺皮質(zhì)激素）、Ｃｏｒｔｉｓｏｌ??９??

圖３技術(shù)路線圖??Ｆｉｇ．３?Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?ｒｏａｄｍａｐ??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 高云;趙九龍;高峻;李桂香;鄒多武;陳若華;;反流性食管炎大鼠食管內(nèi)臟高敏感與酸離子敏感通道1表達(dá)的關(guān)系[J];中華消化雜志;2017年09期

2 曹東亮;朱江帆;;腹腔鏡胃袖狀切除術(shù)與胃食管反流病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];中華消化外科雜志;2017年03期

3 克力木·阿不都熱依木;張成;汪忠鎬;;胃食管反流病與食管裂孔疝外科臨床研究現(xiàn)狀與爭(zhēng)議[J];中華胃食管反流病電子雜志;2014年01期

4 韓煦;高峻;錢維;朱泱蓓;李桂香;鄒多武;;酸敏感離子通道3在胃食管反流大鼠中的表達(dá)和意義[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2014年10期

5 高艷青,劉曉霓,宋小莉,司銀楚,牛欣;氧化應(yīng)激在反流物所致食管粘膜損傷中的作用[J];中國(guó)病理生理雜志;2004年02期

本文編號(hào)：2844260