肝纖維化是我國常見的肝臟疾病之一,發(fā)病率居世界前列。肝纖維化在醫(yī)學上不是一種獨立的疾病,是一個涉及多種細胞因子的動態(tài)變化以及損傷修復持續(xù)存在的過程。當肝臟遭到病原侵襲引起肝臟損傷和炎癥反應后,肝星狀細胞HSC(hepatic stellate cells,HSC)會被復雜的信號轉(zhuǎn)導通路激活,其肝組織內(nèi)細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)過度增生和異常沉積,促使肝臟ECM穩(wěn)態(tài)機制失調(diào),導致肝結(jié)構(gòu)和肝功能異常改變的病理過程。這一過程輕者表現(xiàn)為肝纖維化,重者則為肝硬化,因此肝纖維化成為各種慢性肝病演變?yōu)楦斡不透渭毎┑谋亟?jīng)階段,被視為慢性肝病共同的病理基礎。大量研究證實肝纖維化是可逆的,因此探究逆轉(zhuǎn)肝纖維化的作用機制對肝纖維化的治療以及肝硬化的預防具有重要意義。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肝細胞獲得高轉(zhuǎn)移細胞表型的重要機制,該過程發(fā)生期間,肝細胞損傷,細胞粘附能力下降。同時肝星狀細胞被激活轉(zhuǎn)化為成纖維細胞,促進膠原等ECM沉積,加速肝纖維化發(fā)生進程。原兒茶酸(protocatechuic acid,PCA)即3,4-二羥基苯甲酸,是常見的苯甲酸型酚酸,為花青素在腸道中的降解產(chǎn)物,屬多酚類物質(zhì),具有抗氧化、抗菌和抗炎和抗癌等生物活性。本研究中,建立體外TNF-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)誘導的HSC-T6細胞、TGF-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)誘導的AML12肝細胞肝纖維化模型,同時結(jié)合硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)誘導的肝纖維化小鼠模型,共同探究PCA對于肝纖維化的改善作用及潛在的作用機制。結(jié)果表明:(1)PCA能夠提高TGF-β1誘導的AML12細胞的存活力并且有效介導細胞粘附,抑制細胞轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)PCA可參與調(diào)控TGF-β1誘導的EMT過程,上調(diào)細胞粘附分子E-cadherin表達,下調(diào)轉(zhuǎn)錄抑制因子Snail、波形絲蛋白Vimentin、Collagen I以及p-smad2的表達,有效的抑制EMT,進而防治肝纖維化。(2)PCA抑制TNF-α誘導的HSC-T6細胞存活力。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)PCA降低促纖維化因子TGF-β和其受體TRβI蛋白表達水平,同時下調(diào)下游關鍵因子p-smad2、轉(zhuǎn)錄因子c-Fos、c-Jun和平滑肌肌動蛋白α-SMA等蛋白的表達量。研究結(jié)果顯示PCA通過抑制HSC-T6細胞中TGF-β/smad信號通路來抑制HSC-T6細胞激活,減少ECM沉積從而改善肝纖維化。(3)在體內(nèi)實驗中,小鼠連續(xù)十周注射TAA建立體內(nèi)肝纖維化模型,在造模第四周開始對模型小鼠進行PCA灌胃治療,灌胃劑量為75mg/kg和150mg/kg,連續(xù)七周。動物實驗結(jié)果顯示PCA能夠減輕TAA誘導的肝細胞損傷,抑制血清中轉(zhuǎn)氨酶含量。并且能夠減輕TAA誘導的肝纖維化小鼠的炎癥和膠原的堆積情況。在TAA誘導的肝纖維化小鼠體內(nèi),PCA可參與調(diào)控TGF-β/Smad信號通路,減少其通路相關因子蛋白的表達量。綜上所述,PCA能夠參與調(diào)控TGF-β1誘導的EMT過程,上調(diào)細胞粘附分子E-cadherin表達,介導粘附,抑制肝實質(zhì)細胞AML12的轉(zhuǎn)移,保護肝功能,使其發(fā)揮正常代謝等功能。同時還能通過下調(diào)TGF-β/smad信號通路抑制TNF-α誘導的HSC-T6細胞活化,減少膠原等ECM成分代謝失衡,維持肝臟中ECM穩(wěn)態(tài)�；谏鲜龅膶嶒灲Y(jié)果,PCA的肝纖維化防治作用及機制的研究具有重要意義。從長遠看來,將為日后臨床研究肝纖維化的發(fā)病機制和防治肝纖維化帶來新突破。
【學位單位】：遼寧大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

圖 1-1 TGF-β1 誘導 AML12 細胞發(fā)生 EMT圖 1-2 TGF-β1 誘導 AML12 細胞發(fā)生 EMT 關鍵因子蛋白表達量變置顯微鏡觀察各組細胞數(shù)量和形態(tài)，AML12 細胞從典型的多皮細胞狀態(tài)，經(jīng) TGF-β1 處理后失去其原有特性并轉(zhuǎn)變?yōu)榧彔顟B(tài)，發(fā)生成纖維細胞樣的改變，即 TGF-β1 誘導的 AML12

21 1-2 TGF-β1 誘導 AML12 細胞發(fā)生 EMT 關鍵因子蛋白微鏡觀察各組細胞數(shù)量和形態(tài)，AML12 細胞從典胞狀態(tài)，經(jīng) TGF-β1 處理后失去其原有特性并轉(zhuǎn)，發(fā)生成纖維細胞樣的改變，即 TGF-β1 誘導的 。Western Blot 結(jié)果顯示 AML12 細胞在 TGF-β1adherin 表達下調(diào)，說明細胞粘附力下降，易于遷達上調(diào)，進一步抑制E-cadherin的表達。說明TG

22 1-4 PCA 對 TGF-β1 誘導的 AML12 細胞存活力的影響 p<0.001，與 Ctrl 組相比； ***p<0.001，與 Model 組相觀察 PCA 處理組與 Model 組相比細胞活力增強錘狀向原有多邊形緊密排列形態(tài)逆轉(zhuǎn)，逐漸逆轉(zhuǎn)T 比色法進行預實驗對 PCA 的作用濃度進行篩高了 TGF-β1 誘導的 AML12 細胞的存活能力，一章部分，實驗均采用 3mM 的 PCA 濃度。
【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 李絲冰;賈玉杰;;肝纖維化細胞外基質(zhì)和星狀細胞間的相互作用[J];生理科學進展;2014年06期

2 王勤;王巍;龍穎;夏星;覃洪含;唐慧勤;王志萍;潘為高;;羅漢果甜苷對肝星狀細胞HSC-T6增殖及肝纖維化相關基因的影響[J];中草藥;2013年03期

本文編號：2843552