肝纖維化是我國常見的肝臟疾病之一,發(fā)病率居世界前列。肝纖維化在醫(yī)學(xué)上不是一種獨(dú)立的疾病,是一個(gè)涉及多種細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化以及損傷修復(fù)持續(xù)存在的過程。當(dāng)肝臟遭到病原侵襲引起肝臟損傷和炎癥反應(yīng)后,肝星狀細(xì)胞HSC(hepatic stellate cells,HSC)會(huì)被復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活,其肝組織內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)過度增生和異常沉積,促使肝臟ECM穩(wěn)態(tài)機(jī)制失調(diào),導(dǎo)致肝結(jié)構(gòu)和肝功能異常改變的病理過程。這一過程輕者表現(xiàn)為肝纖維化,重者則為肝硬化,因此肝纖維化成為各種慢性肝病演變?yōu)楦斡不透渭?xì)胞癌的必經(jīng)階段,被視為慢性肝病共同的病理基礎(chǔ)。大量研究證實(shí)肝纖維化是可逆的,因此探究逆轉(zhuǎn)肝纖維化的作用機(jī)制對(duì)肝纖維化的治療以及肝硬化的預(yù)防具有重要意義。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肝細(xì)胞獲得高轉(zhuǎn)移細(xì)胞表型的重要機(jī)制,該過程發(fā)生期間,肝細(xì)胞損傷,細(xì)胞粘附能力下降。同時(shí)肝星狀細(xì)胞被激活轉(zhuǎn)化為成纖維細(xì)胞,促進(jìn)膠原等ECM沉積,加速肝纖維化發(fā)生進(jìn)程。原兒茶酸(protocatechuic acid,PCA)即3,4-二羥基苯甲酸,是常見的苯甲酸型酚酸,為花青素在腸道中的降解產(chǎn)物,屬多酚類物質(zhì),具有抗氧化、抗菌和抗炎和抗癌等生物活性。本研究中,建立體外TNF-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞、TGF-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)誘導(dǎo)的AML12肝細(xì)胞肝纖維化模型,同時(shí)結(jié)合硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠模型,共同探究PCA對(duì)于肝纖維化的改善作用及潛在的作用機(jī)制。結(jié)果表明:(1)PCA能夠提高TGF-β1誘導(dǎo)的AML12細(xì)胞的存活力并且有效介導(dǎo)細(xì)胞粘附,抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)PCA可參與調(diào)控TGF-β1誘導(dǎo)的EMT過程,上調(diào)細(xì)胞粘附分子E-cadherin表達(dá),下調(diào)轉(zhuǎn)錄抑制因子Snail、波形絲蛋白Vimentin、Collagen I以及p-smad2的表達(dá),有效的抑制EMT,進(jìn)而防治肝纖維化。(2)PCA抑制TNF-α誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞存活力。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)PCA降低促纖維化因子TGF-β和其受體TRβI蛋白表達(dá)水平,同時(shí)下調(diào)下游關(guān)鍵因子p-smad2、轉(zhuǎn)錄因子c-Fos、c-Jun和平滑肌肌動(dòng)蛋白α-SMA等蛋白的表達(dá)量。研究結(jié)果顯示PCA通過抑制HSC-T6細(xì)胞中TGF-β/smad信號(hào)通路來抑制HSC-T6細(xì)胞激活,減少ECM沉積從而改善肝纖維化。(3)在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,小鼠連續(xù)十周注射TAA建立體內(nèi)肝纖維化模型,在造模第四周開始對(duì)模型小鼠進(jìn)行PCA灌胃治療,灌胃劑量為75mg/kg和150mg/kg,連續(xù)七周。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PCA能夠減輕TAA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷,抑制血清中轉(zhuǎn)氨酶含量。并且能夠減輕TAA誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠的炎癥和膠原的堆積情況。在TAA誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠體內(nèi),PCA可參與調(diào)控TGF-β/Smad信號(hào)通路,減少其通路相關(guān)因子蛋白的表達(dá)量。綜上所述,PCA能夠參與調(diào)控TGF-β1誘導(dǎo)的EMT過程,上調(diào)細(xì)胞粘附分子E-cadherin表達(dá),介導(dǎo)粘附,抑制肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞AML12的轉(zhuǎn)移,保護(hù)肝功能,使其發(fā)揮正常代謝等功能。同時(shí)還能通過下調(diào)TGF-β/smad信號(hào)通路抑制TNF-α誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞活化,減少膠原等ECM成分代謝失衡,維持肝臟中ECM穩(wěn)態(tài)�；谏鲜龅膶�(shí)驗(yàn)結(jié)果,PCA的肝纖維化防治作用及機(jī)制的研究具有重要意義。從長遠(yuǎn)看來,將為日后臨床研究肝纖維化的發(fā)病機(jī)制和防治肝纖維化帶來新突破。
【學(xué)位單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

圖 1-1 TGF-β1 誘導(dǎo) AML12 細(xì)胞發(fā)生 EMT圖 1-2 TGF-β1 誘導(dǎo) AML12 細(xì)胞發(fā)生 EMT 關(guān)鍵因子蛋白表達(dá)量變置顯微鏡觀察各組細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)，AML12 細(xì)胞從典型的多皮細(xì)胞狀態(tài)，經(jīng) TGF-β1 處理后失去其原有特性并轉(zhuǎn)變?yōu)榧彔顟B(tài)，發(fā)生成纖維細(xì)胞樣的改變，即 TGF-β1 誘導(dǎo)的 AML12

21 1-2 TGF-β1 誘導(dǎo) AML12 細(xì)胞發(fā)生 EMT 關(guān)鍵因子蛋白微鏡觀察各組細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)，AML12 細(xì)胞從典胞狀態(tài)，經(jīng) TGF-β1 處理后失去其原有特性并轉(zhuǎn)，發(fā)生成纖維細(xì)胞樣的改變，即 TGF-β1 誘導(dǎo)的 。Western Blot 結(jié)果顯示 AML12 細(xì)胞在 TGF-β1adherin 表達(dá)下調(diào)，說明細(xì)胞粘附力下降，易于遷達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步抑制E-cadherin的表達(dá)。說明TG

22 1-4 PCA 對(duì) TGF-β1 誘導(dǎo)的 AML12 細(xì)胞存活力的影響 p<0.001，與 Ctrl 組相比； ***p<0.001，與 Model 組相觀察 PCA 處理組與 Model 組相比細(xì)胞活力增強(qiáng)錘狀向原有多邊形緊密排列形態(tài)逆轉(zhuǎn)，逐漸逆轉(zhuǎn)T 比色法進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì) PCA 的作用濃度進(jìn)行篩高了 TGF-β1 誘導(dǎo)的 AML12 細(xì)胞的存活能力，一章部分，實(shí)驗(yàn)均采用 3mM 的 PCA 濃度。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李絲冰;賈玉杰;;肝纖維化細(xì)胞外基質(zhì)和星狀細(xì)胞間的相互作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2014年06期

2 王勤;王巍;龍穎;夏星;覃洪含;唐慧勤;王志萍;潘為高;;羅漢果甜苷對(duì)肝星狀細(xì)胞HSC-T6增殖及肝纖維化相關(guān)基因的影響[J];中草藥;2013年03期

本文編號(hào)：2843552