據(jù)世界衛(wèi)生組織估計全球約有1.8億以上的丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染者,且約有80%發(fā)展成為慢性肝炎,甚至發(fā)展成肝硬化和肝癌,因此HCV感染已成為全球亟待解決的公共衛(wèi)生問題。 HCV目前分為六種基因型和多種亞型。HCV基因型的分布具有明顯的地理區(qū)域特性,是流行病學(xué)調(diào)查的重要指標。然而近年來有報道發(fā)現(xiàn)西方國家HCV基因型的分布隨著其主要感染方式的改變出現(xiàn)了明顯的變化。 中國自上世紀九十年代早期開始對血液和血液制品進行強制性HCV篩查以來,通過輸血或血液制品感染HCV的人數(shù)已明顯下降,然而靜脈吸毒者明顯增加。中國西南地區(qū)與世界主要毒品生產(chǎn)地之一的東南亞國家相鄰,更是靜脈吸毒的高發(fā)地。因此,我們猜測靜脈吸毒可能已成為西南地區(qū)新發(fā)HCV感染的主要途徑,東南亞國家的主要基因型(3型和6型)也可能隨之逐漸傳入,從而使該地區(qū)HCV基因型的分布更加多樣化。 有研究認為多次暴露的患者有可能同時或先后感染不同基因(亞)型HCV而產(chǎn)生混合感染。不同基因(亞)型HCV感染同一宿主后一般只有一種基因(亞)型先成為優(yōu)勢基因(亞)型,但隨訪過程中優(yōu)劣勢基因(亞)型可以發(fā)生轉(zhuǎn)換。最近還報道了多種不同基因(亞)型HCV間的重組體病毒。不同基因(亞)型HCV混合感染及混合感染后在宿主體內(nèi)的生存狀態(tài)變化對丙型肝炎的防治可能帶來更大挑戰(zhàn),但目前報道的不同基因(亞)型HCV混合感染率存在明顯差異,混合感染后發(fā)生基因重組和優(yōu)劣勢基因(亞)型轉(zhuǎn)換的機率更是存在很大爭議。既然具有多次暴露機會的靜脈吸毒可能已成為西南地區(qū)新發(fā)HCV感染的主要途徑,且該地區(qū)HCV基因型的分布呈現(xiàn)明顯多樣化,這在理論上更加增加了宿主感染多種基因(亞)型HCV的可能性。因此,研究該地區(qū)不同基因(亞)型HCV混合感染情況已刻不容緩。 HCV基因型也是影響聚乙二醇干擾素(pegylated-interferon,PEG-IFN)聯(lián)合利巴韋林治療慢性丙型肝炎患者療效和療程的主要因素。西方發(fā)達國家主要以HCV1型、2型和3型為主,目前對這些基因型HCV感染者的抗病毒治療研究較多。HCV2型和3型對治療的敏感性較好,治療24周約有80%可以獲得持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(sustainedvirological response,SVR);HCV1型對治療的敏感性較差,治療48周僅約有50%的患者可以獲得SVR。然而,對HCV4型、5型和6型感染者的抗病毒治療至今還研究較少。隨著西南地區(qū)HCV6型感染者的逐漸增多,研究HCV6型感染者對抗病毒治療的療效預(yù)測和療程優(yōu)化也顯得非常重要。 因此,本研究連續(xù)收集2006年1月至2009年3月間西南醫(yī)院感染科門診及住院的HCV感染者的血清標本和臨床資料,系統(tǒng)分析HCV基因型和感染方式的分布情況及變化規(guī)律;應(yīng)用目前公認的準確性最好的CE1區(qū)PCR克隆測序法對24份隨機抽取的具有多次暴露機會的HCV感染者的血清標本進行不同基因(亞)型HCV混合感染的檢測,同時對反復(fù)暴露的患者中所有能夠收集到的隨訪系列血清標本進行HCV基因(亞)型的縱向比較,并在較大范圍內(nèi)篩查不同基因(亞)型HCV間的重組體病毒;對2010年3月以前完成PEG-IFN聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療的慢性丙型肝炎患者的療效進行回顧性分析。 主要研究結(jié)果 1、371例HCV基因分型成功的患者中,HCV1a亞型3例(0.8%),1b亞型156例(42.0%),2a亞型36例(9.7%),3a亞型45例(12.1%),3b亞型78例(21.0%),4a亞型1例(0.3%)和6a亞型52例(14.0%)。HCV3型和6型所占的比例,40歲或40歲以下年齡組(63.6%)明顯高于40歲以上年齡組(21.6%,P=0.000),1997年以后感染者(54.4%)明顯高于1997以前感染者(27.3%,P=0.001),靜脈吸毒的感染者(85.4%)明顯高于其他感染者(32.5%,P=0.000)。多因素回歸分析顯示:年齡在40歲或40歲以下(OR=3.880;95%CI:2.303-6.537,P=0.000)和有靜脈吸毒史(OR=8.115;95%CI:4.270-15.421, P=0.000)是HCV3型和6型的獨立預(yù)測因素。靜脈吸毒者占總病例數(shù)的27.8%,且40歲或40歲以下年齡組(40.4%)明顯高于40歲以上年齡組(7.1%,P=0.000),1997年以后感染者(40.3%)明顯高于1997以前感染者(16.2%,P=0.000)。 2、用PCR克隆測序法對具有多次暴露機會的HCV感染者進行不同基因(亞)型HCV混合感染的檢測,發(fā)現(xiàn)47.4%(9/19))的病人和45.8%(11/24)的標本存在混合感染。20例靜脈吸毒者和6例維持性血液透析者能夠收集到兩次或兩次以上HCV RNA定量為陽性的隨訪系列血清標本,對每例患者的隨訪系列血清標本進行HCV基因(亞)型的縱向比較,均未發(fā)現(xiàn)HCV基因(亞)型發(fā)生轉(zhuǎn)換。對來自222例患者的243份血清標本(其中包括107份來自92例靜脈吸毒者,26份來自20例血液透析者,110份來自110例其他感染者)分別以CE1區(qū)和NS5B區(qū)作為靶序列進行測序遺傳樹比對分析基因分型,未發(fā)現(xiàn)兩區(qū)基因分型結(jié)果不一致者。其中有兩例患者確定存在不同基因型HCV混合感染分別達5月與12月,仍未見優(yōu)勢基因型轉(zhuǎn)換及發(fā)生基因重組。 3、對103例已完成PEG-IFN聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療者(其中HCV2型、3型和6型感染者治療24周,HCV1型感染者治療48周)的療效進行回顧性分析發(fā)現(xiàn):HCV6a感染者獲得SVR的比例(81.8%)與HCV2型或3型感染者(83.3%,P=0.879)相似,高于HCV1b型感染者(59.0%,P=0.068)。HCV6a感染者獲得快速病毒學(xué)應(yīng)答(rapid virological response, RVR)、早期病毒學(xué)應(yīng)答(early virological response, EVR)和治療末病毒學(xué)應(yīng)答(end of treatment virological response, ETVR)的比例分別為83.3%、95.5%和90.9%,均與HCV2型或3型感染者無統(tǒng)計學(xué)差異,高于HCV1b型感染者。在獲得ETVR者中,HCV6a感染者的復(fù)發(fā)率為10.0%,低于HCV2型或3型感染者(12.5%)和HCV1b感染者(23.3%),但無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.344)。RVR(86.7% vs. 90.0%,P=0.683)和EVR(85.7% vs. 86.8%,P=0.904)的陽性預(yù)測值,HCV6a型感染者與HCV2型或3型感染者無統(tǒng)計學(xué)差異。3例未獲得RVR的HCV6a型感染者完成24周療程后,2例獲得EVR者均獲得SVR,但1例未獲得EVR者亦未獲得SVR。 結(jié)論 1、靜脈吸毒已成為西南地區(qū)新發(fā)HCV感染的主要方式,也是HCV3型和6型的主要傳播途徑,HCV3型和6型在該地區(qū)的比例也已明顯增加。 2、雖然具有多次暴露機會的患者不同基因(亞)型HCV的混合感染率較高,但具有隨訪系列血清標本的高危感染者并未發(fā)現(xiàn)HCV優(yōu)勢基因(亞)型的變化;西南地區(qū)目前也未發(fā)現(xiàn)不同基因(亞)型HCV間的重組體病毒。 3、HCV6型感染者應(yīng)用PEG-IFN聯(lián)合利巴韋林治療24周的療效,與HCV2/3型感染者相似,優(yōu)于HCV1型感染者治療48周。
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R512.6
【部分圖文】：

第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文析由 DNA ABI PRISM 3730 序列分析儀完成。測序結(jié)果與參考序列的遺傳樹比對分析用 NCBI 上的 Viral Genotyping Tool 完成。HCV 基因分型的操作頁面如圖 1-1 所示。具體網(wǎng)址為 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/genotyping/formpage.cgi。

圖 1-2 CE1 區(qū) RT-1stPCR 產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖。M 為 DNA Marker DL2000，從上至下依次為2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，N 為陰性對照，1、2、4 標本血清 HCV RNA≥108拷貝/ml，3、6 標本血清 HCV RNA 定量均為 107拷貝/ml，5 標本血清 HCV RNA＜107拷貝/ml，目的 DNA 片段約 494bp。圖 1-3 CE1 區(qū) 2ndPCR 產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖。M 為 DNA Marker DL2000，從上至下依次為 2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，N 為陰性對照，1、2、3、4 標本血清HCV RNA≥103拷貝/ml，目的 DNA 片段約473bp。二、HCV 基因型的分布情況及變化規(guī)律1、HCV 基因型的分布情況1a1%1b4a0%6a14%

圖 1-2 CE1 區(qū) RT-1stPCR 產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖。M 為 DNA Marker DL2000，從上至下依次為2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，N 為陰性對照，1、2、4 標本血清 HCV RNA≥108拷貝/ml，3、6 標本血清 HCV RNA 定量均為 107拷貝/ml，5 標本血清 HCV RNA＜107拷貝/ml，目的 DNA 片段約 494bp。圖 1-3 CE1 區(qū) 2ndPCR 產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖。M 為 DNA Marker DL2000，從上至下依次為 2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，N 為陰性對照，1、2、3、4 標本血清HCV RNA≥103拷貝/ml，目的 DNA 片段約473bp。二、HCV 基因型的分布情況及變化規(guī)律1、HCV 基因型的分布情況1a1%1b4a0%6a14%
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本文編號：2842038