目前全世界有超過3.5億的人群感染乙型肝炎病毒(HBV), HBV感染已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生負(fù)擔(dān)。目前α干擾素已被廣泛應(yīng)用于臨床治療慢性HBV感染;而在人體感染HBV的過程中,Y干擾素通過協(xié)調(diào)固有免疫和獲得性免疫,也能起到抗病毒的作用。干擾素和細(xì)胞表面的受體結(jié)合,通過Jak-Stat信號通路誘導(dǎo)產(chǎn)生很多ISG,為了進(jìn)一步闡明干擾素抗病毒的具體機(jī)制,我們開展了三部分的研究工作。 在第一部分工作中,我們證實IFN-α和IFN-γ能夠在人肝癌細(xì)胞來源細(xì)胞里抑制HBV復(fù)制,接著我們挑選了38個在肝細(xì)胞里干擾素誘導(dǎo)后高表達(dá)的ISG,通過在肝細(xì)胞內(nèi)共轉(zhuǎn)染ISG和HBV質(zhì)粒來尋找哪些ISG具有抑制HBV復(fù)制的能力。研究發(fā)現(xiàn)：有8個ISG抑制HBV DNA的幅度超過40%,其中6個ISG主要作用于HBV RNA(包括鋅指蛋白hZAP-S);另外2個ISG(APOBEC 3G和IDO),能夠顯著的抑制HBV DNA,但是沒有影響HBV RNA。 在第二部分工作中,我們研究了IDO抑制HBV復(fù)制的機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)Y干擾素刺激產(chǎn)生的IDO基因通過降解色氨酸,能夠強(qiáng)有效地抑制細(xì)胞內(nèi)HBV DNA復(fù)制,同時又不影響HBV RNA復(fù)制。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),過表達(dá)酶活性失活狀態(tài)的IDO,不能起到抑制HBV復(fù)制的作用,同時發(fā)現(xiàn)在IDO過表達(dá)的細(xì)胞里,如果補(bǔ)充了色氨酸,HBV復(fù)制水平又恢復(fù)了正常,這提示IDO的抗病毒作用通過降解色氨酸來完成。有趣的是,IDO介導(dǎo)的色氨酸缺乏能夠選擇性地抑制病毒的蛋白翻譯,從而影響病毒復(fù)制,但是對于細(xì)胞整體的蛋白合成水平并沒有顯著的影響。最后,我們的研究發(fā)現(xiàn)：在γ干擾素處理的肝細(xì)胞里面,補(bǔ)充色氨酸能夠徹底恢復(fù)HBV的復(fù)制水平,而在α干擾素處理的肝細(xì)胞里面,則沒有上述現(xiàn)象,這就提示對于人肝癌細(xì)胞來源的細(xì)胞,ID0在Y干擾素介導(dǎo)的抗病毒機(jī)制中可能起到主導(dǎo)作用。 在第三部分工作中,我們研究了ZAP抑制HBV復(fù)制的機(jī)制。以往研究表明：ZAP是一個干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生的能夠抑制很多RNA病毒復(fù)制的宿主因素。鼠ZAP(rZAP)通過鋅指結(jié)構(gòu)與RNA病毒基因組里的ZAP反應(yīng)區(qū)域(ZRE)相結(jié)合,然后在細(xì)胞漿里招募外切體來降解RNA。我們研究發(fā)現(xiàn)人鋅指蛋白(hZAP)能夠在肝細(xì)胞里本底表達(dá),并且可以被α干擾素和IPS-1誘導(dǎo)表達(dá)增強(qiáng),同時發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染hZAP可以明顯降解HBV前基因組RNA和亞基因組RNA。通過熒光報告基團(tuán)實驗發(fā)現(xiàn)：hZAP沒有明顯降低HBV核心啟動子的活性,提示hZAP的降解發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平。和以往報道不同的是,hZAP對HBV RNA的降解發(fā)生在細(xì)胞核里。進(jìn)一步的研究表明,hZAP的抗病毒能力和病毒的核心蛋白、聚合酶無關(guān)。和鼠鋅指蛋白(rZAP)相似,截掉C端的hZAP仍保留了抗病毒能力,這提示N端的鋅指結(jié)構(gòu)是hZAP抗病毒的功能區(qū)域。誘變研究表明4個鋅指結(jié)構(gòu)的完整性對于hZAP抑制HBV病毒的活性至關(guān)重要,同時HBV基因里的ZRE定位在HBV pgRNA的末端冗余序列(ntl820一1918)。此外siRNA研究證實：hZAP是抑制HBV復(fù)制的宿主因素,同時hZAP在IPS-1誘導(dǎo)的HBV RNA降解中也起到部分作用。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R512.62
【文章目錄】：
目錄
縮略詞
中文摘要
Abstract
第一部分 抑制乙型肝炎病毒(HBV)復(fù)制的干擾素刺激基因的篩選
    1.1 前言
    1.2 材料與方法
    1.3 結(jié)果
    1.4 討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 IDO抑制HBV復(fù)制的機(jī)制研究
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
    2.3 結(jié)果
    2.4 討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三部分 ZAP抑制HBV復(fù)制的機(jī)制研究
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
    3.3 結(jié)果
    3.4 討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
全文小結(jié)與展望
    小結(jié)
    展望
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
致謝

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