研究背景和目的肝硬化門脈高壓癥是臨床較多見的一類綜合癥,它的病因有很多種,但在我國大多數(shù)為肝炎后肝硬化,臨床上可見多系統(tǒng)受累,代償期癥狀較輕,晚期則以肝功能損害和門脈高壓為主要表現(xiàn),出現(xiàn)上消化道出血、肝性腦病、腹水、肝癌等嚴(yán)重并發(fā)癥。肝靜脈壓力梯度(hepatic venous pressure gradient,HVPG)是指肝靜脈楔壓與自由壓之差。正常HVPG是3-5mmHg,5mmHg定義為門脈高壓。對于肝硬化門脈高壓癥的發(fā)病機(jī)制,目前有多種學(xué)說,如阻力學(xué)說即后向性血流學(xué)說,門脈高壓高動力學(xué)說又稱為前向性血流學(xué)說,液遞學(xué)說等等。近期國內(nèi)有研究者認(rèn)為,內(nèi)臟高動力循環(huán)、內(nèi)臟血管病變、門靜脈高壓癥彼此間互相影響,其中各種肝臟疾病引起門脈入肝血流受阻是造成門脈高壓的起始因素,是后續(xù)各種病理改變的原因,這即為“門靜脈高壓性血管病變”學(xué)說。而有關(guān)ET-1和Ang Ⅱ在心血管系統(tǒng)中的作用實(shí)驗(yàn)比較成熟及熱門,由于其不僅有強(qiáng)烈的縮血管作用,還能結(jié)合其特定受體而引起細(xì)胞收縮,促進(jìn)細(xì)胞增殖,上調(diào)原癌基因和早期基因的表達(dá),提示ET-1、Ang Ⅱ可促進(jìn)血管外基質(zhì)的合成,從而在血管構(gòu)型的改建中發(fā)揮作用。我們推測兩者可能在肝硬化門脈高壓中亦可能發(fā)揮作用,但其作用機(jī)制如何呢?本研究通過收集患者的一些數(shù)據(jù),測量血清ET-1和Ang-Ⅱ水平,收集的肝硬化患者中病因分類、并發(fā)癥種類、肝功能Child-pugh分級、食管黏膜下靜脈MDCT評分,胃鏡下表現(xiàn)等,應(yīng)用Logistic回歸分析,研究收集的肝硬化患者中肝炎后肝硬化、合并腹水、肝功能Child-pugh分級、食管黏膜下靜脈MDCT評分、血清ET-1、血清Ang-Ⅱ等因素是否與肝硬化患者HVPG升高有關(guān);最后通過大鼠試驗(yàn),觀察內(nèi)皮素1(ET-1)、血管緊張素Ⅱ(Ang-Ⅱ)及其他相關(guān)因子在肝硬化門脈高壓阻斷劑治療前后的差異。第一部分:肝硬化患者肝靜脈壓力梯度(HVPG)與患者血清ET-1、Ang-Ⅱ的關(guān)系研究目的:分析肝硬化患者肝靜脈壓力梯度(HVPG)與患者血清ET-1、Ang-Ⅱ的關(guān)系。方法:收集2017年1月至2017年12月在我院消化內(nèi)科住院治療并行HVPG檢測的120例肝硬化患者。根據(jù)HVPG值分為1 OmmHg組(HVPG值為10mmHg),≥1OmmHg組(HVPG值10mmHg)。比較兩組患者的臨床特征及血清ET-1、Ang-Ⅱ水平差異,對肝硬化患者HVPG的影響因素進(jìn)行分析,分析HVPG與患者血清ET-1、Ang-Ⅱ的關(guān)系。結(jié)果:120例患者中,HVPG10mmHg者納入47例,≥1OmmHg者納入73例�！�10mmHg組肝炎后肝硬化、合并腹水、肝功能為B和C級、食管黏膜下靜脈MDCT評分為2-3分的比例均明顯高于10mmHg組,血清ET-1、Ang-Ⅱ水平明顯高于10mmHg組(P0.05)。Logistic回歸分析結(jié)果顯示肝炎后肝硬化、合并腹水、肝功能Child-pugh分級、食管黏膜下靜脈MDCT評分、血清ET-1、血清Ang-Ⅱ水平均是肝硬化患者HVPG升高的影響因素(P0.05)。結(jié)論:肝炎后肝硬化、合并腹水、肝功能Child-pugh分級、食管黏膜下靜脈MDCT評分、血清ET-1、血清Ang-Ⅱ水平均是肝硬化患者HVPG升高的影響因素(P0.05)。第二部分:不同藥物干預(yù)對肝硬化大鼠血清內(nèi)皮素1及血管緊張素Ⅱ的影響目的:探討不同藥物干預(yù)對肝硬化大鼠肝臟組織學(xué)、血清內(nèi)皮素1及血管緊張素Ⅱ表達(dá)的影響。方法:將60只健康Wister雄性大鼠,隨機(jī)分為對照組(A組)、肝硬化門脈高壓組(B組)、波生坦組(C組)、氯沙坦組(D組)、卡托普利組(E組),每組12只。A組作為健康對照未進(jìn)行建模。B、C、D、E組采用CC14、苯巴比妥復(fù)合建立肝硬化門脈高壓癥大鼠模型;在成模期,B組未給予藥物干預(yù),C、D、E組依次給予波生坦(100mg/kg)、氯沙坦(100mg/kg)、卡托普利(100mg/kg)灌胃干預(yù)。對各組大鼠肝組織進(jìn)行HE、Massion染色及門靜脈壓力測定;檢測各組大鼠門靜脈血清ET-1、Ang-Ⅱ水平,對各組門靜脈進(jìn)行HE、Massion染色,采用免疫組化檢測門靜脈NF-κB、TGF-β的表達(dá),以原位雜交實(shí)驗(yàn)檢測VEGF mRNA的表達(dá),并用實(shí)時定量PCR(RT-PCR)法檢測Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA的相對表達(dá)情況。門脈測壓的方法:大鼠開腹,顯露門靜脈主干后,以游標(biāo)卡尺量測量主干外徑,通過測壓導(dǎo)管經(jīng)大鼠腸系膜前靜脈至門靜脈主干,通過壓力換能器及生理記錄儀測量壓力變化,脊柱前緣設(shè)置為0,間接測量門脈壓力。結(jié)果:(1)肝硬化門靜脈高壓建模情況:①B、C、D、E組大多數(shù)動物在誘導(dǎo)過程中活動逐漸減少,精神不振,食欲欠佳,每天飲水20-25ml,反應(yīng)遲鈍,皮膚無光澤,有不同程度的腹水,體重減輕。存活大鼠數(shù)量:A組12只,B組8只,C組9只、D組8只、E組10只。HE染色發(fā)現(xiàn),A組肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝索排列整齊,肝細(xì)胞形態(tài)正常;模型組(B)、不同的藥物干預(yù)組(C、D、E組)肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂形成假小葉,小葉間膽管增生,大量炎細(xì)胞侵潤。Masson染色:A組匯管區(qū)無纖維組織增生,肝中央靜脈周和肝血竇周偶見少量的網(wǎng)狀纖維。模型組(B)、不同的藥物干預(yù)組(C、D、E組)匯管區(qū)纖維組織廣泛增生,大量炎細(xì)胞浸潤,破壞了肝小葉正常結(jié)構(gòu),并將其分割成大小不一、圓形或類圓形的肝細(xì)胞團(tuán),形成假小葉和小結(jié)節(jié)性肝硬變,但肝細(xì)胞再生不明顯。模型組(B)、不同的藥物干預(yù)組(C、D、E組)門脈壓力明顯高于A組,C、D、E組門脈壓力明顯低于B組(P0.05)。②肉眼可見,模型組(B)、不同的藥物干預(yù)組(C、D、E組))門靜脈較A組明顯增粗。HE、Massion染色:A組內(nèi)膜較薄,中膜由幾層排列疏松的環(huán)行平滑肌構(gòu)成,外膜較厚,由結(jié)締組織構(gòu)成,常含有較多的縱行平滑肌束;模型組(B)、不同的藥物干預(yù)組(C、D、E組)內(nèi)膜呈彌漫性或局部增厚,含大量平滑肌細(xì)胞和膠原纖維;局部增生呈丘狀向腔內(nèi)突出,受損血管內(nèi)皮表面有微小血栓形成;中膜平滑肌細(xì)胞增生、肥大,肌纖維增粗,致密,并有部分向內(nèi)膜突出。(2)免疫組織化B、C、D、E組的NF-κB、TGF-β表達(dá)水平及強(qiáng)度均高于A組(P0.05);C、D、E組的NF-κB、TGF-β表達(dá)水平、強(qiáng)度和積分光密度均低于B組;E組NF-κB、TGF-β表達(dá)水平、強(qiáng)度和積分光密度均低于C、D組(P0.05)。(3)原位雜交結(jié)果A組正常門靜脈有較少的VEGF mRNA表達(dá),而肝硬化門脈高壓癥大鼠模型(B、C、D、E)的門靜脈VEGFmRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)(P0.05);B、C、D、E組VEGFmRNA陽性表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)和積分光密度均明顯高于A組,C、D、E組均較B組降低;E組明顯低于C、D組(P0.05)。(4)Rt-PCR結(jié)果:模型組(B)、不同的藥物干預(yù)組(C、D、E組)門靜脈的Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA表達(dá)均明顯高于A組,C、D、E組門靜脈的Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA表達(dá)均明顯低于B組,E組門靜脈的Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA表達(dá)均低于C組和D組(P0.05)。(5)各組血清ET-1、Ang-Ⅱ水平比較情況模型組(B)、不同的藥物干預(yù)組(C、D、E組)門靜脈血清ET-1、Ang-Ⅱ水平均明顯高于A組,D、E組門靜脈血清ET-1水平均明顯低于B組、C組,C組、E組血清Ang-Ⅱ水平均明顯低于B組和D組(P0.05)。(6)各組門靜脈壓力比較情況模型組(B)、不同的藥物干預(yù)組(C、D、E組)門靜脈壓力水平均明顯高于A組,C、D、E組門靜脈壓力明顯低于B組(P0.05)。結(jié)論:本研究通過動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),肝硬化時血清ET-1、Ang-Ⅱ明顯升高,且與血清及組織學(xué)肝纖維化程度相一致;而采用相應(yīng)拮抗劑的藥物干預(yù),會緩解肝纖維化程度。從而提示,ET-1、Ang-Ⅱ參與肝硬化門脈高壓癥的發(fā)生和進(jìn)展。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

肝硬化門脈高壓大鼠模型

圖３．１肝硬化門脈高壓大鼠模型??４??Ｋ?ＡＭ??

圖３．３肝硬化門脈高壓大鼠模型肝臟組織??二、肝硬化門脈高壓大鼠模型肝臟組織的病理改變：??ＨＥ染色發(fā)現(xiàn)，Ａ組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝索排列整齊，肝細(xì)胞形態(tài)正常（圖３．６）。??模型組（Ｂ組）、不同藥物干擾組（Ｃ、Ｄ、Ｅ組）肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂形成假小葉，小??葉間膽管增生，大量炎細(xì)胞侵潤（圖３．７）。??Ｍａｓｓｏｎ染色：Ａ組匯管區(qū)無纖維組織增生，肝中央靜脈周和肝血竇周偶見少??量的網(wǎng)狀纖維。模型組（Ｂ組）、不同藥物干擾組（Ｃ、Ｄ、Ｅ組）匯管區(qū)纖維組織??廣泛增生，大量炎細(xì)胞浸潤，破壞了肝小葉正常結(jié)構(gòu)，并將其分割成大小不一、??圓形或類圓形的肝細(xì)胞團(tuán)，形成假小葉和小結(jié)節(jié)性肝硬變，但肝細(xì)胞再生不明顯??（圖?３＿８）??３５??
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本文編號：2840967