克羅恩病(Crohn's Disease, CD)作為是一種腸道非特異性炎性肉芽腫性疾病,其發(fā)病機(jī)制與Th17細(xì)胞的細(xì)胞免疫有關(guān)。同時(shí)在Th17細(xì)胞的分化過程中,IL-23/IL-17信號(hào)通路起到關(guān)鍵作用。而IL-23R的具體作用,目前不詳。 本研究檢測(cè)CD和正常人在腸道黏膜中的IL-23R和IL-17A的表達(dá)。同時(shí)在體外應(yīng)用磁珠分選人外周血的CD4+T細(xì)胞,并由細(xì)胞因子誘導(dǎo)分化成Th17細(xì)胞。同時(shí)應(yīng)用外源性加入抗人IL-23R單克隆抗體,觀察其對(duì)Th17細(xì)胞的分化影響。 第一部分白細(xì)胞介素23受體、白細(xì)胞介素17A在克羅恩病中的表達(dá)及臨床意義 目的：通過檢測(cè)白細(xì)胞介素23受體(IL-23R)及白細(xì)胞介素17A(IL-17A)在克羅恩病(CD)患者腸黏膜中的表達(dá)水平,探討其在CD發(fā)病過程中的作用及意義。方法：收集32例克羅恩病(CD)患者及27例對(duì)照者的內(nèi)鏡腸黏膜活檢標(biāo)本,采用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)腸黏膜內(nèi)IL-23R、IL-17A mRNA的表達(dá)情況,免疫組化技術(shù)分析IL-23R、IL-17A在腸黏膜中的原位表達(dá)。結(jié)果：與健康對(duì)照組相比,CD患者腸黏膜組織內(nèi)IL-23R mRNA表達(dá)顯著增高(P0.05)。CD患者腸黏膜組織內(nèi)IL-17A mRNA表達(dá)顯著增高(P0.05)。免疫組化分析顯示IL-23R陽(yáng)性細(xì)胞在CD在腸黏膜固有層內(nèi)有較多表達(dá),較正常黏膜內(nèi)的腸上皮細(xì)胞相比,CD患者腸黏膜IL-23R蛋白表達(dá)量最著增高(P0.05)。IL-17A陽(yáng)性細(xì)胞在CD腸黏膜固有層內(nèi)有較多表達(dá),較正常黏膜內(nèi)的腸上皮細(xì)胞相比,CD患者腸黏膜IL-17A蛋白表達(dá)量最著增高(P0.05)。結(jié)論：IL-23R及IL-17A在CD患者腸黏膜中表達(dá)顯著增高,提示IL-23R及IL-17A表達(dá)異常與CD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),有可能成為CD治療的新靶點(diǎn)。 第二部分IL-23R抗體對(duì)外周血CD4+T細(xì)胞分化的影響 目的：觀察抗人IL-23R單克隆抗體對(duì)于CD4+T細(xì)胞分化為Thl7細(xì)胞的過程的影響。方法：收集人外周血細(xì)胞,應(yīng)用磁珠分選出CD4+T細(xì)胞,并應(yīng)用TNF-β1和IL-6誘導(dǎo)分化成Th17細(xì)胞,在應(yīng)用IL-23R單克隆抗體干預(yù)Th17細(xì)胞的分化過程。應(yīng)用熒光定量PCR和Western-Blot檢測(cè)IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表達(dá)。結(jié)果：應(yīng)用磁珠分選可以提取CD4+T細(xì)胞,同時(shí)應(yīng)用細(xì)胞因子(TNF-β1和IL-6)誘導(dǎo)分化成Th17細(xì)胞,同時(shí)IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表達(dá)明顯增高。在Th17細(xì)胞的分化過程中,應(yīng)用抗人IL-23R單克隆抗體,可以抑制。IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表達(dá)。結(jié)論：Th17細(xì)胞的分化過程中,存在著IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表達(dá)增高,而應(yīng)用抗人IL-23R單克隆抗體干預(yù),可抑制IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表達(dá),抑制Th17細(xì)胞的分化。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R574.62
【部分圖文】：

圖1.2各基因PCR后的擴(kuò)增曲線和溶解曲線. 3. 2 IL-23R與IL-17A蛋白在結(jié)腸黏膜中的表達(dá)情況疫組化染色顯示，相對(duì)于正常結(jié)腸點(diǎn)膜，IL-23R陽(yáng)性細(xì)胞主要CD患者炎癥腸點(diǎn)膜的固有層單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)，胞質(zhì)中見棕黃色顆粒。膜的IL-23R陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少，見圖1.3。CD組及正常組的IL-23R陽(yáng)性細(xì)胞百分率分別為10.6%±3.2%、1.7% 土 0.7°/^。比明顯升高(代0. 05)。L-17A主要分布于活動(dòng)期CD患者炎癥腸點(diǎn)膜的肌層單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)，色顆粒。而正常結(jié)腸點(diǎn)膜的IL-17A陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少，見圖常組的結(jié)腸點(diǎn)膜固有層IL-17A陽(yáng)性細(xì)胞百分率分別為15.2% 土 ±1.1%。CD與對(duì)照組相比明顯升高(代0. 05)。

圖1. 3 IL-23R及IL-17A結(jié)腸點(diǎn)膜免疫組化染色第四節(jié)討論CD是由多種病因所致的復(fù)雜性疾病，其確切發(fā)病機(jī)制仍不清楚，目素在CD發(fā)病機(jī)制中的作用日益受到重視。近年來普遍研究認(rèn)為，腸的調(diào)節(jié)異常在很大程度上與某些抗炎因子的活性增強(qiáng)或表達(dá)增加相hl7細(xì)胞的免疫學(xué)特征及其在炎癥性腸病發(fā)病機(jī)制中的免疫病理作用熱點(diǎn)[^。同時(shí)近年來多數(shù)學(xué)者認(rèn)為IL-23/IL-17通路模式在im)發(fā)病置_。目前有研究認(rèn)為IL-23并不能直接誘導(dǎo)原始T細(xì)胞分化為Thl7細(xì)胞，誘導(dǎo)Thl7細(xì)胞增殖，并且體外試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)IL-23可以為已經(jīng)分化的T供生存信號(hào)_。其機(jī)制可能是在炎癥狀態(tài)下，IL-6或TGF-e和IL-6以上調(diào)Thl7細(xì)胞表達(dá)IL-23R，進(jìn)而促進(jìn)IL-23維持并加強(qiáng)Thl7細(xì)’'8]。而對(duì)于IL-23R在炎癥性腸病的表達(dá)的研究，主要認(rèn)為是IL-23R位突變可能是克羅恩病的發(fā)病機(jī)制之一[‘9’"]。而IL-17作為最近發(fā)現(xiàn)

2. 3.1單核細(xì)胞的細(xì)胞活力檢測(cè)及分離率采用臺(tái)盼藍(lán)染色法提示所得細(xì)胞存活率為(97. 8±0. 8)%。收集到單核細(xì)胞數(shù)量為為(2. 12±0. 13) X Icre/mL。各組細(xì)胞四天培養(yǎng)后，細(xì)胞細(xì)胞存活率為(98. 4±1.6)%。（見圖 2. 1)I ■‘ ■‘ - ■■ — ■ - ? —■ ■ ■ ■ ?? I
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本文編號(hào)：2839573