發(fā)布時間：2020-10-11 23:34

　　 炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種胃腸道慢性非特異性炎癥性疾病,主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(Crohn's disease,CD)。IBD的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,可能與遺傳易感性、炎癥因子以及環(huán)境因素等多種因素之間的復(fù)雜的相互作用有關(guān)。有研究顯示,慢性炎癥性腸病與一些參與調(diào)控炎癥過程和組織重構(gòu)的基因的表達(dá)異常有關(guān)。 利用實時定量RT-PCR(real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction, qRT-PCR)技術(shù),我們研究了硫酸葡聚糖鈉鹽(dextran sulphate sodium, DSS)誘導(dǎo)的小鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎模型中與細(xì)胞凋亡有關(guān)的microRNA的表達(dá)譜。結(jié)果顯示,DSS處理后的小鼠結(jié)腸組織中,miR-150表達(dá)劇烈升高,而c-Myb(一種轉(zhuǎn)錄因子,同時也是miR-150的靶點)表達(dá)顯著降低。有趣的是,較之于正常結(jié)腸組織,患有UC的人結(jié)腸組織中也存在miR-150表達(dá)升高而c-Myb表達(dá)下調(diào)的現(xiàn)象。在DSS處理的小鼠結(jié)腸組織中,作為一種受到c-Myb調(diào)控的抗凋亡蛋白Bcl-2的減少,也印證了DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸上皮細(xì)胞凋亡的發(fā)現(xiàn)。此外,在結(jié)腸上皮細(xì)胞HT29中轉(zhuǎn)染pre-miR-150,會使得miR-150表達(dá)水平劇烈升高,c-Myb和Bcl-2表達(dá)水平下降,從而提高了血清饑餓法誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平。 總之,我們目前的研究提供了miR-150表達(dá)升高介導(dǎo)的c-Myb表達(dá)下降可能作為DSS誘導(dǎo)的小鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎模型和人類活動期UC中結(jié)腸上皮細(xì)胞破壞的新的機(jī)制的第一個證據(jù)。
【學(xué)位單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R574.62
【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
縮略詞表
第一章 研究背景綜述
    第一節(jié) microRNA的研究進(jìn)展
        1.1 microRNA的概念與特征
        1.2 microRNA的發(fā)現(xiàn)歷程
        1.3 microRNA的生物合成及作用機(jī)制
            1.3.1 microRNA的生物合成
            1.3.2 microRNA的作用機(jī)制
            1.3.3 miRNA與siRNA的區(qū)別
        1.4 microRNA的功能意義
        1.5 microRNA的研究方法
            1.5.1 microRNA靶基因的預(yù)測
            1.5.2 microRNA的檢測方法
        1.6 microRNA研究領(lǐng)域有待解決的問題
    第二節(jié) microRNA與炎癥性腸病(IBD)研究進(jìn)展
        2.1 microRNA與炎癥的關(guān)系
        2.2 microRNA和自身免疫性疾病的關(guān)系
        2.3 microRNA在IBD患者腸道組織中表達(dá)異常
        2.4 microRNA在IBD患者外周血中表達(dá)異常
        2.5 microRNA與IBD疾病活動度的關(guān)系
        2.6 microRNA與IBD病變部位的關(guān)系
        2.7 IBD中pre-miRNA編碼區(qū)單核苷酸多態(tài)性
        2.8 炎癥相關(guān)癌癥中microRNA表達(dá)異常
        2.9 總結(jié)
第二章 實驗部分
    第一節(jié) DSS誘導(dǎo)的小鼠實驗性結(jié)腸炎模型結(jié)腸組織中miR-150表達(dá)上調(diào)
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 實驗試劑
        1.2 實驗方法
            1.2.1 DSS誘導(dǎo)小鼠急性UC模型的建立
            1.2.2 miRNA的qRT-PCR定量檢測
            1.2.3 細(xì)胞凋亡檢測
            1.2.4 數(shù)據(jù)處理
        1.3 實驗結(jié)果及分析
    第二節(jié) miR-150及其靶蛋白c-Myb在結(jié)腸上皮細(xì)胞的破壞和細(xì)胞凋亡過程中的作用研究
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細(xì)胞株
            2.1.2 實驗試劑
        2.2 實驗方法
            2.2.1 miRNA的過表達(dá)和干擾
            2.2.2 c-Myc mRNA逆轉(zhuǎn)錄
            2.2.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡：Annexin Ⅴ/PI雙染色法
            2.2.4 RNA干擾(RNA interference,RNAi)
            2.2.5 Western Blotting
            2.2.6 數(shù)據(jù)處理
        2.3 實驗結(jié)果及分析
    第三節(jié) 人類活動期潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸組織中miR-150表達(dá)上調(diào)、c-Myb表達(dá)下調(diào)
        3.1 實驗材料
            3.1.1 實驗組織
            3.1.2 實驗試劑
        3.2 實驗方法
        3.3 實驗結(jié)果及分析
第三章 討論
參考文獻(xiàn)
論文發(fā)表情況
致謝

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