本研究以大鼠為研究對象,在建立非酒精性脂肪肝炎(NASH)的動物模型基礎(chǔ)上,采用自行研制的殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe_3O_4作為磁共振成像的對比劑,經(jīng)大鼠尾靜脈注射CS-g-PAA/ Fe_3O_4后行1.5T MR增強掃描來初步評估大鼠NASH枯否細胞(KC)的吞噬功能。共分為三個部分。 第一部分:殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe_3O_4的制備 目的:用殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)對納米Fe_3O_4進行表面改性,使其在中性溶液中仍具備水分散穩(wěn)定性能和超順磁性。 方法:采用接枝聚合的方法制備了殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)表面改性Fe_3O_4并得到其水分散穩(wěn)定體系。用傅立葉紅外光譜儀(FTIR)表征了復(fù)合納米粒子的結(jié)構(gòu),掃描式電子顯微鏡(SEM)、投射電子顯微鏡(TEM)表征了復(fù)合納米粒子的尺寸與形貌,X射線衍射(XRD)、振蕩樣品磁強計(VSM)分別表征了復(fù)合納米粒子的晶型結(jié)構(gòu)與超順磁性。并研究了表面改性與聚合物層的組成對Fe_3O_4在水體系中的分散穩(wěn)定性的影響,動態(tài)光散射(DLS)表征了復(fù)合粒子的水力半徑,表明粒子的水力半徑隨體系PH值的變化而變化。 結(jié)果:用殼聚糖及聚丙烯酸表面修飾可以成功地獲得Fe_3O_4納米粒子的中性(PH=7.4)水懸浮分散膠體。CS-g-PAA包裹后的Fe_3O_4粒子直徑在15.0-60.0nm之間呈現(xiàn)穩(wěn)定的單體分散狀態(tài),單個粒子呈現(xiàn)球形或橢圓形,納米粒子的粒徑分布均勻,并且其晶體結(jié)構(gòu)沒有改變,具有穩(wěn)定的超順磁性。 結(jié)論:通過CS-g-PAA表面改性的Fe_3O_4納米粒子,在中性環(huán)境下具備水分散穩(wěn)定性能。CS-g-PAA/Fe_3O_4粒子粒徑分布在15.0-60.0nm之間,具有與Fe_3O_4類似的尖晶石結(jié)構(gòu),超順磁性稍有降低,但仍可以滿足磁共振對比劑的要求。 第二部分:殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe_3O_4磁共振體外信號檢測 目的:研究磁共振檢測殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe_3O_4(PH=7.4)的穩(wěn)定性及其在不同濃度下體外磁共振信號的變化規(guī)律。 方法:將CS-g-PAA/Fe_3O_4磷酸鹽溶液按濃度梯度排列,MRI檢測其穩(wěn)定性及其信號變化;所用MRI序列為:FSE T1WI、FRFSE T2WI及FIESTA T2*WI。 結(jié)果:CS-g-PAA/Fe_3O_4在PH=7.4時MRI各序列信號均勻(P0.05);CS-g-PAA/Fe_3O_4在T1WI上信號強度隨鐵質(zhì)量濃度的增加先升高后降低,在T2WI及T2*WI上隨質(zhì)量濃度的增加信號降低;濃度越低,T1WI及T2*WI較T2WI越敏感,以T2*WI最敏感(P0.05);在濃度≤20mg/L時,各序列上信號變化均較明顯。 結(jié)論:臨床應(yīng)用型1.5T MRI可檢測CS-g-PAA/Fe_3O_4的穩(wěn)定性;在濃度≤20mg/L時MRI信號改變明顯;最敏感MR檢測序列為T2*WI。 第三部分:殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe_3O_4磁共振成像評估大鼠非酒精性脂肪肝炎枯否細胞功能的實驗研究 目的:初步探討CS-g-PAA/Fe_3O_4作為MRI對比劑評估大鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)枯否細胞(KC)功能的可行性。 方法:20只雄性SD大鼠按完全隨機法分為實驗組和對照組,每組10只,實驗組喂養(yǎng)高脂飼料,對照組喂養(yǎng)普通飼料。8周后對所有大鼠行肝臟MRI及CS-g-PAA/Fe_3O_4增強掃描,計算肝臟組織平均信號強度下降百分比(PSIL)和CS-g-PAA/Fe_3O_4增強前后肝脾對比信號強度比值(RSIR),測定血清總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)值,并取肝臟標本行HE染色和普魯士藍染色分析病理表現(xiàn)。 結(jié)果:實驗組1只大鼠因麻醉過深死亡,其余9只血清TC及TG值分別為(6.58±1.25) mmol/L和(1.53±0.23) mmol/L ,較對照組[(1.64±0.22) mmol/L和(0.55±0.14) mmol/L]均明顯升高(t值分別為11.716和11.558,P值均0.01)。CS-g-PAA/Fe_3O_4增強掃描后兩組肝實質(zhì)信號強度在各序列明顯下降,在PDWI及T1WI上實驗組下降程度分別為(34.78±4.51)%和(60.38±3.49%),較對照組[分別為(64.96±2.42)%和(81.08±1.66)% ]小,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t值分別為-18.415和-16.240,P值均0.01)。PDWI、T2WI、T2*WI和T1WI序列實驗組CS-g-PAA/Fe_3O_4增強前后肝脾RSIR分別為(1.002±0.141、5.000±0.516、20.004±1.490和2.601±0.077,較對照組(0.400±0.102、1.500±0.115、-0.3±0.058和0.503±0.105)大(t值分別為10.745、19.800、39.168和92.785,P值均0.01);實驗組肝臟組織中普魯士藍染色陽性顆粒積分(2.33±0.50)分較對照組(4分)明顯減少(t=-10.000,P0.01)。 結(jié)論:高脂飲食誘導(dǎo)的SD大鼠NASH模型接近人類發(fā)病情況且容易建立,臨床應(yīng)用型1.5T MRI通過CS-g-PAA/Fe_3O_4增強肝臟掃描可評估KC細胞的功能,提示NASH的發(fā)病機制與KC功能的下降有關(guān)。
【學(xué)位單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R575.1
【部分圖文】：

VSM 制樣：將干燥的 CS-g-PAA/Fe3O4裝到載樣片上，進行燥的 CS-g-PAA/Fe3O4于進口雙面膠上，黏到石英玻璃棒上。樣：將 CS-PAA/Fe3O4及 CPT/CS-g-PAA/Fe3O4分散在 PBS為 90°，進行掃描。測得水力半徑(Dh)和分布指數(shù)(PDI)。-g-PAA/Fe3O4，合成示意見圖 1。

34圖 1(d)中的 1712cm-1與 1636cm-1，分別是聚丙烯酸中的羰基和殼聚糖中氨基的特征吸收。這結(jié)果表明，CS-g-PAA 已經(jīng)成功地包覆在 Fe3O4表面。2.1.2 FE-SEM 與 TEM(a) 放大倍數(shù)為 150000 (b) 放大倍數(shù)為 40000圖 3 CS-g-PAA/Fe3O4的 FE-SEM

從磁滯回線還可以看出，F(xiàn)e3O4磁性粒子的飽和磁化強度為 64 emu/gA 摩爾比分別為 1 : 0.5、1 : 1、1 : 1.5、1 : 2 所得的復(fù)合物 CS-g-PAA 表面改性的飽和磁化值(Ms)分別為 47.4、43.3、53.5、45.7 emu/g，都比未改性的 Fe3O4粒子低，這是由于 CS-g-PAA 具有磁惰性特性，而且，CS-g-PAA 表面層的厚度直接會的飽和磁化強度。但改性后的 Fe3O4仍具有足夠強的超順磁性，可以進一步應(yīng)用影像學(xué)的造影劑。CS-g-PAA/Fe3O4分散穩(wěn)定性1 光學(xué)顯微觀察
【參考文獻】

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本文編號：2835952