目的:重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是一種發(fā)病急、并發(fā)癥多、死亡率高的急腹癥,常伴有全身炎癥反應(yīng)綜合征、膿毒癥甚至器官功能障礙。它能夠?qū)е履c粘膜屏障損傷,這種損傷與腸粘膜氧化應(yīng)激和自噬水平的改變有關(guān)。我們旨在探討腸粘膜自噬和氧化應(yīng)激之間的相互作用對重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜屏障損傷的影響。方法:選取健康雄性Wistar大鼠40只,隨機分為兩組:SAP組(n=30)和假手術(shù)(sham operation,SO)組(n=10)。適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后,將大鼠稱重并用3%戊巴比妥鈉(20mg/kg體質(zhì)量)腹腔注射麻醉。消毒后選擇右側(cè)旁正中小切口打開腹腔,用血管夾在肝門部阻斷胰膽管。采用逆行膽胰管穿刺法,使用微量泵連接24G套管針緩慢泵入(10min泵入)�；悄懰徕c(5%、1ml/kg)誘導(dǎo)SAP模型。在誘導(dǎo)SAP 24h后經(jīng)大鼠下腔靜脈穿刺抽血,用16S r DNA序列分析法檢測細(xì)菌易位(BT)。所有大鼠均在誘導(dǎo)SAP 24h后處死。通過HE染色觀察胰腺組織和腸組織的病理變化,并根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)分別對各組胰腺及腸組織進(jìn)行病理評分;同時使用全自動生化分析儀分別測定血液樣本中血清淀粉酶和脂肪酶水平。采用分光光度法測定腸上皮組織氧化應(yīng)激水平,通過測定腸組織丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平來確定組織氧化應(yīng)激狀態(tài)。用Western blot技術(shù)檢測大鼠腸上皮組織樣本中緊密連接(tight junction,TJ)蛋白(Zonula occluden-1,ZO-1)、Occludin、Claudins-1、Claudin-2的表達(dá)。用RT-PCR技術(shù)檢測大鼠腸上皮組織中TJ蛋白ZO-1、Occludin、Claudins-1、Claudin-2 m RNA的表達(dá)。同樣用Western blot檢測大鼠腸上皮組織中自噬蛋白LC3II和Beclin1的表達(dá)情況。采用免疫熒光染色法檢測大鼠腸上皮緊密連接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-2和自噬蛋白LC3II的分布情況。結(jié)果:重癥急性胰腺炎組30只大鼠在造模后10h到24h內(nèi)有13只發(fā)生死亡,17只存活(死亡率43.33%),假手術(shù)組無大鼠發(fā)生死亡。根據(jù)血16S r DNA序列分析結(jié)果,將SAP大鼠分為:BT(+)組(n=9)和BT(-)組(n=8)。SAP組胰腺和腸組織的損傷程度顯著高于對照組(P0.01)。SAP組血清淀粉酶、脂肪酶水平顯著高于對照組(P0.01)。SAP組血清淀粉酶、脂肪酶水平與胰腺損傷程度一致。與BT(-)組相比,BT(+)組MDA的含量明顯升高(P0.01),而SOD和GPx活性降低(P0.05,P0.01)。SAP組LC3II和Beclin1的表達(dá)顯著高于SO組(P0.01),而BT(-)組LC3II和Beclin1水平明顯高于BT(+)組(P0.05)。SAP組緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1表達(dá)顯著低于SO組,而Claudin-2水平升高(均P0.01);與BT(-)組相比,BT(+)組Claudin-2水平升高(P0.05),而緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1表達(dá)減低(均P0.01)。結(jié)論:SAP大鼠模型的腸粘膜自噬是激活的,腸粘膜自噬的激活可抑制和減輕SAP引起的氧化應(yīng)激對腸黏膜屏障功能的損傷。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R576
【部分圖文】：

12圖 1 SAP 大鼠血液樣本中細(xì)菌進(jìn)化樹分析3 血清淀粉酶和脂肪酶水平血清淀粉酶和脂肪酶的檢測結(jié)果如圖 2 所示，SAP 組與 SO 組血清淀粉酶和脂肪酶水平之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。而 BT（+）組與 BT（-）組血清淀粉酶和脂肪酶水平差異不顯著（P＞0.05）。

圖 2 血清淀粉酶和脂肪酶水平**P<0.01 vs SO 組。4 胰腺和回腸組織病理變化使用�；悄懰徕c誘導(dǎo) 24 小時后，在光鏡下觀察胰腺和腸道的形態(tài)學(xué)改變，根據(jù)前面提到的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分。SO 組胰腺（A）及腸上皮（E）無明顯病理學(xué)改變。SAP 組胰腺（D）和腸（H）損傷的組織學(xué)評分顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.01）。BT(+)組（B）和 BT（-）組（C）胰腺組織表現(xiàn)出廣泛的腺泡細(xì)胞壞死，小葉結(jié)構(gòu)模糊，間質(zhì)水腫和出血以及炎性細(xì)胞沿壞死胰腺浸潤。BT(+)組（F）和 BT（-）組（G）腸組織顯示大量炎性細(xì)胞浸潤于腸壁，局部出血壞死，黏膜腺體減少，排列稀疏。這些變化表明我們的模型已經(jīng)成功建立。BT（+）組和 BT（-）組的胰腺和腸粘膜間病理評分無顯著差異（P＞0.05）。具有代表性的重癥急性胰腺炎引起的胰腺組織損傷和腸組織損傷照片見圖 3。

圖 3 胰腺和腸 HE 染色**P<0.01 vs SO 組。5 腸上皮 SOD、GPX 活性和 MDA 含量為了探討自噬在 SAP 的氧化應(yīng)激之間的關(guān)系，我們測定了腸粘膜 MDA 含量、SOD和 GPX 的活性。在 SAP 組 SOD 和 GPX 活性顯著低于 SO 組（P＜0.01）。與對照組相比，SAP 組 MDA 含量顯著升高（p＜0.01）。此外，BT（-）組和 BT（+）組之間的 SOD、GPX 活性和 MDA 含量明顯不同（P＜0.05，圖 4）。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Wen-Sheng Deng;Jian Zhang;Hui Ju;Hong-Mei Zheng;Jiang Wang;Su Wang;Dian-Liang Zhang;;Arpin contributes to bacterial translocation and development of severe acute pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年14期

2 Rui Tian;Rui-Lan Wang;Hui Xie;Wei Jin;Kang-Long Yu;;Overexpressed miRNA-155 dysregulates intestinal epithelial apical junctional complex in severe acute pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2013年45期

本文編號：2835153