肝纖維化(hepatic fibrosis)是各種致病因子引起慢性肝病，進而發(fā)展為肝硬化的一個動態(tài)過程與共同病理途徑。其主要病理改變是細胞外間質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的過度合成與異常沉積，肝星狀細胞(hepatic stellate cells，HSCs)是參與該過程的最重要細胞，它的激活導致自身增殖和膠原合成增加，而肝纖維化恢復期HSCs凋亡明顯增多。所以，HSCs增殖和凋亡在肝纖維化的形成和逆轉過程中起關鍵作用，被認為是各種肝臟損傷引起肝纖維化的中心環(huán)節(jié)。 HSCs與ECM之間存在著復雜的相互作用，其相互作用主要經(jīng)整合素(integrin)介導�；A研究表明，整合素與其相應配基結合后，多個粘著斑激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)分子聚集在粘著斑(focaladhesion plaque，F(xiàn)AP)處，使FAK N-端區(qū)的酪氨酸Tyr397磷酸化而被激活。FAK激活后可能激活多條信號途徑，其中比較清楚的是RAS依賴的絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)途徑。細胞外信號調(diào)節(jié)激酶_(1／2)(extracellular signal-regulated kinase_1(／2)，ERK_(1／2))是MAPK家族中研究得最為清楚的成員，其通路RAS-RAF-MEK-ERK參與細胞多種功能活動。 迄今為止，ECM成分如纖維粘連蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)及整合素在纖維化肝組織與HSCs中的表達及作用已有報道，但整合素活化后的胞內(nèi)信號途徑則知之甚少。為此，我們從HSCs與ECM之間的相互作用著手，以FAK、ERK_(1／2)為切入點，有機結合整體和離體試驗，研究整合素信號通路在肝纖維化及HSCs增殖、凋亡中的作用。實驗內(nèi)容主要包括以下四部分： 第一部分，F(xiàn)AK、ERK_1在大鼠肝纖維化形成過程中的動態(tài)表達與肝星狀細胞增殖，凋亡 中文摘要 目的：探討FAK、ERK；及其wA在實驗性大鼠肝纖維化形成過程 中的動態(tài)表達及與肝星狀細胞增殖、凋亡的關系。 方法：采用膽總管結扎Oile duct ligation，BDL）大鼠肝纖維化模型，將 80只雄性 Spr卿e Dawlcy大鼠隨機分成假手術組與模型組。模型組分 別于結扎后Zhr、6hr、Zd、lwk、ZWk、3Wb、4Wb麻醉動物，假手術 組與4Wb模型組同批麻醉。采用HE染色、Masson三色染色確定模型 建立情況；免疫組織化學及 RTPCR方法研究 F咂、E皿；及其 InRNA 在肝纖維化不同時期肝組織中的分布及含量的動態(tài)變化；應用免疫組 織化學方法測定aSMA表達；采用TUNEL及。石MA免疫組織化學 雙重染色方法了解HSCS凋亡情況。 結果：①隨著肝纖維化發(fā)展，大鼠肝臟中a石MA陽性細胞明顯增多， 主要分布于匯管區(qū)、纖維間隔、肝竇周圍及增生的膽管周圍細胞，造 模l～4wb大鼠肝組織a習MA的陽性面積（ 2．88％士2石3％，22石5％ 士2．16o，27．45O士l．86％，35．25％士2．34％）均顯著高于正常組（5．88％ 士 l．46％），P＜0．of。②正常肝組織凋亡 HSC siB少，隨肝纖維化程度 加重，凋亡HSCS也增多。③纖維化肝組織中F肌、E皿；陽性細胞明 顯增多，主要分布于匯管區(qū)、纖維間隔及增生的膽管周圍，血管內(nèi)皮 細胞、肝竇周圍細胞中也有分布。ERK；在肝細胞也有表達。H者均與 a－S帆呈顯著正相關，廠值分別為0．963、0．958，P＜0．05。④正常大 鼠肝組織中有FAK、ERK；基因表達，分別于造模Zd、6hr開始上調(diào)， 造模4Wb表達最多。 結論：肝纖維化形成過程中HSCs大量活化、增殖，凋亡的HSCS也增 多，凋亡機制參與調(diào)節(jié)HSCs數(shù)量的動態(tài)平衡；肝纖維化形成過程中 FAK、ERKI及其mRNA表達明顯增加，F(xiàn)AK、ERKI表達增加在HSCS 增殖及肝纖維化形成與發(fā)展中起一定作用。 第二部分：槽甘－天冬絲氨臼四聊肝星狀細胞增植、凋亡的影響 目的：探討精－甘－天冬－絲氨酸（RGDS）四肽對纖維粘連蛋白（ibronectin， FN）刺激的HSCs增殖、凋亡及凋亡執(zhí)行者Caspase上表達的影響，為 利用RGDS四肽調(diào)控HSCS增殖與凋亡提供實驗理論依據(jù)。 方法：應用體外HSCS培養(yǎng)技術，采用h－胸腺嗜陡核昔（怕1dR）摻入 法測定HSCs增殖；膜聯(lián)蛋白（AnnexinN）／碘化丙陡矚I）雙標記流式細胞 2 中文摘要 術團ow cytom吶，F(xiàn)CM卜 TU’NEL、掃描電鏡及透射電鏡等方法測定 HSCS凋亡；采用甲苯胺蘭染色方法測定細胞粘附率；應用流式細胞方 法測定Caspase習蛋白表達。 結果：①RGDS四肽 25pg·InL”‘、50pg·InL”‘、100ng·InL”’組對 HSCS ’H－TdR摻入結果與對照組、FN組相比，均顯著下降，Pwto．of，摻人 抑制率分別是16．55％、50．23％、65．33％；100ng·InL”‘濃度組作用 12hr、 24h、48h的摻入抑制率分別是62．73o、74．23o、80．22o。巨RGDS 四肽對HSCs增殖有顯著抑制效應，并呈劑量、時間依賴關系。RGES 四肽對 HSCS’H丁皿摻入無抑制作用。②RGDS四肋對 HSCS凋亡的 誘導作用亦呈劑量和時間依賴關系：Annexin－Vrpl法檢測，RGDS四肽 干預 48hr后各組凋亡率分別為 9．49O左7．67
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2002
【中圖分類】：R575.2
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮寫
研究論文 RGD依賴的整合素信號通路與肝星狀細胞增殖、凋亡及丹參單體干預研究
    引言
    第一部分 FAK、ERK1在膽總管結扎大鼠肝纖維化形成過程中的動態(tài)表達與肝星狀細胞增殖、凋亡
        前言
        材料與方法
        結果
        討論
        小結
        參考文獻
        附圖、附表
    第二部分 RGDS四肽對肝星狀細胞增殖、凋亡的影響
        前言
        材料與方法
        結果
        討論
        小結
        參考文獻
        附圖、附表
    第三部分 RGDS四肽抑制肝星狀細胞活化的信號轉導機制
        前言
        材料與方法
        結果
        討論
        小結
        參考文獻
        附圖、附表
    第四部分 丹參單體IH764-3對肝星狀細胞增殖、凋亡干預研究
        1 肝硬化患者及膽總管結扎大鼠脂質(zhì)過氧化水平測定
            前言
            材料與方法
            結果
            討論
            小結
            參考文獻
            附圖、附表
        2 丹參單體IH764-3通過抑制脂質(zhì)過氧化逆轉肝星狀細胞活化
            前言
            材料與方法
            結果
            討論
            小結
            參考文獻
            附圖、附表
2O₂誘導肝星狀細胞活化信號轉導的影響'>        3 丹參單體對H₂O₂誘導肝星狀細胞活化信號轉導的影響
            前言
            材料與方法
            結果
            討論
            小結
            參考文獻
            附圖、附表
    結語
綜述一 整合素信號轉導通路與肝星狀細胞行為
綜述二 氧化應激與肝纖維化
致謝
個人簡歷

【引證文獻】

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1 霍曉霞;黏著斑激酶對肝星狀細胞細胞周期調(diào)控作用的研究[D];河北醫(yī)科大學;2006年

本文編號：2834057