研究背景:肝纖維化是指肝臟炎癥或直接毒性損傷后所引起的以肝內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)沉積過(guò)多為特征的一類慢性肝病。研究表明,肝纖維化是可以逆轉(zhuǎn)的病變,但臨床上至今缺乏確切有效的抗肝纖維化藥物與方法。近幾年研究發(fā)現(xiàn)我國(guó)的中草藥具有良好的抗肝纖維化療效。本研究根據(jù)國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀及我們的前期工作基礎(chǔ),將熊果酸作用于二甲基亞硝胺(DMN)誘導(dǎo)的肝纖維化實(shí)驗(yàn)大鼠,研究熊果酸對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝纖維化的治療作用及作用機(jī)制,為肝纖維化治療提供新的治療方案。 目的:通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察熊果酸對(duì)肝纖維化大鼠肝功能、肝臟組織病理學(xué)的影響;并通過(guò)觀察熊果酸抗氧化作用、對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制因子-1(TIMP-1) mRNA表達(dá)以及對(duì)α-SMA蛋白表達(dá)的影響,探討熊果酸抗肝纖維化的可能作用機(jī)理。 方法:采用1%DMN溶液(1ml/kg)給予大鼠腹腔注射誘導(dǎo)肝纖維化模型,正常對(duì)照組給予生理鹽水1ml/kg腹腔注射,每周連續(xù)3天,造模4周。造模結(jié)束后將大鼠隨機(jī)分組并開始每天腹腔給藥,正常對(duì)照組和模型組予以生理鹽水1ml/kg/d;秋水仙堿組用量為0.1mg/kg/d;熊果酸高、中、低劑量組用量分別為10mg/kg/d、20mg/kg/d、40mg/kg/d。分別在藥物治療2周、4周采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)各組大鼠血清ALT、AST、ALB、A/G。藥物治療4周后肉眼觀察各組大鼠肝臟大體表現(xiàn);HE觀察肝小葉結(jié)構(gòu)、肝細(xì)胞壞死程度及纖維組織增生程度;VG染色觀察膠原纖維增生程度,并用半定量標(biāo)準(zhǔn)判斷膠原纖維增生程度;采用TBA法檢測(cè)血清SOD、MDA的含量;RT-PCR方法檢測(cè)MMP-1mRNA、TIMP-1mRNA的表達(dá);Westernblot方法檢測(cè)α-SMA蛋白的表達(dá)。 結(jié)果: 1、DMN誘導(dǎo)的模型組與正常對(duì)照組相比大鼠血清肝功能指標(biāo)ALT、AST的含量均明顯升高,ALB、A/G含量下降(P0.01);各劑量熊果酸和秋水仙堿作用肝纖維化大鼠2周、4周后,同時(shí)間點(diǎn)熊果酸各劑量組ALT、AST相比模型組明顯降低,ALB、A/G則明顯升高(P0.05,P0.01);秋水仙堿組對(duì)A/G無(wú)明顯影響,余作用介于熊果酸低劑量組與熊果酸中劑量組之間且無(wú)時(shí)間依賴性。 2、肉眼觀察模型組大鼠肝臟增大,顏色淺,邊緣鈍,質(zhì)地硬,表面有粗顆粒狀表現(xiàn),與周圍器官粘連廣泛;肉眼觀察熊果酸各劑量組和秋水仙堿組肝臟有明顯改善。HE染色模型組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂、肝細(xì)胞壞死明顯、間質(zhì)細(xì)胞大量彌漫增生、纖維組織增生明顯,形成肝纖維化;VG染色模型組匯管區(qū)見(jiàn)大量膠原纖維,膠原纖維構(gòu)成的纖維間隔形成,肝竇內(nèi)連續(xù)或斷續(xù)性環(huán)狀膠原沉積,肝臟組織膠原纖維增生程度與正常對(duì)照組比較明顯升高(P0.01)。HE染色熊果酸各劑量組和秋水仙堿組各組肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)改善,肝細(xì)胞壞死和纖維組織增生明顯減輕;VG染色熊果酸各劑量組和秋水仙堿組膠原纖維增生明顯減輕,熊果酸中、高劑量組與模型組、秋水仙堿組比較肝臟組織膠原纖維增生程度明顯下降(P0.05,P0.01)。 3、模型組SOD表達(dá)值為(124.73±19.79)U?ml-1,較正常對(duì)照組SOD (176.79±26.69) U?ml-1明顯降低(P0.01);而模型組MDA表達(dá)值(66.44±6.51) nmol?ml-1,較正常對(duì)照組MDA (7.95±0.97) nmol?ml-1明顯升高(P0.01);熊果酸高、中、低劑量組和秋水仙堿組SOD表達(dá)值分別為(154.29±15.39)U?ml-1、(201.22±3.38)U?ml-1、(245.74±37.24) U?ml-1、(128.45±10.06)U?ml-1,熊果酸各劑量組均比模型組顯著升高(P0.01),秋水仙堿組與模型組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;MDA表達(dá)值分別為(26.69±4.75)nmol?ml-1、(14.38±0.48)nmol?ml-1、(10.50±1.44) nmol?ml-1、(42.02±6.29)nmol?ml-1,相比模型組顯著降低(P0.05, P0.01),熊果酸各劑量組與秋水仙堿組之間MDA差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 4、模型組MMP-1 mRNA的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯降低(P0.01),而模型組TIMP-1mRNA的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯升高(P0.01);熊果酸各劑量組和秋水仙堿組MMP-1 mRNA的表達(dá)較模型組升高(P0.01),而TIMP-1mRNA表達(dá)較模型組降低(P0.05,P0.01);熊果酸中、高劑量組相比秋水仙堿組MMP-1 mRNA的表達(dá)顯著升高(P0.01) ,而熊果酸各劑量組相比秋水仙堿組TIMP-1mRNA的表達(dá)顯著降低(P0.01,P0.05)。 5、模型組α-SMA蛋白的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯升高(P0.01);熊果酸各劑量組α-SMA蛋白的表達(dá)較模型組明顯降低(P0.01);秋水仙堿組與模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,熊果酸各劑量組相比秋水仙堿組α-SMA蛋白的表達(dá)顯著降低(P0.01,P0.05)。 結(jié)論:①熊果酸具有改善肝纖維化作用,表現(xiàn)在熊果酸可降低ALT、AST,升高ALB、A/G,從而明顯改善肝纖維化大鼠肝功能;HE染色示熊果酸可改善肝小葉結(jié)構(gòu),明顯減輕肝細(xì)胞壞死和纖維組織增生,VG染色示熊果酸可明顯減少膠原纖維的沉積,降低肝臟組織膠原纖維增生程度;熊果酸的綜合作用明顯強(qiáng)于秋水仙堿且本實(shí)驗(yàn)熊果酸劑量以40mg/kg/d作用最為顯著,優(yōu)于熊果酸10mg/kg/d、20mg/kg/d劑量組。 ②熊果酸抗肝纖維化的可能作用機(jī)制表現(xiàn)在:1)通過(guò)增加SOD的表達(dá)、降低MDA表達(dá)來(lái)阻斷氧化應(yīng)激過(guò)程、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化;2)通過(guò)上調(diào)MMP-1mRNA表達(dá)、下調(diào)TIMP-1mRNA表達(dá)從而可能增加ECM的降解,減少ECM的沉積;3)通過(guò)下調(diào)α-SMA蛋白表達(dá)抑制HSC活化而減少致肝纖維化因子的產(chǎn)生。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

圖 A 正常對(duì)照組：肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞索排列規(guī)則有序，少量膠原纖維主要分布于匯管區(qū)和中央靜脈周圍圖 B 模型組：正常肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝索排列紊亂，間質(zhì)增生明顯，膠原纖維構(gòu)成的纖維間隔形成，肝竇內(nèi)連續(xù)或斷續(xù)性環(huán)狀膠原沉積A B

bp各組肝臟組織β-actinmRNA的RT-PCR

各組肝臟組織 β-actin mRNA 的 RT-PCR 圖Marker 1 2 3 4 5 6各組肝臟組織 TIMP-1mRNA 的 RT-PCR 圖Marker 1 2 3 4 5 6p1

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 華何與;大黃嚺蟲超微粉劑干預(yù)大鼠肝、腎纖維化的作用機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2834312