炎癥性腸病(IBD)是一組病因不明的慢性腸道疾病,主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)。近年在我國(guó)病例報(bào)告逐年增加,呈明顯上升趨勢(shì)。目前IBD的病因和發(fā)病機(jī)制尚不清楚,研究認(rèn)為遺傳、環(huán)境、免疫三者相互作用參與IBD發(fā)病,并可能決定臨床表型。近年國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)IBD遺傳因素的研究發(fā)現(xiàn)基因突變除與疾病易感性相關(guān)外,與某些疾病表型也相關(guān),如NOD2突變?cè)诨啬cCD為多。作為第一個(gè)CD易感基因,NOD2的發(fā)現(xiàn)具有劃時(shí)代的意義,它提示IBD發(fā)病與腸道細(xì)菌及自然免疫相關(guān)。DEFB1和ATG16L1屬免疫防御功能相關(guān)基因,有研究發(fā)現(xiàn)DEFB1多態(tài)性與CD相關(guān),在我國(guó)尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。ATG16L1作為新近確定的CD易感基因,在高加索人群研究中得到較好的重復(fù),而在我國(guó)尚無(wú)相對(duì)大樣本的研究。 除遺傳因素之外,一些特異性抗體可能作為IBD與免疫反應(yīng)有關(guān)的表現(xiàn)而受到重視,包括抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(Antineutrophil ctyoplasmic antibodies,p-ANCA)、抗釀酒酵母菌抗體(Anti-saccharomyces cerevisiae antibodies,ASCA)、抗胰外分泌腺抗體(Pancreatic antibodies,PAB)和抗小腸杯狀細(xì)胞抗體(Goblet cellautoantibodies,GAB)等,四種抗體檢測(cè)在國(guó)外廣泛用于IBD的診斷,但在中國(guó)人群中報(bào)道較多的為p-ANCA和ASCA,二者聯(lián)合檢測(cè)診斷IBD敏感性較低,且不同中心的研究結(jié)果不甚一致,而PAB和GAB國(guó)內(nèi)報(bào)道較少,且上述抗體與臨床表型的關(guān)系報(bào)道尚有爭(zhēng)議。 IBD為異質(zhì)性疾病,基于遺傳學(xué)異質(zhì)性和血清學(xué)異質(zhì)性的研究可準(zhǔn)確界定IBD臨床分型,有助于治療方案的細(xì)化和預(yù)后的判定。因此本研究從IBD遺傳易感性和相關(guān)抗體檢測(cè)著手,立足于國(guó)內(nèi)現(xiàn)有試驗(yàn)條件,研究旨在: 1.探討自然免疫相關(guān)基因DEFB1和ATG16L1單核甘酸多態(tài)性與IBD遺傳易感性的關(guān)系以及與IBD臨床表型的可能關(guān)聯(lián); 2.探討p-ANCA、ASCA、PAB和GAB聯(lián)合檢測(cè)對(duì)IBD診斷及鑒別診斷的應(yīng)用價(jià)值以及與IBDI臨床表型的可能關(guān)聯(lián)。 第一部分中國(guó)漢族人群ATG16L1和DEFB1基因多態(tài)性與炎癥性腸病遺傳易感性的關(guān)聯(lián)性研究 方法:本研究采用醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例—對(duì)照研究設(shè)計(jì),對(duì)247例無(wú)血緣關(guān)系的我國(guó)漢族IBD患者(150例UC,97例CD)以及200例正常對(duì)照者,應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)—限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Polymerase chain reaction—restricted fragment lengthpolymophism,PCR-RFLP)方法和部分樣本(10%)測(cè)序方法,檢測(cè)DEFB1基因(rs11362和rs1800972位點(diǎn))和ATG16L1基因(rs2241880和rs1045095位點(diǎn))多態(tài)性,并分析上述基因多態(tài)性與IBD臨床特征的關(guān)系。 結(jié)果: 1、DEFB1基因rs11362多態(tài)與UC患病風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān),攜帶rs11362GG基因型個(gè)體患UC風(fēng)險(xiǎn)是攜帶AA和GA基因型個(gè)體的2.04倍(95%CI:1.32-3.06,P=0.0013)。 2、單體型分析表明攜帶DEFB1基因rs11362和rs1800972G-C單體型個(gè)體患UC風(fēng)險(xiǎn)是攜帶A-C單體型個(gè)體的1.621倍(95%CI:1.010-2.610,P=0.035); 3、基因型與表型關(guān)聯(lián)分析表明DEFB1基因rs11362多態(tài)與UC臨床表型相關(guān),診斷年齡≤25歲UC患者攜帶DEFB1基因rs11362位點(diǎn)GG基因型顯著高于與正常對(duì)照(P=0.001,OR=3.29,95%CI:1.56-7.09),病變累及全結(jié)腸者攜帶GG基因型顯著高于正常對(duì)照(P=0.003,OR=2.27,95%CI:1.31-3.91),重度結(jié)腸炎患者攜帶GG基因型顯著高于正常對(duì)照(P=0.009,OR=2.55,95%CI:1.24—5.24); 小結(jié):DEFB1基因單核甘酸多態(tài)性不僅與我國(guó)漢族人群UC易感性相關(guān),而且與發(fā)病早、重度及廣泛結(jié)腸炎相關(guān)。 第二部分中國(guó)人炎癥性腸病血清學(xué)標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的臨床意義 方法:本研究對(duì)217例IBD患者(UC108例,CD109例)、59例非IBD腸道疾病患者以及112例正常對(duì)照者,應(yīng)用ELISA法檢測(cè)ASCA,IIF法檢測(cè)p-ANCA、PAB和GAB。 結(jié)果: 1.不同抗體在IBD中分布:UC中p-ANCA和GAB陽(yáng)性率分別為60.2%和30.6%,均高于CD、疾病對(duì)照和正常對(duì)照,CD中ASCA和PAB陽(yáng)性率分別為34.9%和41.3%,均高于UC、疾病對(duì)照和正常對(duì)照;p-ANCA陰性UC中僅有13.6%(6/44)病人GAB陽(yáng)性,ASCA陰性CD中34.3%(24/70)病人PAB陽(yáng)性; 2.四種抗體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)IBD診斷的意義:p-ANCA和GAB單項(xiàng)檢測(cè)診斷UC敏感性分別為59.3%和27.8%,二者聯(lián)合檢測(cè)診斷UC敏感性可提高至64.8%;ASCA和PAB單項(xiàng)檢測(cè)診斷CD敏感性均為35.8%,二者聯(lián)合檢測(cè)診斷CD敏感性可提高至57.8%; 3.四種抗體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)IBD鑒別診斷的意義:ASCA+p-ANCA-對(duì)于CD和UC的鑒別診斷敏感性57.8%,特異性96.3%,聯(lián)合PAB和GAB檢測(cè)特異性和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均為100%,但敏感性僅為12.8%;p-ANCA+ASCA-對(duì)于UC和CD的鑒別診斷敏感性50%,特異性94.5%,聯(lián)合GAB和PAB檢測(cè)特異性和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均達(dá)100%,但敏感性僅為19.4%; 4.四種抗體檢測(cè)在結(jié)腸CD和UC鑒別診斷中的意義:ASCA+p-ANCA-診斷結(jié)腸CD敏感性、特異性分別為60%和96.3%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為28.6%,聯(lián)合PAB和GAB檢測(cè)雖特異性和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均提高至100%,而敏感性僅為0.9%。p-ANCA+ASCA-鑒別UC的敏感性和特異性50%和94.5%,陰性預(yù)測(cè)值為28.9%,聯(lián)合GAB和PAB檢測(cè)特異性和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均達(dá)100%,但敏感性僅為16.7%; 5.四種抗體檢測(cè)在IBD與非IBD腸病的鑒別診斷中的意義:各抗體單項(xiàng)檢測(cè)診斷IBD的特異性基本在95%以上,其中GAB可達(dá)100%;對(duì)于聯(lián)合檢測(cè)而言,PAB和GAB組合診斷IBD的特異性96.6%,高于p-ANCA和ASCA組合; 6.四種抗體與IBD臨床特征的關(guān)系:未發(fā)現(xiàn)UC病人p-ANCA和GAB、CD病人ASCA與臨床特征有關(guān)。診斷年齡≤40組CD病人血清PAB陽(yáng)性率為43.2%,診斷年齡40歲組CD病人PAB陽(yáng)性率20%,二者比較差異顯著(P=0.018);有腸外表現(xiàn)者CD病人血清PAB陽(yáng)性率明顯高于無(wú)腸外表現(xiàn)者(58.8%vs 31.5%,P=0.031)。 小結(jié): 1、多數(shù)UC患者可檢測(cè)到p-ANCA和ASCA,多數(shù)CD患者可檢測(cè)到ASCA和PAB; 2、p-ANCA聯(lián)合GAB檢測(cè)可提高UC診斷的敏感性,ASCA聯(lián)合PAB檢測(cè)可提高CD診斷的敏感性; 3、四種抗體聯(lián)合檢測(cè)較p-ANCA和ASCA更有助于IBD的鑒別診斷,同時(shí)亦有助于結(jié)腸CD和UC的鑒別; 4、GAB檢測(cè)有助于IBD與非IBD腸道疾病的鑒別; 5、PAB與CD發(fā)病早、腸外表現(xiàn)有關(guān)。 結(jié)論: 1、DEFB1基因單核甘酸多態(tài)性不僅與我國(guó)漢族人群UC易感性相關(guān),而且與發(fā)病早、重度及廣泛結(jié)腸炎相關(guān); 2、ATG16L1基因單核甘酸多態(tài)性與我國(guó)漢族人群IBD無(wú)關(guān); 3、p-ANCA、ASCA、PAB和GAB四種抗體聯(lián)合檢測(cè)較p-ANCA和ASCA兩種抗體聯(lián)合檢測(cè)更有助于IBD的鑒別診斷,同時(shí)亦有助于結(jié)腸CD和UC的鑒別; 4、PAB與CD發(fā)病早、腸外表現(xiàn)有關(guān)。
【學(xué)位單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R574
【部分圖文】：

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博卜研究生學(xué)位五I12多4弓6’8D可Bl基因”且362和i‘18009兮2位點(diǎn)擴(kuò)hl:入hrker18:擴(kuò)增P〔R產(chǎn)物(268bP魷汰23456，8

1-6含“U拓2位點(diǎn)的DEF衛(wèi)1基因片段經(jīng)sc限制菌切產(chǎn)物電泳圖氏I:hhll.:er2:CG基因型IAA基因甲〕:AG基因型rs1800972G等位基因的PCR產(chǎn)物(變型cc不含有BsmAI酶切位點(diǎn)，產(chǎn)生268lbp、141bp和127bp三個(gè)片和127Pb兩個(gè)片段。因14lbp和127b在約130一14obp處見(jiàn)一條DNA條帶。I基因片段經(jīng)BsmAI限制性酶切后

5ATG16LI基因作104犯好位點(diǎn)擴(kuò)增產(chǎn)物檢M:入h攻er1-3:擴(kuò)增P以產(chǎn)物(33、因多態(tài)性分析Sll362位點(diǎn)G等位基因的PCR產(chǎn)物00經(jīng)scrFx酶切后產(chǎn)生一43bp和1125bp三個(gè)片段;而野生型AA不含8bp片段。圖1一6所示為含rsl1362位8%Page膠電泳圖。

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 謝靖;王志紅;付蕾;武子濤;韓英;;潰瘍性結(jié)腸炎患者食物不耐受及血清學(xué)標(biāo)記物相關(guān)性分析[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2012年09期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 謝靖;潰瘍性結(jié)腸炎患者血清學(xué)標(biāo)志物及食物不耐受相關(guān)性分析[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2833712