背景及目的： 我國(guó)急性肝功能衰竭發(fā)生率高,其病理特點(diǎn)是大塊或亞大塊肝細(xì)胞壞死,而殘存肝細(xì)胞的增殖受到各種因素的抑制難以再生。原位肝移植是治療終末期肝病的有效方法,但因供肝不足,價(jià)格昂貴,而且需要終身服用免疫抑制劑等諸多因素限制了其臨床應(yīng)用。 干細(xì)胞移植作為輔助治療方法是肝移植的重要補(bǔ)充。目前已經(jīng)有大量實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)干細(xì)胞在一定的條件下能夠向肝細(xì)胞定向分化。本文主要觀察臍血干細(xì)胞和自體骨髓干細(xì)胞共同移植治療D-gal所致大鼠急性肝衰竭療效,為臨床干細(xì)胞共移植治療肝衰竭提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.采集,培養(yǎng)干細(xì)胞：采集大鼠臍血和骨髓后,在培養(yǎng)體系中加入特定的細(xì)胞因子：促肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor, HGF),干細(xì)胞因子(Stem cell factor,SCF),觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,培養(yǎng)21天后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),采用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)培養(yǎng)后的細(xì)胞是否表達(dá)肝細(xì)胞特征產(chǎn)物白蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)。 2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：D-gal 1.4g/kg腹腔注射建立大鼠急性肝衰竭模型。將建模后24小時(shí)存活的大鼠隨機(jī)分成4組。每日(總共7天)分別經(jīng)鼠尾靜脈注入單獨(dú)的臍血干細(xì)胞或骨髓干細(xì)胞以及混合后的臍血干細(xì)胞及骨髓干細(xì)胞或生理鹽水0.8ml。觀察4組大鼠存活率,肝功能及肝組織病理變化程度。 結(jié)果： 1.在SCF,HGF的誘導(dǎo)下,臍血干細(xì)胞和骨髓干細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增并分化為肝細(xì)胞。 2.1.4g/kg D-gal所致肝衰竭鼠3天病死率達(dá)80%,組織學(xué)見(jiàn)大面積肝壞死,血清轉(zhuǎn)氨酶,膽紅素明顯升高。而干細(xì)胞治療組72小時(shí)存活率明顯升高,肝組織病變明顯減輕,血清轉(zhuǎn)氨酶,膽紅素明顯降低。 3.臍血干細(xì)胞和骨髓干細(xì)胞共同移植治療組存活率(77%)高于臍血干細(xì)胞治療組(57%)和骨髓干細(xì)胞治療組(50%),統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,肝功能及組織學(xué)改善也優(yōu)于臍血干細(xì)胞治療組和骨髓干細(xì)胞治療組。 結(jié)論： 1.在SCF,HGF的誘導(dǎo)下,臍血干細(xì)胞和骨髓干細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增并分化為肝細(xì)胞。 2.1.4g/kg D-gal可造成大鼠肝組織彌漫性損傷,不經(jīng)治療死亡率達(dá)80%以上。 3.尾靜脈分別注射骨髓干細(xì)胞,臍血干細(xì)胞,骨髓干細(xì)胞和臍血干細(xì)胞對(duì)D-gal致大鼠肝損傷均有一定的治療作用。 4.在肝功能和肝組織病理改變方面,骨髓干細(xì)胞和臍血干細(xì)胞聯(lián)合治療組優(yōu)于單用骨髓干細(xì)胞治療組和臍血干細(xì)胞治療組。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R575.3
【部分圖文】：

2.臍血單個(gè)核細(xì)胞的傳代培養(yǎng)消化傳代后的細(xì)胞形態(tài)除梭形細(xì)胞外，還可見(jiàn)圓形，類圓形，及多邊形細(xì)胞呈類肝細(xì)胞形態(tài)。見(jiàn)圖1一2。圖1一消化傳代后的臍血干細(xì)胞3.骨髓干細(xì)胞的原代培養(yǎng)種瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)后更換培養(yǎng)液，去除未貼壁細(xì)胞，此時(shí)貼壁生長(zhǎng)的骨髓干細(xì)胞數(shù)量稀少，散在存在，多呈細(xì)而小梭形。(圖1一3)2周左右細(xì)胞達(dá)80%融合，其形態(tài)呈均一的長(zhǎng)梭形。傳代培養(yǎng)后的骨髓干細(xì)胞未見(jiàn)明顯的形態(tài)改變。

尹又拭越從溉二嫩辱護(hù)圖1一1分離7天后的臍血干細(xì)胞2.臍血單個(gè)核細(xì)胞的傳代培養(yǎng)消化傳代后的細(xì)胞形態(tài)除梭形細(xì)胞外，還可見(jiàn)圓形，類圓形，及多邊形細(xì)胞呈類肝細(xì)胞形態(tài)。見(jiàn)圖1一2。圖1一消化傳代后的臍血干細(xì)胞3.骨髓干細(xì)胞的原代培養(yǎng)種瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)后更換培養(yǎng)液，去除未貼壁細(xì)胞，此時(shí)貼壁生長(zhǎng)的骨髓干細(xì)胞數(shù)量稀少，散在存在，多呈細(xì)而小梭形。(圖1一3)2周左右細(xì)胞達(dá)80%融合，其形態(tài)呈均一的長(zhǎng)梭形。傳代培養(yǎng)后的骨髓干細(xì)胞未見(jiàn)明顯的形態(tài)改變。

尹又拭越從溉二嫩辱護(hù)圖1一1分離7天后的臍血干細(xì)胞2.臍血單個(gè)核細(xì)胞的傳代培養(yǎng)消化傳代后的細(xì)胞形態(tài)除梭形細(xì)胞外，還可見(jiàn)圓形，類圓形，及多邊形細(xì)胞呈類肝細(xì)胞形態(tài)。見(jiàn)圖1一2。圖1一消化傳代后的臍血干細(xì)胞3.骨髓干細(xì)胞的原代培養(yǎng)種瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)后更換培養(yǎng)液，去除未貼壁細(xì)胞，此時(shí)貼壁生長(zhǎng)的骨髓干細(xì)胞數(shù)量稀少，散在存在，多呈細(xì)而小梭形。(圖1一3)2周左右細(xì)胞達(dá)80%融合，其形態(tài)呈均一的長(zhǎng)梭形。傳代培養(yǎng)后的骨髓干細(xì)胞未見(jiàn)明顯的形態(tài)改變。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號(hào)：2824666