目的:分離大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC)并進(jìn)行體外培養(yǎng),研究類胰蛋白酶對(duì)HSC的影響,探討類胰蛋白酶在肝纖維化中的作用及機(jī)制。 方法:采用percoll密度梯度離心法分離大鼠HSC,經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)和熒光顯微鏡鑒定后,加入不同濃度的類胰蛋白酶將HSC分為四組,即:①0ng/ml類胰蛋白酶組;②1ng/ml類胰蛋白酶組;③10ng/ml類胰蛋白酶組;④100ng/ml類胰蛋白酶組,36h后用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)HSC的增殖,用半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)I型膠原、蛋白水解酶激活受體-2(PAR-2)及內(nèi)源性過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體-γ(PPAR-γ)mRNA的表達(dá)。 結(jié)果: 1、新分離的細(xì)胞在熒光顯微鏡328 nm波長(zhǎng)的紫外光激發(fā)下,可觀察到藍(lán)綠色的自發(fā)熒光;免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示所培養(yǎng)的細(xì)胞Desmin蛋白陽(yáng)性,證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞是HSC; 2、類胰蛋白酶在(1～100)ng/ml范圍內(nèi),以劑量依賴方式促進(jìn)HSC增殖(P0.05),最高達(dá)對(duì)照組的1.64倍。 3、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml類胰蛋白酶均可使培養(yǎng)的HSC I型膠原、PAR-2 mRNA的表達(dá)增強(qiáng),使PPAR-γmRNA的表達(dá)抑制,此作用呈劑量依賴性(P0.05),分別達(dá)對(duì)照組的1.29、1.32、1.47倍。 結(jié)論:類胰蛋白酶可以刺激HSC增殖,并促進(jìn)PAR-2和I型膠原mRNA的高表達(dá)及PPAR-γmRNA的低表達(dá),提示類胰蛋白酶是重要的致纖維化因子,可能通過(guò)HSC上的PAR-2受體發(fā)揮作用,參與了慢性肝病時(shí)肝纖維化的形成和發(fā)展。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 謝華,何韶衡,傅意玲;蛋白酶激活受體-2激動(dòng)劑對(duì)人皮膚和扁桃體肥大細(xì)胞釋放組胺和類胰蛋白酶的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年07期

2 龔浩;王宇;張忠濤;李建設(shè);馬雪梅;周延忠;;血管緊張素Ⅱ及其受體拮抗劑對(duì)肝星狀細(xì)胞Ⅰ型膠原合成的影響[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年01期

3 徐可樹;李琪;周霞;;肥大細(xì)胞及蛋白酶激活受體-2在大鼠實(shí)驗(yàn)性肝纖維化中的變化[J];中華肝臟病雜志;2006年10期

4 馮業(yè)霜;馬紅;賈繼東;;過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ與肝星狀細(xì)胞在肝纖維化中的關(guān)系[J];中華肝臟病雜志;2006年10期

5 賈晉斌,韓德五,崔慧林,楊美林,閆晉平,馬學(xué)惠;肥大細(xì)胞在肝纖維化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用及其與TNFα的關(guān)系[J];中華肝臟病雜志;1998年04期

6 鐘朝輝;郭晏同;周邁;焦崗軍;冷希圣;魏玉華;于鑫;;過(guò)氧化物酶體增殖物活化的受體γ對(duì)肝星狀細(xì)胞作用機(jī)制的研究[J];中華普通外科雜志;2006年11期

7 汪謙,李湘z

本文編號(hào)：2824476