背景炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)目前發(fā)病機(jī)制不明,腸道黏膜免疫系統(tǒng)異常反應(yīng)所導(dǎo)致的炎癥損傷在IBD發(fā)病機(jī)制中起重要作用。免疫細(xì)胞產(chǎn)生如白三烯(Leukotrienes,LTs)、前列腺素(Prostaglandins,PGs)及組胺等炎癥介質(zhì),與細(xì)胞因子間形成免疫調(diào)控系統(tǒng)的失衡可能是導(dǎo)致腸黏膜病理損傷的關(guān)鍵。研究發(fā)現(xiàn),UC患者尿液中PGE2和LTE4水平較正常對(duì)照組升高,活動(dòng)期較緩解期升高。同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)最先被研究在心血管疾病,能促進(jìn)動(dòng)脈硬化的發(fā)生,目前發(fā)現(xiàn)Hcy參與肝、腎、肺等纖維化過程。研究發(fā)現(xiàn)IBD患者血漿Hcy水平升高。近年來Hcy與IBD發(fā)病機(jī)制的關(guān)系逐漸受到關(guān)注,Hcy是否通過促進(jìn)LTE4和PGE2等炎癥介質(zhì)分泌,加重腸道炎癥損傷尚不十分清楚。因此,本研究擬通過檢測(cè)IBD患者尿液Hcy,PGE2及LTE4水平進(jìn)行臨床關(guān)聯(lián)分析,探討Hcy與IBD中腸道損傷的相關(guān)性。目的通過檢測(cè)IBD患者尿Hcy、LTE4及PGE2水平變化,探討IBD患者尿Hcy、LTE4及PGE2之間的相互關(guān)聯(lián)。方法收集2015年10月-2016年12月就診我院確診為IBD的患者99例,其中CD患者66例,UC組患者33例,收集臨床資料;另選擇近期經(jīng)體檢各項(xiàng)生化、影像學(xué)指標(biāo)均正常,近1月無胃腸道癥狀的10例正常人群為健康對(duì)照組,采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)定方法,分別檢測(cè)IBD組和健康對(duì)照組尿液中Hcy、LTE4及PGE2水平,進(jìn)行疾病活動(dòng)度的評(píng)估及Hcy與LTE4或PGE2間的相關(guān)分析。結(jié)果與正常對(duì)照組(9.21±7.62ng/ml)比較,IBD、CD和UC患者尿液Hcy水平均明顯升高(20.60±12.87ng/ml,20.05±11.74ng/ml,21.71±15.02ng/ml;P0.05)。與正常對(duì)照組(16.82±7.97ng/ml)比較,IBD、CD和UC患者尿液LTE4水平均明顯升高(61.76±52.96ng/ml,61.31±54.49ng/ml,66.17±50.28ng/ml;P0.05)。與正常對(duì)照組(0.59±0.35ng/ml)比較,IBD、CD和UC患者尿液PGE2水平均明顯升高(5.64±2.37ng/ml,6.01±2.03ng/ml,4.88±2.81ng/ml;P0.05)。除B3(穿透型)組尿液中PGE2水平較B1(非狹窄非穿透型)和B2(狹窄型)組升高(P0.05)外,不同嚴(yán)重程度、病變部位和生物學(xué)行為CD患者之間尿液Hcy、LTE4及PGE2水平均無明顯差別(P0.05);除E3(廣泛結(jié)腸型)組尿液中LTE4水平較E2(左半結(jié)腸型)組升高(P0.05)外,不同嚴(yán)重程度和病變部位UC患者之間尿液Hcy、LTE4及PGE2水平均無明顯差別(P0.05)。IBD、CD及UC患者中尿液Hcy、LTE4和PGE2之間有一定相關(guān)趨勢(shì),但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論IBD患者尿液Hcy、LTE4、PGE2較正常人群升高,提示Hcy、LTE4和PGE2與IBD相關(guān)。背景炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種胃腸道病變,發(fā)病率在逐漸上升,具體發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。既往研究發(fā)現(xiàn)IBD腸道黏膜炎癥與5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)和環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)關(guān)系密切,腸黏膜中由其產(chǎn)生的白三烯(Leukotrienes,LTs)及前列腺素(prostaglandins,PGs)含量升高。同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)一種促炎介質(zhì),激活核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB),啟動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá),參與炎癥發(fā)生發(fā)展。NF-κB屬Rel家族成員,是重要的炎癥調(diào)節(jié)介質(zhì)。炎癥狀態(tài)下,NF-κB調(diào)控5-LOX和COX-2的表達(dá);IBD患者腸道黏膜上皮細(xì)胞中存在大量激活的NF-κB,參與調(diào)節(jié)IBD相關(guān)炎性因子的產(chǎn)生和釋放,加重腸道炎癥反應(yīng)。IBD患者結(jié)腸黏膜中Hcy濃度升高,進(jìn)一步加重結(jié)腸炎癥的病理損傷,但Hcy對(duì)IBD腸黏膜炎癥損傷的具體機(jī)制尚不明確。因此,本研究擬在建立高Hcy特征的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠模型的基礎(chǔ)上,探討Hcy是否通過促進(jìn)NF-κB的表達(dá),調(diào)控5-LOX及COX-2合成LTs和PGE2水平增加,加重結(jié)腸炎癥。目的探討Hcy是否通過促進(jìn)NF-κB的表達(dá),調(diào)控5-LOX及COX-2合成LTs和PGE2水平增加,加重結(jié)腸炎癥。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(Three nitrobenzene sulfonic acid,TNBS)/乙醇灌腸制備大鼠結(jié)腸炎模型,采用皮下注射Hcy造成高同型半胱氨酸血癥(Hyperhomocysteinemia,HHcy)模型。SD大鼠分為A組(正常對(duì)照組):NS灌腸+NS皮下注射;B組(TNBS模型組):TNBS/乙醇溶液灌腸+NS皮下注射;C組(正常對(duì)照組+Hcy注射組):NS灌腸+Hcy皮下注射;D組(TNBS模型組+Hcy注射組):TNBS/乙醇溶液灌腸+Hcy皮下注射。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)大鼠結(jié)腸勻漿LTs(LTB4、LTC4、LTD4、LTE4)及PGE2水平通過酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)定;大鼠結(jié)腸黏膜組織5-LOX、COX-2及NF-κBm RNA表達(dá)采用RT-q PCR法測(cè)定。結(jié)果與正常對(duì)照組比較,TNBS模型組和正常對(duì)照組+Hcy注射組大鼠結(jié)腸勻漿中LTs(LTB4、LTC4、LTD4、LTE4)及PGE2的濃度升高;結(jié)腸黏膜組織5-LOX、COX-2及NF-κBm RNA的相對(duì)表達(dá)量增加。與TNBS模型組相比,TNBS模型+Hcy注射組大鼠結(jié)腸勻漿中LTs(LTB4、LTC4、LTD4、LTE4)及PGE2的濃度明顯升高(p0.05);結(jié)腸粘膜組織5-LOX、COX-2及NF-κBm RNA的相對(duì)表達(dá)量明顯增加(p0.05)。結(jié)論Hcy可能通過促進(jìn)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸黏膜中NF-κB的轉(zhuǎn)錄,調(diào)控COX-2及5-LOX表達(dá),引起LTs和PGE2水平增加,加重結(jié)腸炎癥。背景炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)是多因素綜合所致的慢性腸道病變。目前認(rèn)為核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活化在IBD發(fā)展中占據(jù)重要地位。IBD患者血漿同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平升高。Hcy可激活NF-κB,NF-κB的異�；罨赡苁菣C(jī)體炎癥活化的重要靶點(diǎn)。IBD患者腸道黏膜巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞內(nèi)存在大量被激活的NF-κB,活化的NF-κB可促進(jìn)5-LOX和COX-2表達(dá)。5-LOX和COX-2分別是生成白三烯E4(Leukotriene E4,LTE4)及前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的關(guān)鍵酶。IBD患者腸黏膜中LTE4和PGE2兩種物質(zhì)水平明顯升高。因此,通過觀察Hcy對(duì)Caco-2細(xì)胞的NF-κB活性及LTE4和PGE2分泌水平的影響,探討Hcy是否通過激活NF-κB,引起LTE4和PGE2分泌增加,加重腸上皮細(xì)胞炎癥損傷。目的通過使用不同濃度Hcy對(duì)Caco-2細(xì)胞處理不同時(shí)間,探討Hcy是否通過激活NF-κB,引起LTE4和PGE2分泌增加,加重腸上皮細(xì)胞炎癥損傷。方法實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、不同濃度Hcy組,Caco-2細(xì)胞種植培養(yǎng)24h進(jìn)行藥物處理。分別用10umol/L、20 umol/L、50 umol/L及100 umol/L濃度的Hcy處理Caco-2細(xì)胞;處理不同時(shí)間(1、3、6h)后提取細(xì)胞核蛋白,采用EMSA檢測(cè)細(xì)胞中NF-κB活性變化;同時(shí)收集細(xì)胞上清液,采用ELISA檢測(cè)LTE4和PGE2水平。結(jié)果與正常對(duì)照組比較,Hcy處理組LTE4和PGE2水平升高(P0.05)。不同Hcy處理組間,隨Hcy處理濃度升高,細(xì)胞上清中LTE4和PGE2水平逐漸增加;100umol/L Hcy處理組,Caco-2細(xì)胞合成LTE4和PGE2水平呈時(shí)間依賴性(0h、1h、3h、6h)。Hcy可誘導(dǎo)NF-κB活化,出現(xiàn)核移位,呈時(shí)間依賴性(0h、1h、3h、6h)。結(jié)論Hcy可能通過活化NF-κB信號(hào)通路,引起LTE4和PGE2合成增加,參與腸道炎癥損傷過程。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R574

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2819072