目的:Wnt/β-catenin信號通路是經典的信號通路,其不僅可以調控和影響干細胞的自我更新和分化,還參與細胞增殖、分化、運動及凋亡等一系列過程,其異常激活或基因的異常表達與腫瘤發(fā)生發(fā)展緊密聯(lián)系,Wntl作為Wnt大家族中的成員之一,在整個通路中它充當啟動因子,研究證實Wnt1與多種腫瘤的發(fā)生密切相關,β-catenin,一種Mr 92,000蛋白,對鈣粘著蛋白為基礎的上皮細胞粘附起作用,同時也是Wnt信號的主要調節(jié)物,其異常表達與腫瘤患者不良預后相關。Lgr5(leucine-rich repeat-containing g-protein coupled receptor 5)又名GPR49,屬于G蛋白耦聯(lián)受體家族,是最新發(fā)現(xiàn)的一種Wnt通路的靶基因,而且還是一種人類潛在的結腸癌干細胞標志物,已經有研究表明lgr5在不同腫瘤組織中都大量表達,如食管癌、肝癌、結腸癌、基底細胞癌及卵巢癌等等,慢性淺表性胃炎(chronic superficial gastritis,CSG)是多種誘因引起的慢性胃粘膜炎癥,屬于消化系統(tǒng)最普遍的疾病之一,治療不及時或治療不佳極易進一步發(fā)展為慢性萎縮性胃炎甚至發(fā)生癌變,本研究通過建立大鼠慢性淺表性胃炎的模型,觀察Wnt1、β-catenin及l(fā)gr5在大鼠慢性淺表性胃炎胃組織中表達情況,便于在早期發(fā)現(xiàn)其與胃癌發(fā)展的相關性,起到早期發(fā)現(xiàn)并預防胃炎向胃癌進一步發(fā)展。方法:1建立動物模型:隨機選取30只成年雄性7周齡Wistar大鼠進行編號、稱重,按隨機數(shù)字表順序分為3組,即空白組,對照組、模型組,每組10只,空白組:不做任何處理,正常飼養(yǎng)。對照組:0.9%生理鹽水每日10ml/kg自由飲用6個月。模型組:0.02%氨水自由飲用(現(xiàn)配),饑飽失常(進食2天,禁食1天)。2造模成功后,將大鼠麻醉處死,采用HE染色,免疫組化、western blot和RT-PCR檢測各組中Wnt1、β-catenin以及l(fā)gr5的蛋白及基因的表達水平。結果:1 HE染色結果空白組和對照組顯示為正常腺胃組織,未見異常改變,模型組胃竇粘膜固有膜、粘膜肌及粘膜下大量炎細胞浸潤。2 Western blot結果:在蛋白水平Western blot進一步驗證表明模型組中Wnt1、lgr5蛋白表達較空白組顯著增高(P0.05),但空白組和對照組間表達量差異不顯著,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3免疫組化結果:Wnt1、β-catenin及Lgr5免疫陽性產物染色結果:Wnt1及Lgr5陽性產物主要定位于細胞的胞質和胞漿中,空白組和對照組組免疫陽性產物表達量較低,兩者之間差異不顯著,模型組表達量較正常組和鹽水組顯著增加(P0.05),β-catenin的染色顯示空白組和對照組免疫陽性產物表達量較高,兩者之間無顯著差異(P0.05),模型組表達量較空白組和對照組顯著減少(P0.05)。4 RT-PCR結果:與空白組與對照組相比,模型組中Lgr5m RNA表達量增加(P0.05),而空白組和對照組組間差異不顯著,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1 Wnt/β-catenin信號通路中代表分子的異常表達或通路異常激活與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關,Wnt1及l(fā)gr5在慢性淺表性胃炎組織中的表達量均高于對應的空白組及對照組,而β-catenin表達為模型組較正常組及對照組偏低,提示Wnt通路在炎性刺激的作用下可能已經激活。2 Lgr5是Wnt通路的一種靶基因,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關,在我們研究中模型組中l(wèi)gr5表達明顯高于空白組和對照組,所以我們推測持續(xù)的炎癥刺激Lgr5表達增加,Lgr5也可能為一種炎性促腫瘤重要因子。
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R573.31

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本文編號：2819063