目的:Wnt/β-catenin信號(hào)通路是經(jīng)典的信號(hào)通路,其不僅可以調(diào)控和影響干細(xì)胞的自我更新和分化,還參與細(xì)胞增殖、分化、運(yùn)動(dòng)及凋亡等一系列過程,其異常激活或基因的異常表達(dá)與腫瘤發(fā)生發(fā)展緊密聯(lián)系,Wntl作為Wnt大家族中的成員之一,在整個(gè)通路中它充當(dāng)啟動(dòng)因子,研究證實(shí)Wnt1與多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān),β-catenin,一種Mr 92,000蛋白,對(duì)鈣粘著蛋白為基礎(chǔ)的上皮細(xì)胞粘附起作用,同時(shí)也是Wnt信號(hào)的主要調(diào)節(jié)物,其異常表達(dá)與腫瘤患者不良預(yù)后相關(guān)。Lgr5(leucine-rich repeat-containing g-protein coupled receptor 5)又名GPR49,屬于G蛋白耦聯(lián)受體家族,是最新發(fā)現(xiàn)的一種Wnt通路的靶基因,而且還是一種人類潛在的結(jié)腸癌干細(xì)胞標(biāo)志物,已經(jīng)有研究表明lgr5在不同腫瘤組織中都大量表達(dá),如食管癌、肝癌、結(jié)腸癌、基底細(xì)胞癌及卵巢癌等等,慢性淺表性胃炎(chronic superficial gastritis,CSG)是多種誘因引起的慢性胃粘膜炎癥,屬于消化系統(tǒng)最普遍的疾病之一,治療不及時(shí)或治療不佳極易進(jìn)一步發(fā)展為慢性萎縮性胃炎甚至發(fā)生癌變,本研究通過建立大鼠慢性淺表性胃炎的模型,觀察Wnt1、β-catenin及l(fā)gr5在大鼠慢性淺表性胃炎胃組織中表達(dá)情況,便于在早期發(fā)現(xiàn)其與胃癌發(fā)展的相關(guān)性,起到早期發(fā)現(xiàn)并預(yù)防胃炎向胃癌進(jìn)一步發(fā)展。方法:1建立動(dòng)物模型:隨機(jī)選取30只成年雄性7周齡Wistar大鼠進(jìn)行編號(hào)、稱重,按隨機(jī)數(shù)字表順序分為3組,即空白組,對(duì)照組、模型組,每組10只,空白組:不做任何處理,正常飼養(yǎng)。對(duì)照組:0.9%生理鹽水每日10ml/kg自由飲用6個(gè)月。模型組:0.02%氨水自由飲用(現(xiàn)配),饑飽失常(進(jìn)食2天,禁食1天)。2造模成功后,將大鼠麻醉處死,采用HE染色,免疫組化、western blot和RT-PCR檢測(cè)各組中Wnt1、β-catenin以及l(fā)gr5的蛋白及基因的表達(dá)水平。結(jié)果:1 HE染色結(jié)果空白組和對(duì)照組顯示為正常腺胃組織,未見異常改變,模型組胃竇粘膜固有膜、粘膜肌及粘膜下大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。2 Western blot結(jié)果:在蛋白水平Western blot進(jìn)一步驗(yàn)證表明模型組中Wnt1、lgr5蛋白表達(dá)較空白組顯著增高(P0.05),但空白組和對(duì)照組間表達(dá)量差異不顯著,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3免疫組化結(jié)果:Wnt1、β-catenin及Lgr5免疫陽(yáng)性產(chǎn)物染色結(jié)果:Wnt1及Lgr5陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞的胞質(zhì)和胞漿中,空白組和對(duì)照組組免疫陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)量較低,兩者之間差異不顯著,模型組表達(dá)量較正常組和鹽水組顯著增加(P0.05),β-catenin的染色顯示空白組和對(duì)照組免疫陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)量較高,兩者之間無顯著差異(P0.05),模型組表達(dá)量較空白組和對(duì)照組顯著減少(P0.05)。4 RT-PCR結(jié)果:與空白組與對(duì)照組相比,模型組中Lgr5m RNA表達(dá)量增加(P0.05),而空白組和對(duì)照組組間差異不顯著,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1 Wnt/β-catenin信號(hào)通路中代表分子的異常表達(dá)或通路異常激活與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),Wnt1及l(fā)gr5在慢性淺表性胃炎組織中的表達(dá)量均高于對(duì)應(yīng)的空白組及對(duì)照組,而β-catenin表達(dá)為模型組較正常組及對(duì)照組偏低,提示W(wǎng)nt通路在炎性刺激的作用下可能已經(jīng)激活。2 Lgr5是Wnt通路的一種靶基因,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),在我們研究中模型組中l(wèi)gr5表達(dá)明顯高于空白組和對(duì)照組,所以我們推測(cè)持續(xù)的炎癥刺激Lgr5表達(dá)增加,Lgr5也可能為一種炎性促腫瘤重要因子。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R573.31

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本文編號(hào)：2819063