眾所周知,磷脂是構成生物膜的主要成分,攝取磷脂酰膽堿(PC)可改善膜磷脂組分,增加膜流動性和膜酶活性,提高細胞的抗氧化能力。Caveolin-1 (窖蛋白-1, Cav-1)是膜脂筏Caveolae(胞膜窖)的標記蛋白。近年發(fā)現,磷脂能夠促進Caveolin-1小泡的形成及轉運,對Caveolae結構的形成和穩(wěn)定及細胞膜組裝具有重要作用。本室前期工作表明,肝臟磷脂酰膽堿(肝PC)含有豐富的烯醚鍵,能夠抵抗脂質過氧化,對小鼠急性酒精肝損傷具有明顯的保護作用;同時發(fā)現,肝PC能夠促進小鼠肝臟中Cav-1蛋白表達,但作用機制尚不完全清楚。 本文以張氏肝細胞為對象,利用siRNA技術篩選出穩(wěn)定傳代的Cav-1低表達細胞株(Cav-1KD),建立酒精性肝細胞損傷模型;利用MTT、電導法和薄板層析(TLC)等技術檢測酒精損傷的Cav-1KD細胞膜特性及磷脂成份變化的影響;利用Western blot技術確定肝PC預保護的酒精肝損傷細胞中氧化應激途徑相關蛋白表達的變化,進一步探討肝PC對肝細胞酒精性損傷的保護作用與Cav-1的關系,旨在了解由Cav-1蛋白在肝臟損傷修復中的作用和信號轉導機制。 結果如下: 1.酒精作用導致細胞中超氧化物歧化酶(SOD)水平明顯降低(P0.05),并促進氧化應激通路中TLR4、TNF-α、NF-κB表達增高及p38磷酸化激活,引發(fā)張氏肝細胞氧化應激。肝PC顯著提高張氏肝細胞SOD活性(P0.05),降低TLR4、TNF-α、NF-κB、P-p38等蛋白表達水平,對肝細胞起保護作用。 2.利用RNA干擾技術建立張氏肝細胞模型,發(fā)現200mmol/L酒精引起Cav-1低表達細胞ALT釋放增加(P0.05),細胞電導率顯著增高(P0.01),膜PC、PE、SM等含量均降低。提示,Cav-1表達下調導致張氏肝細胞對酒精作用的敏感性明顯增高。 3.肝PC預保護可以明顯提高酒精損傷的Cav-1KD細胞存活率,促進Cav-1及PKCα蛋白表達。 結論:肝PC對張氏肝細胞酒精性損傷的保護作用與Cav-1密切相關。Cav-1表達下調導致張氏肝細胞對酒精作用的敏感性增高。肝PC可以通過改變膜磷脂成分,促進Cav-1介導的PKCα信號通路的激活,提高肝細胞膜的抗氧化能力,對抗酒精性損傷。
【學位單位】：遼寧師范大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2010
【中圖分類】：R575
【部分圖文】：

的重要酶類之一。在酒精誘導的氧化應激中 SOD 作為清酒精損傷中發(fā)揮著重要作用。實驗室前期工作可見，肝精誘導時小鼠肝臟中 SOD 活性而對肝臟具有明顯的保護驗中，以 75nmol/L 肝 PC 預保護 24h，加入 200mmol/L肝細胞內 SOD 水平。結果如圖 2.2，與對照組比較，酒精低(P<0.05)；經肝 PC 預保護可明顯升高細胞中 SOD 水作用。

圖 2.3 肝 PC 預保護及酒精損傷肝細胞 TLR4 蛋白表達The expression of TLR4 in Chang liver cells (CHL) incubated withpresented as the mean±S.D.*P<0.05 vs. Control, #P<0.05 vsPC 預保護對酒精損傷的肝細胞中 TNF-α蛋白表達的影死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)是參與酒精性精作用張氏肝細胞使 TNF-α 蛋白表達升高(P<0.05)，引保護可降低 TNF-α 蛋白表達(P<0.05)。提示，酒精代子，引起肝細胞炎癥反應。而肝 PC 則可顯著抑制肝

圖 2.3 肝 PC 預保護及酒精損傷肝細胞 TLR4 蛋白表達 expression of TLR4 in Chang liver cells (CHL) incubated with Ppresented as the mean±S.D.*P<0.05 vs. Control, #P<0.05 vs. A預保護對酒精損傷的肝細胞中 TNF-α蛋白表達的影響因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)是參與酒精性肝作用張氏肝細胞使 TNF-α 蛋白表達升高(P<0.05)，引護可降低 TNF-α 蛋白表達(P<0.05)。提示，酒精代謝，引起肝細胞炎癥反應。而肝 PC 則可顯著抑制肝細

【參考文獻】

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1 王亮;劉翠平;賈丹;鄒偉;;肝源性磷脂酰膽堿的分離純化及其對肝癌細胞抑制作用的評價[J];色譜;2006年03期

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本文編號：2816939