目的：1.分離、鑒定小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；2.建立肝硬化小鼠模型以及去除肝硬化小鼠體內(nèi)枯否細(xì)胞的小鼠動物模型；3.將分離成功的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植給實(shí)驗(yàn)小鼠三周后，觀察四組小鼠療效以及肝枯否細(xì)胞在體內(nèi)表型及功能的改變；4.探討枯否細(xì)胞是否參與了間充質(zhì)干細(xì)胞改善肝硬化的過程。 方法：1.采用全骨髓貼壁法聯(lián)合體外培養(yǎng)獲得高純度的雄性C57BL/6小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。2.通過骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁的特性以及形態(tài)學(xué)特征，再結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測表面抗原對其進(jìn)行鑒定。3.采用10%的CCL4溶于橄欖油，腹腔注射給C57BL/6小鼠，每周三次，共10周誘導(dǎo)肝硬化動物模型，并通過其造模期間肝臟的臨床病理表現(xiàn)對其進(jìn)行鑒定。4.通過磷酸二鈉脂質(zhì)體剔除肝硬化小鼠體內(nèi)的枯否細(xì)胞，并通過免疫組化觀察剔除的效率。5.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植3周后，收集四組小鼠血清，檢測ALB,ALT,AST，觀察肝功的改變。通過肝臟組織HE染色、天狼星紅染色觀察各組小鼠肝臟炎癥以及肝纖維化的改變。通過免疫熒光染色，在共聚焦顯微鏡下觀察體內(nèi)枯否細(xì)胞在體內(nèi)改變。在通過RT-PCR檢測肝臟組織IL-10，TNF-α,CD-206，Arg-1,iNos,等mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：1.采用全骨髓貼壁法成功獲得了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，呈典型的長梭型，成纖維樣，放射狀或旋渦狀排列。流式細(xì)胞儀檢測證實(shí)，CD-29，CD105表達(dá)陽性率在85%以上，CD-34，CD-45表達(dá)在15%以下。2.CCL4誘導(dǎo)10周后肝臟組織HE染色，天狼猩紅染色證實(shí)，肝硬化模型建立成功。3.磷酸脂質(zhì)體尾靜脈注射后24小時(shí)免疫組化證實(shí)，剔除枯否細(xì)胞的效率達(dá)90%以上。4.間充質(zhì)細(xì)胞移植3周后，M組的治療效果明顯好于其他三組，肝纖維化程度，肝臟炎癥，及肝細(xì)胞壞死程度都明顯減輕，肝臟功能也得到明顯改善。剔除肝臟枯否細(xì)胞的L組和LM組治療效果和對照組C組沒有明顯的差異，甚至肝硬化及肝細(xì)胞壞死程度加劇。5.M組小鼠肝臟內(nèi)CD68（+）枯否細(xì)胞的數(shù)量明顯低于對照組，而CD206（+）枯否細(xì)胞的數(shù)量明顯高于對照組。6.TR-PCR結(jié)果顯示，M組與對照組C組相比較促炎因子TNF-α明顯降低，抗炎因子IL-10表達(dá)升高，M1型枯否細(xì)相關(guān)的的iNOS mRNA表達(dá)降低，M2型枯否細(xì)胞相關(guān)Arg-1,CD-206的mRNA的表達(dá)明顯升高。 結(jié)論：1.成功建立了肝硬化小鼠模型，并證實(shí)間充質(zhì)干細(xì)胞可改善CCL4誘導(dǎo)的肝硬化小鼠肝功及纖維化程度。2.肝臟枯否細(xì)胞參與了間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝硬化的過程。3.間充質(zhì)干細(xì)胞可能通過誘導(dǎo)M2型肝臟枯否細(xì)胞的激活參與了治療肝硬化的過程。
【學(xué)位單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

  G. CCL48W HE 染色（100X）           H. CCL48W 天狼星紅染色（100X）圖 3-1：肝硬化動物模型建立過程中小鼠的肝臟組織病理學(xué)改變（HE 及天狼星紅）3.2 肝硬化的小鼠去除肝臟內(nèi)的 KC取四氯化碳造模成功的小鼠剔除 KCs24h 后,免疫組化證實(shí)生理鹽水水對照組21

          L 組 3w LM 組 3w    圖 3-3 四組小鼠肝臟組織病理變化 HE 染色（100x）        C 組 3w M 組 3w

             L 組 3w LM 組 3w    圖 3-3 四組小鼠肝臟組織病理變化 HE 染色（100x）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：2816274