目的:腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)是消化科一種常見的以腹痛、腹脹、腹部不適同時(shí)伴有排便習(xí)慣和性狀改變?yōu)橹饕攸c(diǎn)的下消化道疾病,是最常見的一種功能性胃腸病,人群發(fā)病率較高,其病情及癥狀持續(xù)反復(fù),嚴(yán)重影響及困擾著患者的身心健康及生活質(zhì)量。5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(serotonin transporte,SERT)是一種跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,廣泛分布于腸道EC細(xì)胞及神經(jīng)突觸前膜上,其作用是將效應(yīng)部位過多聚集的5-羥色胺(5-hydroxytryp tamin,5-HT)再攝取,從而終止5-HT的作用,并為合成新的5-HT提供底物,在IBS的發(fā)病中有著重要的作用。文獻(xiàn)報(bào)道,SERT基因多態(tài)性可影響SERT表達(dá),從而在IBS亞型的發(fā)生發(fā)展中起作用。然而,除基因本身之外,腸道微生態(tài)環(huán)境的改變也可能對(duì)SERT的表達(dá)產(chǎn)生影響。臨床上應(yīng)用益生菌治療腹瀉型及感染后腸易激綜合征取得了顯著療效。益生菌是否能夠調(diào)控SERT表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制尚不清楚。鼠李糖乳桿菌LGG(Lactobacillus rhamnosus GG)是臨床實(shí)驗(yàn)上研究比較多的益生菌之一。本研究通過采用鼠李糖乳桿菌上清液(Lactobacillus rhamnosus GG supernatant,LGG-s)對(duì)HT-29和Caco-2細(xì)胞及C57BL/6小鼠進(jìn)行干預(yù),并檢測(cè)SERTmRNA及SERT蛋白表達(dá)情況,探討鼠李糖乳桿菌上清是否會(huì)影響SERT的表達(dá),從而為益生菌緩解IBS的可能的機(jī)制提供新的方向。方法:(1)應(yīng)用3種不同稀釋濃度的鼠李糖乳桿菌上清液LGG-s(ATCC53103)和LGG-s(CGMCC1.3724)分別干預(yù)HT-29細(xì)胞和Caco-2細(xì)胞12小時(shí)和24小時(shí);(2)將48只雌性C57BL/6小鼠分為4組,一組為對(duì)照組,給予正常飲用水,其他三組分別予以未稀釋LGG-s(ATCC53103),2倍稀釋的LGG-s(ATCC53103)和3倍稀釋的LGG-s(ATCC53103)。小鼠處理持續(xù)時(shí)間分別為1周、2周、3周及4周。每周每組處死3只小鼠取其結(jié)腸備用。應(yīng)用RT-PCR及Western-blot來檢測(cè)HT-29細(xì)胞、Caco-2細(xì)胞及小鼠結(jié)腸組織的SERT mRNA及SERT蛋白的表達(dá)水平。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx?)來表示;計(jì)量資料3組以上組間比較用單因素方差分析,方差齊性時(shí)用LSD檢驗(yàn),方差不齊時(shí)用Dunnett T3法檢驗(yàn),均以P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:LGG-s(ATCC53103)干預(yù)HT-29細(xì)胞和Caco-2細(xì)胞24小時(shí),其SERT mRNA和SERT蛋白的表達(dá)水平與對(duì)照組相比明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,未稀釋LGG-s(ATCC53103)組第一周末SERT mRNA水平明顯升高,是對(duì)照組的9.4倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P0.05),第二周末SERT mRNA水平快速下降至接近對(duì)照組水平;2倍稀釋LGG-s(ATCC53103)在前兩周和第四周均能上調(diào)SERT mRNA的表達(dá),第三周SERT mRNA水平低于對(duì)照組水平,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P=0.006,P=0.007,均P0.05)。3倍稀釋的LGG-s(ATCC53103)在前3周對(duì)SERT mRNA無上調(diào)作用,在第4周SERT mRNA水平輕度升高,是對(duì)照組的1.6倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)中,未稀釋LGG-s(ATCC53103)對(duì)SERT蛋白水平無明顯影響,2倍稀釋LGG-s(ATCC53103)組的SERT蛋白水平均高于對(duì)照組,但稍有波動(dòng)。而3倍稀釋LGG-s(ATCC53103)組,前兩周SERT蛋白表達(dá)與對(duì)照組無明顯差異,第三周和第四周明顯高于對(duì)照組。結(jié)論:(1)LGG-s(ATCC53103)能夠上調(diào)腸道上皮和小鼠腸道組織的SERT mRNA和SERT蛋白的表達(dá);(2)LGG-s(ATCC53103)上調(diào)SERT mRNA和SERT蛋白的表達(dá)是具有時(shí)間依賴性的。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R574
【部分圖文】：

RT-PCR擴(kuò)增曲線

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士學(xué)位論文 一、對(duì)好的瓊脂糖凝膠緩慢的灌入內(nèi)槽玻璃板上，使凝膠基本于室溫下放置 30-40min 至完全凝固，拔下梳子，加入 TA，然后將含有凝膠的內(nèi)槽放于電泳槽中，電泳緩沖液要RT-PCR產(chǎn)物的EP管中加入3ul的6Xloadingbuffer使其混l 的混合物和 DNAMarker 依次加入膠板的小孔內(nèi)，記住每恒壓電泳，樣品則由負(fù)極向正極方向移動(dòng)，當(dāng)電泳條帶達(dá)泳；畢后，取出凝膠放于凝膠成像儀內(nèi)，經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)拍的片段大小以確定產(chǎn)物是否正確�；虍a(chǎn)物擴(kuò)增片段(見

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Xiu-Fang Cui;Wei-Mei Zhou;Yan Yang;Jun Zhou;Xue-Liang Li;Lin Lin;Hong-Jie Zhang;;Epidermal growth factor upregulates serotonin transporter and its association with visceral hypersensitivity in irritable bowel syndrome[J];World Journal of Gastroenterology;2014年37期

本文編號(hào)：2815576