目的:肝硬化是多種慢性肝病發(fā)展的共同結(jié)果,也是一個世界性的治療難題,晚期肝硬化出現(xiàn)肝功能減退,門脈高壓和多種并發(fā)癥,威脅著患者的生命,目前唯一有效的治療方法就是肝臟移植,但由于供肝的缺乏和手術(shù)費及終身接受抗排斥藥物治療的費用,使得肝移植不能普遍開展。肝硬化的病理學基礎(chǔ)是肝纖維化,而肝纖維化早期是具有可逆性的,因此,近年來的研究主要是針對抗肝纖維化的治療。 肝纖維化形成的實質(zhì)是肝臟的創(chuàng)傷愈合反應(yīng)。發(fā)生肝纖維化的機制可能是肝星狀細胞(HSC)受肝臟的致病因子刺激激活,分泌大量的細胞外基質(zhì)(ECM),并引起基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMPs)平衡失調(diào)及抑制HSC凋亡的發(fā)生。HSC的活化決定肝纖維化的形成、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸,是肝纖維化的關(guān)鍵,而轉(zhuǎn)化生長因子-β_1(TGF-β_1)是迄今所知道的在肝纖維化的啟動、進展乃至肝硬化的形成中發(fā)揮核心作用的細胞因子。TGF-β_1既能活化HSC,促使其分泌更多的TGF-β_1,形成TGF-β_1和HSC的惡性循環(huán),又能促進基質(zhì)合成并抑制其降解,同時抑制肝細胞再生,促其凋亡,它還通過對與肝纖維化有關(guān)的其他生長因子及調(diào)節(jié)基質(zhì)代謝的酶類施加廣泛影響,起到了致肝纖維化的作用。而TGF-β_1抗體可中和HSC產(chǎn)生的過多的TGF-β_1因子,拮抗TGF-β_1的致肝纖維化作用。國內(nèi)外已對TGF-β_1在HSC、細胞因子網(wǎng)絡(luò)、MMPs、TIMPs、纖溶酶中的作用等方面做了較為深入的研究,但由于其體系的復雜性,如何發(fā)揮TGF-β_1的積極作用,抑制TGF-β_1的促纖維化作用仍是今后科研工作中的一大重點。本研究旨在探討TGF-β_1抗體對活化的HSC中纖維性膠原、TIMPs的影響,以期進一步證實TGF-β_1抗體在肝纖維化逆轉(zhuǎn)中的作用,對研究肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展及其臨床治療具有重要的意義。 方法:本課題以大鼠肝星狀細胞HSC-T6為研究對象,把培養(yǎng)的HSC-T6接種于6孔板上,分為6組,設(shè)正常空白對照組,TGF-β_1 (1μg/ L)干預(yù)組,在TGF-β_1 (1μg/ L)干預(yù)的基礎(chǔ)上加入用培養(yǎng)基倍比稀釋的不同滴度的TGF-β_1抗體(1:100,1:200,1:400,1:800),每組均培養(yǎng)6個孔,在24小時后收集細胞,提取總RNA,用逆轉(zhuǎn)錄定量多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法分別測定各組的Ⅰ型膠原及TIMP-1的基因表達水平。 結(jié)果:TGF-β_1組Ⅰ型膠原的基因表達水平較正�？瞻讓φ战M明顯升高(正常組0.405±0.063,TGF-β_1組0.740±0.048,P0.01),在TGF-β_1抗體1:100組干預(yù)后,Ⅰ型膠原的基因表達水平較TGF-β_1組下降(1:100組0.557±0.047,與TGF-β_1比較P0.01),但仍高于正�？瞻讓φ战M(P0.01), TGF-β_1抗體1:200, 1:400, 1:800組干預(yù)后,Ⅰ型膠原的基因表達水平較正�？瞻讓φ战M及TGF-β_1組均無明顯差別(P0.05); TGF-β_1組TIMP-1的基因表達水平較正�？瞻讓φ战M明顯升高(正常組0.613±0.068,TGF-β_1組0.925±0.051,P0.01),在TGF-β_1抗體1:100組干預(yù)后,TIMP-1的基因表達水平較TGF-β_1組下降(1:100組0.703±0.063,P0.01),但仍高于正常空白對照組(P0.01), TGF-β_1抗體1:200,1:400,1:800組干預(yù)后,TIMP-1的基因表達水平較正�？瞻讓φ战M及TGF-β_1組均無明顯差別(P 0.05)。 結(jié)論:TGF-β_1使Ⅰ型膠原和TIMP-1的基因表達水平升高,促進了肝纖維化的發(fā)生,在TGF-β_1因子干預(yù)的基礎(chǔ)上,TGF-β_1抗體滴度為1:100時可在一定程度上抑制Ⅰ型膠原和TIMP-1的基因表達水平。因此,TGF-β_1抗體可能通過抑制Ⅰ型膠原及TIMP-1的基因表達,拮抗了TGF-β_1的致肝纖維化作用,對肝纖維化的逆轉(zhuǎn)起到了一定的治療作用。
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2008
【中圖分類】：R575.2

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本文編號：2811841