目的探討外源性TGF-β1對大鼠肝星狀細(xì)胞系(HSC-T6)信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的影響，為抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肝纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法（1）HSC-T6培養(yǎng)基中加/不加外源性TGF-β1(10ng/ml)，誘導(dǎo)2h后應(yīng)用RT-PCR法檢測TGF-β/Smad信號(hào)通路中各組蛋白mRNA的表達(dá)；（2）選用同樣的方法檢測加入外源性TGF-β1后不同時(shí)間點(diǎn)Smad7mRNA的表達(dá)；（3）將陰性對照質(zhì)粒（ctrl）、Smad3小干擾質(zhì)粒（siRNA-Smad3）分別轉(zhuǎn)染HSC-T6，各組再根據(jù)加/不加外源性TGF-β1分為(+)組和(-)組，RT-PCR法檢測Smad3、Smad7mRNA的表達(dá)；（4）Western印跡法分析外源性TGF-β1對不同時(shí)間點(diǎn)Smad3、Smad7蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果（1）外源性TGF-β1能誘導(dǎo)TGF-β/Smad信號(hào)通路中Smad7mRNA的高表達(dá)（2.990±0.101，t=-33.962，P=0.001），但對TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3、Smad4、Smad6mRNA的表達(dá)均無明顯影響（均P＞0.05）；（2）外源性TGF-β1處理HSC-T6后，Smad7mRNA的表達(dá)迅速增高，于2h達(dá)峰值，為0h的2.99倍，隨后開始逐漸下降，Smad7的表達(dá)量與0h相比均無明顯變化（均P＞0.05）；（3）與陰性對照組相比，siRNA-Smad3組Smad3mRNA的表達(dá)明顯下降（0.532±0.169，t=4.810，P=0.041），同時(shí)siRNA-Smad3（-）組Smad7mRNA的表達(dá)較ctrl（-）組明顯降低，siRNA-Smad3（+）組Smad7mRNA的表達(dá)較ctr（l+）組也明顯降低（F=9.787，P=0.02）；(4)不同時(shí)間點(diǎn)Smad3蛋白表達(dá)水平均無明顯變化（均P＞0.05）；Smad7蛋白表達(dá)與PCR的結(jié)果一致，呈時(shí)間依賴。 結(jié)論外源性TGF-β1可誘導(dǎo)HSC-T6中Smad7早期短時(shí)高表達(dá);Smad3可能是外源性TGF-β1誘導(dǎo)Smad7表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，TGF-β1通過活化Smad3調(diào)節(jié)Smad7的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R575.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2811941