自幽門螺桿菌發(fā)現(xiàn)至今已有20多年，盡管對幽門螺桿菌及其相關(guān)疾病的研究已經(jīng)取得了很大進展，但其感染造成慢性胃炎、萎縮性胃炎、消化性潰瘍、胃癌及胃粘膜相關(guān)淋巴樣組織淋巴瘤等不同臨床結(jié)局的機制研究仍然是一個廣為關(guān)注的熱點。一般認(rèn)為，導(dǎo)致不同疾病發(fā)生的原因除與宿主本身遺傳特性和環(huán)境因素有關(guān)外，致病原的某些特性也是主要原因。宿主在不同毒力活性的菌株的作用下，胃腸上皮細胞是增殖還是凋亡、胃酸分泌水平是升高還是減低，都將直接導(dǎo)致不同的臨床病理改變。 作為幽門螺桿菌主要毒力因子之一的空泡細胞毒素(VacA)，因分泌量低、天然蛋白純化困難、重組蛋白又缺乏毒力活性等原因，在其致病性的研究上遠遠落后于CagA。然而隨著對幽門螺桿菌研究的深入，這種不需通過細菌直接粘附便可發(fā)揮毒性作用的分泌性蛋白又漸漸引起了研究者的興趣。為此，本研究通過體外細胞實驗，觀察了從液體培養(yǎng)幽門螺桿菌上清液粗提的含有VacA的分泌蛋白對胃壁細胞酸分泌以及胃上皮細胞增殖／凋亡的調(diào)控作用。 1．液體培養(yǎng)VacA~+幽門螺桿菌上清液粗提蛋白對離體兔胃壁細胞酸分泌的影響 本研究：1)應(yīng)用液體培養(yǎng)方法培養(yǎng)幽門螺桿菌(NCTC 11637)，以硫酸銨沉淀法提取菌液上清蛋白(BCF-P)并進行真空干燥濃縮，Hela細胞中性紅攝取試驗鑒定其空泡細胞活性。2)采用淘洗和連續(xù)密度梯度離心相結(jié)合的方法獲得兔離體胃壁細胞，通過不同抑酸藥物的作用，從丫叮橙染色、~(14)C-AP攝取、H~+／K~+ATP酶α亞基mRNA表達水平三個方面來鑒定分離壁細胞具有酸分泌功能。3)電鏡觀察幽門螺桿菌上清液粗提蛋白對壁細胞形態(tài)學(xué)影響，并從~(14)C-AP攝取、H~+K~+ATP酶mRNA表達水平兩方面分析幽門螺桿菌上清液粗提蛋白及EGF對組胺刺激的壁細胞酸分泌的影響。 研究結(jié)果顯示：1)液體培養(yǎng)幽門螺桿菌上清提取蛋白(BCF-P)中含有95KD空泡細胞毒素，對Hela細胞表現(xiàn)出空泡活性，中性紅試驗陽性。2)抗酸藥物能顯著抑制組胺刺激壁細胞對~(14)C-AP的攝取(P＜0.05)，并干擾基礎(chǔ)狀態(tài)下H~+-K~+ATP酶α亞基mRNA表達，提示淘洗分離獲得的離體壁細胞具有良好的酸
【學(xué)位單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2005
【中圖分類】：R573

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本文編號：2810524