目的:運(yùn)用析因設(shè)計(jì)旨在觀察限食聯(lián)合多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的影響,并初步闡釋其對(duì)大鼠PPARγ/NF-κB信號(hào)通路的影響。方法:選取40只健康SD雌性大鼠,隨機(jī)分為5組:正常組、模型組、限食組(CR)、5:1PUFAs自由進(jìn)食組(5:1PUFAs+AL)、5:1PUFAs限食組(5:1PUFAs+CR)。正常組、限食組和模型組的大鼠提供普通飼料;5:1PUFAs限食組和5:1PUFAs自由進(jìn)食組的大鼠提供5:1PUFAs配制飼料,限食大鼠的喂食量占自由進(jìn)食的60%。喂養(yǎng)14周后,除正常組外,其余四組均給予5%DSS溶液自由飲用1周制備大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。所有大鼠3天后處死,剝離出結(jié)腸測(cè)量其長(zhǎng)度并稱重及計(jì)算濕重指數(shù);觀察大體形態(tài)并進(jìn)行評(píng)分;并用生化法檢測(cè)結(jié)腸組織和血清髓過氧化物酶(MPO)活性;用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)結(jié)腸組織中IL-6、IL-2、IL-10和TNF-α水平;用免疫組化法來檢測(cè)結(jié)腸組織中PPARγ、NF-κB p65蛋白的表達(dá)情況;用逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)結(jié)腸組織中NF-κB p65、PPARγm RNA水平。結(jié)果:1.一般狀況:與自由進(jìn)食的大鼠相比,限食的大鼠體重增長(zhǎng)速度緩慢,尤其是5:1PUFAs限食組體重最輕,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.肉眼大體形態(tài)評(píng)分:模型組可見粘膜充血腫脹,結(jié)腸表面有糜爛、出血點(diǎn)及潰瘍,其大體形態(tài)評(píng)分明顯增加,5:1PUFAs限食組上述特征明顯緩解,大體評(píng)分降低(P0.05)。3.疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分:與正常組比較,模型組DAI評(píng)分較高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,5:1PUFAs限食組評(píng)分降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.結(jié)腸長(zhǎng)度、重量及濕重指數(shù):與正常組相比,模型組結(jié)腸長(zhǎng)度明顯縮短,結(jié)腸重量顯著升高(P0.05)。與模型組相比,5:1PUFAs限食組結(jié)腸長(zhǎng)度增長(zhǎng),而結(jié)腸重量及濕重指數(shù)下降(P0.05)。5.結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分:結(jié)果顯示正常組結(jié)腸黏膜上皮完好,上皮細(xì)胞排列整齊,腺體規(guī)則,無炎性細(xì)胞浸潤(rùn),且無充血、水腫和潰瘍的形成;模型組結(jié)腸黏膜上皮脫落,腺體排列錯(cuò)亂,彌漫性炎性細(xì)胞浸潤(rùn);與模型組相比,5:1PUFAs限食組炎癥有所改善,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。限食與5:1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分無交互作用(P0.05)。6.血清和組織MPO活性:模型組血清和結(jié)腸組織中MPO活性最高,而5:1PUFAs限食組血清和結(jié)腸中MPO活性下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。限食與5:1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)血清和組織MPO活性無交互作用(P0.05)。7.細(xì)胞因子的檢測(cè):相對(duì)于正常組,模型組大鼠結(jié)腸組織的TNF-α、IL-6水平升高,IL-2、IL-10水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與模型組相比,5:1PUFAs限食組IL-6、TNF-α水平降低,IL-2、IL-10水平升高(P0.05)。限食與5:1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞因子有交互作用(P0.05)。8.免疫組化的結(jié)果:與正常組相比,模型組大鼠結(jié)腸組織PPARγ表達(dá)降低,NF-κB p65蛋白的表達(dá)水平升高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,5:1PUFAs限食組大鼠結(jié)腸組織PPARγ表達(dá)升高,NF-κB p65蛋白的表達(dá)水平降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。限食與5:1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)結(jié)腸組織蛋白表達(dá)NF-κB p65和PPARγ存在交互作用(P0.05)。9.RT-PCR反應(yīng)的結(jié)果:與正常組相比,模型組大鼠結(jié)腸組織NF-κB p65 m RNA的表達(dá)水平升高,PPARγm RNA表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,5:1PUFAs限食組大鼠結(jié)腸組織NF-κB p65 m RNA表達(dá)水平降低,PPARγm RNA顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。限食與5:1PUFAs的聯(lián)合作用對(duì)結(jié)腸組織PPARγ和NF-κB p65 m RNA表達(dá)存在交互作用(P0.05)。結(jié)論:1.葡聚糖硫酸鈉(DSS)是一種人工合成的類肝素硫酸多糖,用5%DSS溶液代替自來水飲用1周成功建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。2.限食聯(lián)合5:1PUFAs對(duì)UC大鼠有保護(hù)作用,可能的作用機(jī)理是與抗氧化損傷和減輕炎癥作用有關(guān),上調(diào)PPARγ的表達(dá)而負(fù)性調(diào)節(jié)NF-κB的轉(zhuǎn)導(dǎo),抑制炎癥細(xì)胞募集,從而減少炎癥因子的表達(dá),減緩炎癥反應(yīng),對(duì)UC起保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R574.62;R459.3
【部分圖文】：

1.1.5 干預(yù)物及飼料亞麻籽油主要成分及含量(%)為：α-亞麻酸 52%，油酸 20.44%，棕櫚酸 5.67%，硬脂酸 3.72%。紅花籽油主要成分及含量(%)為：亞油酸 81.3%，油酸 11.2%，棕櫚酸 5.32%，硬脂酸 1.90%。普通飼料來源于山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。5:1 PUFAs配制飼料是在普通飼料的基礎(chǔ)上，添加總量n-6/n-3PUFAs=5%的亞麻籽油和紅花籽油，例如100g飼料是由95g基礎(chǔ)飼料添加總量為5g n-6/n-3=5:1的亞麻籽油和紅花籽油。氣相色譜法分析5:1 PUFAs配制飼料中脂肪酸的含量，其主要組分及含量(%)為：亞油酸4.92%、亞麻酸0.92%、棕櫚酸0.21%、硬脂酸0.064%、油酸0.69%(見圖1-1)。

由進(jìn)食組大鼠體重增長(zhǎng)符合動(dòng)物自然生長(zhǎng)規(guī)律，限食組大鼠體重增長(zhǎng)速驗(yàn)前各組大鼠最初體重差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，與比，限食大鼠體重減輕(見表 2-1)，尤其是 5:1PUFAs 限食組體重最輕學(xué)意義(P<0.05)，解剖時(shí)觀察到限食大鼠腹腔內(nèi)脂肪比自由進(jìn)食大鼠少表 2-1 各組大鼠最初、最終體重比較( x ±s，n=8)a表示限食大鼠與非限食大鼠相比較，P<0.05分組 最初體重/g 最終體重/g正常組 203.76±13.87 356.21±29.76模型組 199.14±11.44 348.83±30.85CR 組 198.44±19.34 261.04±27.44a5:1PUFAs+AL 組 199.53±19.16 328.31±29.235:1PUFAs+CR 組 198.18±16.45 237.49±16.65a

大鼠出現(xiàn)血便；而兩個(gè)限食組大鼠較模型組精神狀態(tài)好，毛色稍黯淡，活黏液稀便的情況有所好轉(zhuǎn)，其中 5:1PUFAs 限食組大鼠癥狀最輕。結(jié)果可 DAI 評(píng)分高于正常組，5:1PUFAs 限食組 DAI 評(píng)分低于模型組，差別有統(tǒng)<0.05)(見表 2-2，圖 2-2)。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 侯慶芬;王欣妮;;潰瘍性結(jié)腸炎病因與發(fā)病機(jī)制的研究[J];中外醫(yī)療;2009年20期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王蕾;限食和多不飽和脂肪酸對(duì)DSS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎Nrf2氧化通路的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2808255