【摘要】： 目的 探討α-AR阻滯劑和β-AR阻滯劑對(duì)ET-1介導(dǎo)的HSCs收縮的影響,為β-AR阻滯劑聯(lián)用α-AR阻滯劑降低肝硬化門脈高壓提供新的理論依據(jù)。 方法 1體外培養(yǎng)HSCs,Western blot檢測(cè)HSCs AR蛋白的表達(dá);免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)腎上腺素受體亞型在HSCs的分布與定位。 2應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡(laser confocal scanning microscope,LSCM),采用第三代鈣熒光探針Fluo-3/AM觀察α-AR阻滯劑(酚妥拉明)、非選擇性β-AR阻滯劑(普萘洛爾)、β1-AR阻滯劑(美托洛爾)及β2-AR阻滯劑(ICI-118551)對(duì)正常HSCs以及ET(1.1×10-9 mol·L-1)介導(dǎo)下的HSCs[Ca2+]i熒光強(qiáng)度、細(xì)胞面積及最大長(zhǎng)徑變化的影響。 3計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±S)表示,用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以P㩳0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果 1 Western blot證實(shí)HSCs表達(dá)α-AR、β1-AR、β2-AR分別在大約57 kD、50 kD、47 kD位置出現(xiàn)α-AR、β1-AR、β2-AR特異性條帶。 2免疫細(xì)胞化學(xué)法證實(shí)HSCs可以表達(dá)α-AR、β1-AR、β2-AR,且α-AR、β1- AR、β2-AR在HSCs中的分布基本一致,主要分布于細(xì)胞漿,細(xì)胞膜也有少量表達(dá)。 3除β1-AR阻滯劑美托洛爾外,其余各AR阻滯劑能夠?qū)е翲SCs[Ca2+]i顯著下降(P0.05);但各AR阻滯劑對(duì)HSCs收縮無顯著影響。 4 ET-1能夠引發(fā)的HSCs[Ca2+]i瞬間而短暫的升高,且出現(xiàn)HSCs面積及最大直徑顯著減小,EC50值約在1.1×10-9mol?L-1。 5除β1-AR阻滯劑美托洛爾外,其余各AR阻滯劑能夠顯著抑制ET-1引起的HSC內(nèi)Ca2+濃度升高及收縮作用(P0.05),其中β2-AR阻滯劑(ICI11-8551)組和α+β-AR阻滯劑(酚妥拉明+普萘洛爾)阻滯劑組作用最顯著。 結(jié)論 1 HSCs可以表達(dá)α-AR、β1-AR和β2-AR腎上腺素受體蛋白主要分布于HSCs的細(xì)胞漿,細(xì)胞膜也有少量表達(dá)。 2普萘洛爾、酚妥拉明、ICI-118551不僅能夠引起HSC [Ca2+]i下降,還能夠抑制ET-1介導(dǎo)的HSCs收縮,以ICI-118551及酚妥拉明+普萘洛爾聯(lián)用時(shí)用更強(qiáng)。 3β1-AR阻滯劑美托洛爾既不能夠引起HSC [Ca2+]i下降,也不能夠抑制ET- 1介導(dǎo)的HSCs收縮。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R575.2
【圖文】：

α-AR、β1-AR、β2-AR 在 HSCs 中的分布基本一致，主要分布于細(xì)胞漿，細(xì)胞膜也有少量表達(dá)（見圖 3.A～C）。4 LSCM 檢測(cè) HSCs [Ca2+]i、面積、長(zhǎng)度變化4.1 HSCs 的 Ca2+成像LSCM 下 Ca2+成像的 HSCs 仍可見普通倒置顯微鏡下的形態(tài)特征，細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i 的濃度的高低由細(xì)胞被激發(fā)出的熒光強(qiáng)弱表示，熒光強(qiáng)度越強(qiáng)表示[Ca2+]i濃度越高，反之則越低。本實(shí)驗(yàn) HSCs 與 Fluo-3/AM 孵育后，所有細(xì)胞均有鈣離子結(jié)合后的綠色熒光表達(dá)，且各細(xì)胞間的熒光強(qiáng)度基本一致。(見圖 4)4.2 靜息狀態(tài)下 HSCs[Ca2+]i 的動(dòng)態(tài)變化為證明 PBS 液本身對(duì) HSCs[Ca2+]i 的影響，本研究觀察了 4 個(gè) HSCs 在實(shí)驗(yàn)所需的時(shí)間內(nèi)（20min）[Ca2+]i 的動(dòng)態(tài)變化，結(jié)果表明，HSCs 在實(shí)驗(yàn)所需的整個(gè)時(shí)間內(nèi)[Ca2+]i 熒光強(qiáng)度基本保持穩(wěn)定（見圖 5）

圖 6 不同濃度 ET-1 對(duì) HSCs[Ca2+]i 的累積反應(yīng)曲線4.4 α、β-AR 阻滯劑對(duì) HSCs[Ca2+]i 濃度、面積及長(zhǎng)度的影響在 LSCM 下可觀察到除 β1-AR 阻滯劑美托洛爾外，其余各 AR 阻滯劑夠引起 HSCs[Ca2+]i 顯著下降(P＜0.05)；但各 AR 阻滯劑對(duì) HSCs 收縮無顯響（見表 2，圖 7）。表 2 α、β-AR 阻滯劑對(duì) HSCs[Ca2+]i 濃度、面積及長(zhǎng)度的影響( x ±S，n=組別 [Ca2+]i 濃度 面積變化（%） 長(zhǎng)度變化空白對(duì)照組 68.64 ± 7.00 —— ——普萘洛爾組 56.88 ± 4.73a5.37 ± 0.68 5.65 ±0.8美托洛爾組 65.24 ± 6.61 5.10 ± 0.84 5.84 ± 1.ICI118551 組 55.57 ± 4.07a5.64 ± 1.13 6.14 ± 0.

Westernblot檢測(cè)出的各種AR在HSCs中的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2807213