【摘要】： 第一部分感染后腸易激綜合征小鼠模型的建立 目的觀察旋毛蟲腸道急性感染后不同造模時間點小鼠內(nèi)臟敏感性和結(jié)腸肌條收縮的變化,以建立模擬人感染后腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感的動物模型。方法旋毛蟲幼蟲囊胞(350～400條)感染成年NIH小鼠,分別于感染后2、4、8、12周后稱量小鼠體重的變化,通過腹壁回撤反應(yīng)(AWR)評分評估感染前后不同造模點小鼠對結(jié)直腸擴(kuò)張(CRD)的內(nèi)臟敏感性,處死小鼠取空腸、末端回腸、近端結(jié)腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸行HE染色觀察腸道病理并對炎癥情況進(jìn)行評分,觀察結(jié)腸肌條收縮變化。結(jié)果2周、4周組體重增長率低于正常組(P0.05),8、12周組體重增長率與正常對照組無差異(P0.05)。2周、4周組腸道各部位炎癥評分高于正常組(Bonferroni校正P0.05/10)；8、12周組與正常組相比均無差異(Bonferroni校正P0.05/10)。在擴(kuò)張壓力為30、45、60 mm Hg時,各模型組AWR評分均高于正常組(P0.05)；所有模型組疼痛閾值、容量閾值均低于同時間點正常對照組(P0.05),以2周組變化最為明顯；感染后小鼠結(jié)腸肌條收縮均增高,以2周時增加最為明顯(P0.05)。結(jié)論小鼠旋毛蟲急性感染后8周腸道炎癥消退,但內(nèi)臟敏感性和結(jié)腸肌條高收縮性維持增高,因此適合作為感染后腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感動物模型。 第二部分感染后腸易激綜合征小鼠腸道Thl1/Th2的漂移 目的觀察感染后腸易激綜合征模型小鼠腸道組織中Th1類細(xì)胞因子IL-12和Th2類細(xì)胞因子IL-4表達(dá)的變化方法旋毛蟲幼蟲囊胞(350-400條)感染成年NIH小鼠,感染后每周測量小鼠體重,于感染后8周通過腹壁回撤反應(yīng)(AWR)評分評估造模前后小鼠對結(jié)直腸擴(kuò)張(CRD)的內(nèi)臟敏感性,處死小鼠取空腸、末端回腸、近端結(jié)腸、遠(yuǎn)端結(jié)腸行病理切片HE染色觀察腸道炎癥情況。應(yīng)用RT-PCR和Western-blot檢測腸道各部位組織中IL-12、IL-4的mRNA和蛋白的表達(dá)量結(jié)果感染后2周小鼠體重明顯下降(P0.05),感染后8周體重變化與正常對照組無差異(P0.05)。感染后2周急性感染期腸道炎癥明顯,感染后8周腸道無明顯炎癥表現(xiàn)。在結(jié)直腸擴(kuò)張壓力為30、45、60 mm Hg時,模型組AWR評分均高于正常組(P0.05)；模型組疼痛閾值、容量閾值均低于正常對照組(P0.05)。PI-IBS小鼠末端回腸和近端結(jié)腸組織中IL-12 mRNA及蛋白表達(dá)量均高于正常對照組(P0.05),IL-4 mRNA及蛋白在各腸段中的表達(dá)均低于正常對照組(P0.05)。結(jié)論PI-IBS小鼠腸道組織中Th1類細(xì)胞因子表達(dá)增高,Th2類細(xì)胞因子表達(dá)降低,存在Th1/Th2平衡的漂移。 第三部分感染后腸易激綜合征小鼠腸道固有層樹突狀細(xì)胞表型和功能的改變 目的樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell, DC)作為腸道固有層一種重要的抗原提呈細(xì)胞,可能與腸道粘膜免疫激活有關(guān)從而導(dǎo)致感染后腸易激綜合征(Postinfectious irritable bowel syndrome, PI-IBS)的發(fā)生。本試驗即研究腸道固有層DCs (Lamina propria DCs, LPDCs)在PI-IBS小鼠模型發(fā)生發(fā)展過程中表型和功能的改變。方法旋毛蟲感染NIH小鼠,通過記錄結(jié)直腸擴(kuò)張下的腹壁回撤反射(Abdominal withdrawal reflex, AWR)評價其內(nèi)臟敏感性。酶消化法結(jié)合磁珠分選技術(shù)分離腸道固有層的DCs。流式細(xì)胞術(shù)檢測LPDCs表面膜分子標(biāo)志。研究LPDCs的內(nèi)吞活性、混合淋巴細(xì)胞刺激反應(yīng)(mixed lymphocyte reaction, MLR)以及趨化能力。ELISA檢測LPDCs分泌的細(xì)胞因子。結(jié)果急性感染期腸道炎癥明顯,感染后8周腸道炎癥基本消退而內(nèi)臟高敏感存留。急性期LPDCs表面膜分子CD86和MHCII低表達(dá),而在慢性期表達(dá)增加。在急性感染期LPDCs內(nèi)吞活性增加,但是刺激和趨化CD4+T淋巴細(xì)胞的能力減弱。然而,在慢性感染PI-IBS期,LPDCs內(nèi)吞活性降低但趨化和刺激CD4+T淋巴細(xì)胞增殖的能力增強(qiáng)。LPDCs在急性期分泌細(xì)胞因子以IL-4為主,而在PI-IBS期以INF-γ和IL-23為主。結(jié)論在PI-IBS的發(fā)生發(fā)展過程中,腸道固有層樹突狀細(xì)胞表型和功能發(fā)生了改變,使腸道粘膜免疫激活長期存在,誘導(dǎo)內(nèi)臟高敏感,為感染后腸易激綜合征的治療提供新的方向。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R574.4
【圖文】：

感染后8周，腸道充血水腫不明顯，絨毛結(jié)構(gòu)排列恢復(fù)正常，固有層無中性粒細(xì)胞浸潤，間質(zhì)無水腫。感染后12周腸道病理與8周相似。與正常組相比(見圖2)，2周模型組腸道各部位炎癥評分明顯高于正常組(尸<0.05/lO);感染后4周，炎癥評分較之2周組降低，但仍高于正常組(尸<0.05/10);至感染后8周，與正常組無差異(尸>0.05/10);12周模型腸道炎癥評分與8周及正常組相比均無差異 (P>0.05/10)。州l…叫(1) 2.5月 1111 2.0}雨}}一_}口對照組}}}圈2w、}川些4咐比酬.酬靄豁#麗四服甲l..|||上叼目田么#.!而四山門

本文編號：2807111