【摘要】： 背景與目的: 吡格列酮是過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)-γ的配體,近年來(lái)研究表明PPAR-γ是治療炎癥性腸病(IBD)的潛在靶點(diǎn),它經(jīng)配體激活后通過(guò)抑制NF-κB的活化,減少促炎癥細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄及表達(dá),從而下調(diào)過(guò)度的免疫炎癥反應(yīng)。TLRs信號(hào)通路的激活可活化NF-κB,從而誘導(dǎo)促炎因子的產(chǎn)生,這在IBD的發(fā)病中起重要作用。然而在IBD發(fā)病中抗炎的PPAR-γ信號(hào)通路和促炎的TLRs信號(hào)通路之間的相互關(guān)系目前所知甚少。為此本文觀察了吡格列酮對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的治療作用,以及在這一過(guò)程中PPAR-γ,TLRs信號(hào)通路的重要因子TLR2、TLR4、MyD88、TLRs信號(hào)通路負(fù)性調(diào)控因子SIGIRR、NF-κB的活化標(biāo)志物NF-κB p65的表達(dá)變化,研究PPAR-γ信號(hào)通路和TLRs信號(hào)通路在IBD中的相互關(guān)系,從一新的角度探討吡格列酮對(duì)IBD的作用機(jī)制。 方法: ⑴實(shí)驗(yàn)分組: ①對(duì)照組:未建模的小鼠僅給予藥物賦形劑0.5%CMC;②模型組:建模的小鼠僅給予藥物賦形劑0.5%CMC;③柳氮磺胺吡啶(SASP)組:建模的小鼠給予100mg/kgSASP+0.5%CMC;④吡格列酮高劑量(PG1)組:建模的小鼠給予100mg/kg吡格列酮+0.5%CMC;⑤吡格列酮中劑量(PG2)組:建模的小鼠給予50mg/kg吡格列酮+0.5%CMC;⑥吡格列酮低劑量(PG3)組:建模的小鼠給予25mg/kg吡格列酮+0.5%CMC。每組10只小鼠。 ⑵DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎模型的建立和藥物治療: BALB/c小鼠自由飲用3%DSS溶液7天,然后停止飲用DSS溶液改用蒸餾水10天,建立小鼠慢性結(jié)腸炎模型,模型建立成功標(biāo)志為有半稀便、腹瀉、大便隱血陽(yáng)性和肉眼血便中的任一癥狀。將飲用蒸餾水的小鼠作為對(duì)照組。在造模第2天開(kāi)始分別按上述分組的藥物劑量灌胃,每天1次直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。處死小鼠,取標(biāo)本待測(cè)。實(shí)驗(yàn)共18天。 ⑶各項(xiàng)指標(biāo)的觀察和檢測(cè): ①觀察每天各組小鼠體重、疾病活動(dòng)指數(shù)DAI;②肉眼觀察小鼠結(jié)腸大體形態(tài)改變,HE染色觀察病理組織學(xué)改變;③RT-PCR方法檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織中TLR2、TLR4、MyD88、SIGIRR和PPAR-γmRNA的表達(dá);④免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織中TLR2、TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白的表達(dá)。 結(jié)果: ⑴小鼠體重和DAI積分改變 ①除對(duì)照組外各組小鼠在實(shí)驗(yàn)第5天體重顯著下降,在第10天及第15天體重體重逐漸回升。在實(shí)驗(yàn)第5、10、15天模型組和各藥物組體重下降百分比均高于對(duì)照組(P0.001,0.005,0.05);在實(shí)驗(yàn)第5天SASP組和吡格列酮高、低劑量組體重下降百分比均低于模型組(P0.05),在實(shí)驗(yàn)第10天吡格列酮低劑量組體重下降百分比均于模型組和SASP組(P0.05),在實(shí)驗(yàn)第15天SASP組體重下降百分比顯著低于模型組和吡格列酮中劑量組(P0.05),吡格列酮高劑量組體重下降百分比低于模型組和吡格列酮中、低劑量組(P0.05,0.005,0.001)。 ②各組小鼠DAI積分在實(shí)驗(yàn)第5、10天有顯著差異,對(duì)照組的DAI積分顯著低于模型組和各藥物組(P0.001);實(shí)驗(yàn)第5天SASP組和吡格列酮高劑量組顯著低于模型組(P0.001,0.05),吡格列酮高劑量組顯著低于吡格列酮中劑量組(P0.05);在實(shí)驗(yàn)第10天吡格列酮低劑量組顯著低于模型組、SASP組和吡格列酮中劑量組(P0.05)。在實(shí)驗(yàn)第15天各組小鼠DAI積分雖有差異,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 ⑵小鼠結(jié)腸病理學(xué)改變 ①小鼠腸黏膜大體形態(tài):正常對(duì)照組小鼠結(jié)腸黏膜無(wú)充血、水腫,模型組可見(jiàn)明顯結(jié)腸黏膜充血、水腫,SASP組和吡格列酮組結(jié)腸黏膜充血、水腫較模型組輕;各組結(jié)腸肉眼觀察均未見(jiàn)明顯的潰瘍和糜爛。 ②小鼠結(jié)腸病理組織學(xué)嚴(yán)重度評(píng)分:無(wú)論是結(jié)腸炎癥程度、病變深度還是隱窩破壞程度在正常對(duì)照組均顯著低于其它各組(P0.001,0.005);在SASP和吡格列酮高、中劑量組均顯著低于模型組(P0.001,0.005,0.05);炎癥程度在吡格列酮高劑量組還顯著低于吡格列酮低劑量組(P0.05)。 ⑶小鼠結(jié)腸黏膜TLR2表達(dá):TLR2 mRNA的表達(dá)在各組小鼠結(jié)腸黏膜內(nèi)無(wú)顯著差異(P0.05);但是,TLR2蛋白的表達(dá)在正常對(duì)照組顯著低于模型組和各藥物組(P0.001),在SASP組和吡格列酮高、中劑量組顯著低于模型組(P0.05),在吡格列酮低、中、高劑量各組,呈劑量依賴(lài)地下降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 ⑷小鼠結(jié)腸黏膜TLR4表達(dá):TLR4 mRNA的表達(dá)在模型組顯著高于對(duì)照組和各藥物組(P0.001,0.01),在吡格列酮低、中、高劑量各組,呈劑量依賴(lài)地下降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且各藥物組與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異(P0.05);TLR4蛋白的表達(dá)在正常對(duì)照組顯著低于模型組和各藥物組(P0.001,0.005),在SASP組和吡格列酮高、中劑量組顯著低于模型組(P0.01,0.05),在吡格列酮低、中、高劑量各組,呈劑量依賴(lài)地下降,高劑量組顯著低于低劑量組(P0.05)。 ⑸小鼠結(jié)腸黏膜MyD88的表達(dá):MyD88 mRNA的表達(dá)在模型組顯著高于對(duì)照組、SASP組和吡格列酮高劑量組(P0.001,0.05),在吡格列酮低、中、高劑量各組,呈劑量依賴(lài)地下降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且各藥物組與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異(P0.05)。MyD88蛋白的表達(dá)在正常對(duì)照組顯著低于模型組和各藥物組(P0.001),在SASP組和吡格列酮高、中劑量組顯著低于模型組(P0.05),在吡格列酮低、中、高劑量各組,呈劑量依賴(lài)地下降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 ⑹小鼠結(jié)腸黏膜SIGIRR mRNA的表達(dá):SIGIRR mRNA的表達(dá)在對(duì)照組顯著高于模型組、SASP組和吡格列酮低、中劑量組(P0.005,0.01,0.05),各藥物組與模型組無(wú)顯著差異(P0.05),在吡格列酮低、中、高劑量各組,呈劑量依賴(lài)地增加,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 ⑺小鼠結(jié)腸黏膜PPAR-γmRNA的表達(dá):PPAR-γmRNA的表達(dá)在對(duì)照組顯著高于模型組和吡格列酮低、中劑量組(P0.005,0.01,0.05),在SASP組顯著高于模型組(P0.05),在吡格列酮低、中、高劑量各組,呈劑量依賴(lài)地增加,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 ⑻小鼠結(jié)腸黏膜NF-κB p65蛋白的表達(dá):NF-κB p65蛋白的表達(dá)在正常對(duì)照組顯著低于模型組和各藥物組(P0.001,0.005,0.01),在SASP組和吡格列酮高劑量組顯著低于模型組(P0.05),在吡格列酮低、中、高劑量各組,呈劑量依賴(lài)地下降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論: ⑴DSS誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎腸黏膜PPAR-γ和SIGIRR的表達(dá)降低,TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB p65表達(dá)增加,提示TLRs/NF-κB信號(hào)通路過(guò)度激活和它的負(fù)性調(diào)控機(jī)制的減弱及PPAR-γ信號(hào)通路的抑制參與了IBD的致病。 ⑵PPAR-γ配體吡格列酮可減輕小鼠結(jié)腸的癥狀和病理組織的炎癥和損傷,有望成為治療IBD的新途徑。 ⑶給予吡格列酮后小鼠結(jié)腸組織中TLR2、TLR4、MyD88和NF-κB p65的表達(dá)顯著下降,并與結(jié)腸炎癥的緩解有關(guān),提示PPAR-γ配體可能通過(guò)抑制TLRs/NF-κB的激活減輕組織炎癥反應(yīng)。 ⑷給予吡格列酮后小鼠結(jié)腸組織中SIGIRR和PPAR-γ的表達(dá)有劑量依賴(lài)性上調(diào),提示PPAR-γ配體可能通過(guò)SIGIRR和PPAR-γ對(duì)TLRs/NF-κB信號(hào)通路進(jìn)行負(fù)性調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R574.62
【圖文】：

圖 3.2 各組小鼠結(jié)腸的大體形態(tài)注：A 為對(duì)照組，B 為模型組，C 為 SASP 組，D 為 PG1 組3.3 小鼠結(jié)腸組織病理變化表 3.2 各組小鼠結(jié)腸病理組織學(xué)嚴(yán)重程度評(píng)分組別 n 炎癥 病變深度 隱窩破壞對(duì)照組 10 0.50±0.53 0.00±0.00 0.00±0.00模型組 10 6.70±2.41a4.10±2.23a4.90±2.23aSASP 組 10 3.70±1.95a,c2.10±0.57b,d2.60±1.65a,dPG1 組 10 3.20±1.93b,c,g2.20±1.23a,d2.70±1.34a,dPG2 組 10 3.90±1.79a,d2.70±1.25a,f3.00±1.16a,ePG3 組 10 5.10±2.38a3.20±1.87a3.70±1.64aF=11.41P<0.05F=9.59P<0.05F=11.69P<0.05注：a 為 P<0.001 vs 對(duì)照組；b 為 P<0.005 vs 對(duì)照組；c 為 P<0.001 vs 模型組；d 為 P<0.005 vs 模型組；e

如表 3.2 所示，無(wú)論是結(jié)腸炎癥程度、病變深度還是隱窩破壞程度在正常對(duì)照組均顯著低于其它各組(P<0.001，0.005)；在 SASP 和吡格列酮高、中劑量組均顯著低于模型組(P<0.001，0.005，0.05)；炎癥程度在吡格列酮高劑量組還顯著低于吡格列酮低劑量組(P<0.05)(圖 3.3-3.8)。

如表 3.2 所示，無(wú)論是結(jié)腸炎癥程度、病變深度還是隱窩破壞程度在正常對(duì)照組均顯著低于其它各組(P<0.001，0.005)；在 SASP 和吡格列酮高、中劑量組均顯著低于模型組(P<0.001，0.005，0.05)；炎癥程度在吡格列酮高劑量組還顯著低于吡格列酮低劑量組(P<0.05)(圖 3.3-3.8)。

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本文編號(hào)：2804882