【摘要】：第一章土三七誘導小鼠HSOS模型的建立與評價 目的：采用PBS、野百合堿、環(huán)磷酰胺、嗎替麥考酚酯、云南三七、土三七小鼠灌胃法,比較各組小鼠HSOS發(fā)生率,以求成功構建穩(wěn)定可復制的HSOS建模方法,并給予綜合評價。 方法：160只清潔級健康雌性昆明小鼠隨機分為六組：PBS正常對照組、野百合堿組、環(huán)磷酰胺組、嗎替麥考酚酯組、云南三七組和土三七組。分別予以野百合堿灌胃7天,環(huán)磷酰胺隔日灌胃30天,PBS、嗎替麥考酚酯、云南三七、土三七灌胃30天后處死小鼠。檢測血液中血細胞計數、肝功能情況；測肝重/體重；留取肝組織行HE染色、Masson染色,用修改后的Deleve評分標準進行病理學評分。 結果： 1.野百合堿組、環(huán)磷酰胺組和土三七組分別有23只、5只和24只小鼠成模,PBS正常對照組、云南三七組和MMF組小鼠未誘導出HSOS。 2.與PBS正常對照組比較,野百合堿組及土三七組小鼠體重有增加(P0.05),其中以土三七組小鼠體重增加更為明顯；環(huán)磷酰胺組小鼠體重明顯下降(P0.05)；而MMF組和云南三七組小鼠體重與PBS正常對照組無明顯差異(P0.05)。 3.與PBS正常對照組對比,野百合堿組和土三七組小鼠血細胞中RBC及PLT計數下降,WBC計數增加(P0.05)；云南三七組RBC計數稍有增加,WBC和PLT計數稍有減少,但差異并無統(tǒng)計學意義(P0.05)；環(huán)磷酰胺組和MMF組小鼠均出現(xiàn)三系減少,且以環(huán)磷酰胺組減少得更為明顯(P0.05)。 4.與PBS正常對照組比較,各模型組小鼠肝指數、ALT、AST、 TBIL均明顯升高,ALB明顯下降(P0.05)；MMF組小鼠肝功能較PBS正常對照組亦存在一定程度損害,但明顯輕于環(huán)磷酰胺組(P0.05)；云南三七組小鼠肝功能變化情況與正常對照PBS正常對照組比較無明顯差異(P0.05)。 5.根據修改后的Deleve評分標準,野百合堿組小鼠多為輕-中度HSOS改變,土三七組及環(huán)磷酰胺組小鼠多表現(xiàn)為中-重度HSOS。 結論： 1.野百合堿、環(huán)磷酰胺、土三七均能成功誘導小鼠HSOS模型,其中環(huán)磷酰胺法成模率低于野百合堿和土三七灌胃法,云南三七和MMF未能成功誘導出小鼠HSOS模型。 2.野百合堿、土三七誘導的小鼠HSOS模型均符合人類HSOS病理改變,其中野百合堿可誘導急性HSOS模型,土三七可誘導慢性HSOS模型,為HSOS的進一步研究提供了理想動物模型。 3.與野百合堿比較,土三七誘導的HSOS動物模型在進行藥物建模機制、藥物干預研究方面更為理想。 4.與土三七比較,云南三七未能成功誘導出小鼠HSOS模型,說明云南三七無明顯肝毒性,臨床用藥相對安全。 5.與環(huán)磷酰胺比較,嗎替麥考酚酯的骨髓抑制及肝毒性均較輕,是相對安全的免疫抑制劑。 第二章強的松對土三七誘導HSOS的防治療效觀察 目的：探討不同劑量強的松對土三七誘導小鼠HSOS的防治作用。 方法：115只清潔級健康雌性昆明小鼠隨機分為四組：PBS正常對照組、土三七組、低劑量強的松干預組(5mg·kg-1·d-1)和高劑量強的松干預組(10mg·kg-1·d-1)分別灌胃30天后處死小鼠。檢測血液中血細胞計數、肝功能情況；測肝重/體重；留取肝組織行HE染色、Masson染色,用修改后的Deleve評分標準進行病理學評分；并用免疫組織化學法和RT-PCR法檢測肝組織的TGF-β1和CTGF表達水平。 結果： 1.土三七組、低劑量強的松干預組和高劑量強的松干預組分別有24只、5只和7只小鼠成模,PBS正常對照組無一成模。 2.與土三七組比較,兩組強的松干預組小鼠RBC及PLT計數稍有增加,WBC計數減少,ALB下降明顯輕于土三七組,TBIL增高程度亦低于土三七組(P0.05),ALT和AST無明顯差異,不同劑量干預組間無明顯差異(P0.05)；低劑量強的松干預組小鼠肝指數明顯下降(P0.01),但高劑量強的松干預組小鼠肝指數改變不明顯(P0.05)。 3.根據修改后的Deleve評分標準,土三七組小鼠多表現(xiàn)為中-重度HSOS,強的松干預組多表現(xiàn)為輕-中度,無重度HSOS發(fā)生,其中以低劑量組平均評分更低(P0.05)。 4.肝組織TGF-β1和CTGF表達：免疫組化和RT-PCR均顯示兩組強的松干預組與土三七組比較,TGF-β1和CTGF表達明顯減少(P0.05),不同劑量干預組間無明顯差異(P0.05)。 結論： 1.強的松干預可降低土三七誘導的小鼠HSOS發(fā)生,改善小鼠一般情況和肝功能水平,減輕肝竇內皮細胞損害及肝竇纖維化等肝臟病理組織學損傷。 2.與高劑量強的松(10mg·kg-1·d-1)比較,低劑量強的松(5mg·kg-1·d-1)干預土三七誘導的HSOS小鼠模型,在改善肝竇纖維化方面并無顯著差異,但就血藥濃度及遠期副作用考慮,5mg·kg-1·d-1可能為更為理想的防治劑量。 3. TGF-β1和CTGF的表達水平可反映HSOS的病情程度、病理改變及臨床轉歸等情況,對觀察療效、評估預后等有重要意義。 第三章強的松對土三七誘導HSOS防治機制的探討 目的：研究強的松對炎性因子及致纖因子的表達及調控機制,從ECM的合成與降解、參與肝竇纖維化形成的細胞因子角度探討強的松作為HSOS治療藥物的可能性及作用途徑和機制,為HSOS的治療提供進一步的理論和實驗依據。 方法：115只清潔級健康雌性昆明小鼠隨機分為四組：PBS正常對照組、土三七組、低劑量強的松干預組(5mg·kg-1·d-1)和高劑量強的松干預組(10mg·kg-1·d-1)分別灌胃30天后處死小鼠。應用RT-PCR法檢測肝組織中MMP-1、TIMP-1、MCP-1、TNF-α、IL-1β和NF-κBp65mRNA的表達,western blot法檢測TNF-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表達。 結果： 1. RT-PCR結果：土三七組小鼠肝組織中MMP-1、TIMP-1、 MCP-1、TNF-α、IL-1β、NF-κBp65mRNA的表達較PBS正常對照組顯著增高(P0.01),強的松干預后肝組織中NF-κBp65、TNF-α、IL-1β、 MCP-1mRNA的表達較模型組下降(P0.05)。與PBS正常對照組比較,土三七組MMP-1/TIMP-1顯著減小(P0.01),強的松干預后MMP-1/TIMP-1較土三七組明顯上升(P0.05)。不同劑量干預組間無明顯差異(P0.05)。 2.Western blot結果：土三七組小鼠肝組織中TNA-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表達較PBS正常對照組顯著增高(P0.01),強的松干預后肝組織中TNA-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表達較模型組下降(P0.05),且不同劑量干預組間無明顯差異(P0.05)。 結論：強的松在土三七誘導HSOS模型過程中,可能通過下調核轉錄因子NF-κB的表達,調控趨化蛋白MCP-1和炎癥因子TNF-α和IL-1p,進而減少HSC的活化,抑制TGF-β1、CTGF、TIMP-1合成,促進MMP-1降解ECM,降低SEC損害及ECM沉積,減輕炎癥和纖維化,起到有效防治HSOS的作用。
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R575

【參考文獻】

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本文編號：2803826