【摘要】：第一章土三七誘導(dǎo)小鼠HSOS模型的建立與評(píng)價(jià) 目的：采用PBS、野百合堿、環(huán)磷酰胺、嗎替麥考酚酯、云南三七、土三七小鼠灌胃法,比較各組小鼠HSOS發(fā)生率,以求成功構(gòu)建穩(wěn)定可復(fù)制的HSOS建模方法,并給予綜合評(píng)價(jià)。 方法：160只清潔級(jí)健康雌性昆明小鼠隨機(jī)分為六組：PBS正常對(duì)照組、野百合堿組、環(huán)磷酰胺組、嗎替麥考酚酯組、云南三七組和土三七組。分別予以野百合堿灌胃7天,環(huán)磷酰胺隔日灌胃30天,PBS、嗎替麥考酚酯、云南三七、土三七灌胃30天后處死小鼠。檢測血液中血細(xì)胞計(jì)數(shù)、肝功能情況；測肝重/體重；留取肝組織行HE染色、Masson染色,用修改后的Deleve評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分。 結(jié)果： 1.野百合堿組、環(huán)磷酰胺組和土三七組分別有23只、5只和24只小鼠成模,PBS正常對(duì)照組、云南三七組和MMF組小鼠未誘導(dǎo)出HSOS。 2.與PBS正常對(duì)照組比較,野百合堿組及土三七組小鼠體重有增加(P0.05),其中以土三七組小鼠體重增加更為明顯；環(huán)磷酰胺組小鼠體重明顯下降(P0.05)；而MMF組和云南三七組小鼠體重與PBS正常對(duì)照組無明顯差異(P0.05)。 3.與PBS正常對(duì)照組對(duì)比,野百合堿組和土三七組小鼠血細(xì)胞中RBC及PLT計(jì)數(shù)下降,WBC計(jì)數(shù)增加(P0.05)；云南三七組RBC計(jì)數(shù)稍有增加,WBC和PLT計(jì)數(shù)稍有減少,但差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；環(huán)磷酰胺組和MMF組小鼠均出現(xiàn)三系減少,且以環(huán)磷酰胺組減少得更為明顯(P0.05)。 4.與PBS正常對(duì)照組比較,各模型組小鼠肝指數(shù)、ALT、AST、 TBIL均明顯升高,ALB明顯下降(P0.05)；MMF組小鼠肝功能較PBS正常對(duì)照組亦存在一定程度損害,但明顯輕于環(huán)磷酰胺組(P0.05)；云南三七組小鼠肝功能變化情況與正常對(duì)照PBS正常對(duì)照組比較無明顯差異(P0.05)。 5.根據(jù)修改后的Deleve評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),野百合堿組小鼠多為輕-中度HSOS改變,土三七組及環(huán)磷酰胺組小鼠多表現(xiàn)為中-重度HSOS。 結(jié)論： 1.野百合堿、環(huán)磷酰胺、土三七均能成功誘導(dǎo)小鼠HSOS模型,其中環(huán)磷酰胺法成模率低于野百合堿和土三七灌胃法,云南三七和MMF未能成功誘導(dǎo)出小鼠HSOS模型。 2.野百合堿、土三七誘導(dǎo)的小鼠HSOS模型均符合人類HSOS病理改變,其中野百合堿可誘導(dǎo)急性HSOS模型,土三七可誘導(dǎo)慢性HSOS模型,為HSOS的進(jìn)一步研究提供了理想動(dòng)物模型。 3.與野百合堿比較,土三七誘導(dǎo)的HSOS動(dòng)物模型在進(jìn)行藥物建模機(jī)制、藥物干預(yù)研究方面更為理想。 4.與土三七比較,云南三七未能成功誘導(dǎo)出小鼠HSOS模型,說明云南三七無明顯肝毒性,臨床用藥相對(duì)安全。 5.與環(huán)磷酰胺比較,嗎替麥考酚酯的骨髓抑制及肝毒性均較輕,是相對(duì)安全的免疫抑制劑。 第二章強(qiáng)的松對(duì)土三七誘導(dǎo)HSOS的防治療效觀察 目的：探討不同劑量強(qiáng)的松對(duì)土三七誘導(dǎo)小鼠HSOS的防治作用。 方法：115只清潔級(jí)健康雌性昆明小鼠隨機(jī)分為四組：PBS正常對(duì)照組、土三七組、低劑量強(qiáng)的松干預(yù)組(5mg·kg-1·d-1)和高劑量強(qiáng)的松干預(yù)組(10mg·kg-1·d-1)分別灌胃30天后處死小鼠。檢測血液中血細(xì)胞計(jì)數(shù)、肝功能情況；測肝重/體重；留取肝組織行HE染色、Masson染色,用修改后的Deleve評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分；并用免疫組織化學(xué)法和RT-PCR法檢測肝組織的TGF-β1和CTGF表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.土三七組、低劑量強(qiáng)的松干預(yù)組和高劑量強(qiáng)的松干預(yù)組分別有24只、5只和7只小鼠成模,PBS正常對(duì)照組無一成模。 2.與土三七組比較,兩組強(qiáng)的松干預(yù)組小鼠RBC及PLT計(jì)數(shù)稍有增加,WBC計(jì)數(shù)減少,ALB下降明顯輕于土三七組,TBIL增高程度亦低于土三七組(P0.05),ALT和AST無明顯差異,不同劑量干預(yù)組間無明顯差異(P0.05)；低劑量強(qiáng)的松干預(yù)組小鼠肝指數(shù)明顯下降(P0.01),但高劑量強(qiáng)的松干預(yù)組小鼠肝指數(shù)改變不明顯(P0.05)。 3.根據(jù)修改后的Deleve評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),土三七組小鼠多表現(xiàn)為中-重度HSOS,強(qiáng)的松干預(yù)組多表現(xiàn)為輕-中度,無重度HSOS發(fā)生,其中以低劑量組平均評(píng)分更低(P0.05)。 4.肝組織TGF-β1和CTGF表達(dá)：免疫組化和RT-PCR均顯示兩組強(qiáng)的松干預(yù)組與土三七組比較,TGF-β1和CTGF表達(dá)明顯減少(P0.05),不同劑量干預(yù)組間無明顯差異(P0.05)。 結(jié)論： 1.強(qiáng)的松干預(yù)可降低土三七誘導(dǎo)的小鼠HSOS發(fā)生,改善小鼠一般情況和肝功能水平,減輕肝竇內(nèi)皮細(xì)胞損害及肝竇纖維化等肝臟病理組織學(xué)損傷。 2.與高劑量強(qiáng)的松(10mg·kg-1·d-1)比較,低劑量強(qiáng)的松(5mg·kg-1·d-1)干預(yù)土三七誘導(dǎo)的HSOS小鼠模型,在改善肝竇纖維化方面并無顯著差異,但就血藥濃度及遠(yuǎn)期副作用考慮,5mg·kg-1·d-1可能為更為理想的防治劑量。 3. TGF-β1和CTGF的表達(dá)水平可反映HSOS的病情程度、病理改變及臨床轉(zhuǎn)歸等情況,對(duì)觀察療效、評(píng)估預(yù)后等有重要意義。 第三章強(qiáng)的松對(duì)土三七誘導(dǎo)HSOS防治機(jī)制的探討 目的：研究強(qiáng)的松對(duì)炎性因子及致纖因子的表達(dá)及調(diào)控機(jī)制,從ECM的合成與降解、參與肝竇纖維化形成的細(xì)胞因子角度探討強(qiáng)的松作為HSOS治療藥物的可能性及作用途徑和機(jī)制,為HSOS的治療提供進(jìn)一步的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：115只清潔級(jí)健康雌性昆明小鼠隨機(jī)分為四組：PBS正常對(duì)照組、土三七組、低劑量強(qiáng)的松干預(yù)組(5mg·kg-1·d-1)和高劑量強(qiáng)的松干預(yù)組(10mg·kg-1·d-1)分別灌胃30天后處死小鼠。應(yīng)用RT-PCR法檢測肝組織中MMP-1、TIMP-1、MCP-1、TNF-α、IL-1β和NF-κBp65mRNA的表達(dá),western blot法檢測TNF-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1. RT-PCR結(jié)果：土三七組小鼠肝組織中MMP-1、TIMP-1、 MCP-1、TNF-α、IL-1β、NF-κBp65mRNA的表達(dá)較PBS正常對(duì)照組顯著增高(P0.01),強(qiáng)的松干預(yù)后肝組織中NF-κBp65、TNF-α、IL-1β、 MCP-1mRNA的表達(dá)較模型組下降(P0.05)。與PBS正常對(duì)照組比較,土三七組MMP-1/TIMP-1顯著減小(P0.01),強(qiáng)的松干預(yù)后MMP-1/TIMP-1較土三七組明顯上升(P0.05)。不同劑量干預(yù)組間無明顯差異(P0.05)。 2.Western blot結(jié)果：土三七組小鼠肝組織中TNA-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表達(dá)較PBS正常對(duì)照組顯著增高(P0.01),強(qiáng)的松干預(yù)后肝組織中TNA-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表達(dá)較模型組下降(P0.05),且不同劑量干預(yù)組間無明顯差異(P0.05)。 結(jié)論：強(qiáng)的松在土三七誘導(dǎo)HSOS模型過程中,可能通過下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達(dá),調(diào)控趨化蛋白MCP-1和炎癥因子TNF-α和IL-1p,進(jìn)而減少HSC的活化,抑制TGF-β1、CTGF、TIMP-1合成,促進(jìn)MMP-1降解ECM,降低SEC損害及ECM沉積,減輕炎癥和纖維化,起到有效防治HSOS的作用。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2803826