【摘要】：目的:酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)為長期大量酒精攝入或短期過量飲酒所致的肝臟疾病,其初期通常表現(xiàn)為脂肪肝,嚴重者可進展至脂肪性肝炎、肝纖維化甚至肝硬化。酒精引起肝功能損傷的具體機制尚不十分明確,目前有研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)酰胺(ceramide)參與到其發(fā)病過程中。神經(jīng)酰胺屬于鞘磷脂類,參與構(gòu)成生物膜,并為鞘磷脂信號途徑中重要的第二信使,能夠激活多種蛋白激酶和蛋白磷酸酶如蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A),調(diào)節(jié)凋亡、增殖等信號過程。乙醇激活酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASMase)后,使神經(jīng)酰胺生成增多,通過蛋白磷酸酶2A影響腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK),使活化的AMPK去磷酸化失活,進而影響到下游一系列脂代謝調(diào)節(jié)基因,導(dǎo)致肝細胞內(nèi)脂肪堆積。本研究采用酒精灌胃方式建立大鼠ALD模型,通過分子生物學(xué)方法探討神經(jīng)酰胺、酸性鞘磷脂酶及蛋白磷酸酶2A在酒精性肝病發(fā)病機制中的作用。方法:選擇健康雄性Wistar大鼠50只,體重180-220g,經(jīng)過正常喂養(yǎng)l周之后,隨機分配10只作為正常對照組,其余大鼠作為模型組每日灌入酒精,并分別在第4周、8周、12周和16周末處死模型組大鼠10只、9只、8只和8只。取出大鼠肝臟后,用4%中性甲醛溶液固定一部分肝組織,經(jīng)石蠟包埋后切片,行蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色以觀察其病理改變,其余組織-80℃保存待用。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real Time-quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)法檢測ASMase、PP2A的mRNA表達水平,免疫組化技術(shù)、Western-blot檢測ASMase、PP2A的蛋白表達水平。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)檢測肝組織神經(jīng)酰胺含量。結(jié)果:1肝臟組織病理學(xué)改變:4周大鼠肝細胞可見脂肪變性,至8周、12周,脂肪變加重,炎癥增多并伴隨纖維組織增生,至16周,肝細胞呈彌漫小泡性脂變,可見肝竇周圍纖維化、匯管區(qū)的纖維組織增生,并觀察到已形成的纖維間隔。2免疫組化技術(shù)檢測各指標蛋白表達水平:正常組大鼠肝組織中ASMase、PP2A陽性表達較少,酒精模型組陽性表達量呈增加趨勢。3 RT-qPCR法檢測各指標mRNA表達的變化:正常組大鼠肝組織中ASMase、PP2A mRNA表達量較少,酒精模型組mRNA表達量逐漸增加,與正常對照組相比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。4 Western-blot檢測各指標蛋白表達水平的變化:正常組大鼠肝組織中ASMase、PP2A蛋白表達量較少,酒精模型組表達量呈增加趨勢,與正常對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.01)。5高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測肝組織中神經(jīng)酰胺的含量:酒精模型組大鼠肝內(nèi)神經(jīng)酰胺含量逐漸增加,與正常對照組相比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。結(jié)論:1應(yīng)用酒精喂養(yǎng)制備的大鼠酒精性肝病模型,其肝臟脂肪變性、炎癥程度及纖維化改變可以基本反映酒精性肝病的病理學(xué)改變,應(yīng)用此動物模型研究酒精性肝病的發(fā)病機制具有一定科學(xué)性。2應(yīng)用不同實驗方法檢測神經(jīng)酰胺、酸性鞘磷脂酶及蛋白磷酸酶2A的表達水平,結(jié)果均隨脂變程度的加重而逐漸升高,提示這三者及其之間的相關(guān)性可能參與到酒精性肝病的發(fā)病機制中。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王炳元,傅寶玉;酒精性肝病的診斷與治療[J];中華肝臟病雜志;2001年05期

2 劉厚鈺;我國酒精性肝病研究現(xiàn)狀與展望[J];中華消化雜志;2002年07期

3 甘天福,丁明權(quán),張光曙;酒精性肝病防治研究現(xiàn)狀[J];人民軍醫(yī);2002年08期

4 陸倫根;酒精性肝病的治療[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2002年07期

5 厲有名;;酒精性肝病的研究進展[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

6 李安福,李雪冬;中西醫(yī)結(jié)合治療酒精性肝病的療效觀察[J];郴州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報;2003年04期

7 卿篤信,凌奇荷;酒精性肝病的診斷與治療[J];現(xiàn)代實用醫(yī)學(xué);2003年01期

8 樸熙緒,張媛;酒精性肝病的診斷[J];胃腸病學(xué);2003年05期

9 武景連,富琳巖,錢學(xué)艷;達斡爾族部分居民酒精性肝病的患病情況[J];中華全科醫(yī)師雜志;2003年01期

10 李異玲,王炳元;酒精性肝病的治療[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2004年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張瑞芬;;中西醫(yī)結(jié)合治療酒精性肝病臨床觀察[A];第十三次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

2 厲有名;;中國酒精性肝病的研究現(xiàn)狀[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

3 徐有青;;酒精性肝病的進展[A];首屆江西省中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)研討會、首屆江西省中西醫(yī)結(jié)合肝病新進展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2008年

4 閻明;;從基礎(chǔ)實驗看酒精性肝病的發(fā)生與治療[A];中華醫(yī)學(xué)會第十六次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

5 劉勛臣;;86例酒精性肝病臨床分析[A];新世紀 新機遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（下冊）[C];2001年

6 厲有名;;我國酒精性肝病的研究現(xiàn)狀[A];新世紀 新機遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（下冊）[C];2001年

7 崔雷;洪陽;周力;;酒精性肝病的診療進展[A];2009年貴州省中西醫(yī)結(jié)合消化系病學(xué)術(shù)交流暨專題學(xué)術(shù)講座論文匯編[C];2009年

8 姚樹坤;;酒精性肝病的中西醫(yī)結(jié)合治療[A];第二十三屆全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議暨消化疾病診治進展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

9 姚樹坤;;酒精性肝病的中西醫(yī)結(jié)合治療[A];全國中西醫(yī)結(jié)合發(fā)展戰(zhàn)略研討會暨中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會成立三十周年紀念會論文匯編[C];2011年

10 鄭娉娉;王炳元;;非酒精性脂肪性肝病與酒精性肝病的異同[A];第二十次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 吳一福;我國酒精性肝病發(fā)病呈逐年上升趨勢[N];中國醫(yī)藥報;2007年

2 記者 孟凡明;酒精性肝病研究基地在長揭牌[N];吉林日報;2011年

3 本報記者　李娜;警惕酒精性肝病[N];吉林日報;2006年

4 伏新順;酒精性肝病防治[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

5 ;浙江省酒精性肝病流行病學(xué)調(diào)查概況[N];中國醫(yī)藥報;2003年

6 孫克偉;警惕酒精性肝炎[N];大眾衛(wèi)生報;2007年

7 葉建平;我國酒精性肝病發(fā)病率上升[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

8 本報記者 王建影;飲酒無度必成“酒精肝”[N];保健時報;2004年

9 保健時報特約記者 朱麗麗;酒精性肝病是慢性損傷[N];保健時報;2007年

10 河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院 教授 張明輝;莫讓酒精傷你肝[N];家庭醫(yī)生報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 閻明;乙醇所致線粒體損傷與酒精性肝病機制的研究[D];山東大學(xué);2006年

2 陳衛(wèi)星;酒精性肝病的分子流行病學(xué)調(diào)查和發(fā)病機理的研究[D];浙江大學(xué);2001年

3 金武丕;細胞凋亡相關(guān)基因及因素在大鼠酒精性肝病中的相關(guān)性研究[D];延邊大學(xué);2008年

4 周寧;酒精性肝病發(fā)生發(fā)展的基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2013年

5 崔克樂;天然免疫細胞在酒精性肝病中的作用機制研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2014年

6 孫捷;德惠市飲酒與酒精性肝病流行病學(xué)現(xiàn)況調(diào)查及相關(guān)因素分析[D];吉林大學(xué);2008年

7 周俊英;酒精性肝病發(fā)病機制及脂肝寧防治ALD作用機理的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

8 朱孔錫;線粒體DNA ATPase6，8基因突變與大鼠酒精性肝病發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2006年

9 邢微微;IL-22結(jié)構(gòu)功能及其在酒精性肝病和暴發(fā)性肝炎中的作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

10 劉穎;CYPIIE1與GSTP1多態(tài)性及mRNA水平在酒精性肝病中的研究[D];吉林大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王曦;肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶Iα（CPTIα）在酒精性肝病中發(fā)病機制的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 畢立娟;Lipin-1在酒精性肝病發(fā)病機理中作用的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉元勛;代謝相關(guān)因素及血清TNF-α和E-選擇素與酒精性肝病和/或幽門螺桿菌感染及頸動脈內(nèi)膜厚度關(guān)系的研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

4 楊柳;神經(jīng)酰胺在酒精性肝病發(fā)病機制中作用的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 孫平;維生素D受體基因多態(tài)性與酒精性肝病相關(guān)性研究[D];蘭州大學(xué);2009年

6 王麗霞;酒精性肝病164例臨床分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2004年

7 崔美蘭;延邊地區(qū)朝、漢族男性乙醛脫氫酶2基因多態(tài)性與酒精性肝病的關(guān)系[D];延邊大學(xué);2005年

8 褚菲菲;酒精性肝病合并乙型肝炎病毒感染60例臨床分析[D];鄭州大學(xué);2012年

9 朱慧艷;酒精性肝病的診斷和治療進展[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

10 朱萍;線粒體與酒精性肝病關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2007年

本文編號：2797713