【摘要】： 目的：急性壞死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis, ANP)病情兇險(xiǎn),病程發(fā)展快,病死率高,其病程中常出現(xiàn)全身性炎癥反應(yīng)綜合征、嚴(yán)重感染、感染性休克及多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS),導(dǎo)致死亡。近年來(lái)隨著對(duì)其發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞在ANP中起重要的作用。本研究旨在探討氯膦酸二鈉脂質(zhì)體(liposomal clodronate, LC)對(duì)ANP大鼠枯否細(xì)胞(Kupffer cell, KC)凋亡的作用。 方法：采用薄膜法制備LC；經(jīng)大鼠胰腺被膜下均勻注射5%�；悄懰徕c4ml／kg制作ANP模型,分離培養(yǎng)ANP大鼠Kupffer細(xì)胞,加入不同體積的Clodronate脂質(zhì)體(50μl、100μl、150μl)進(jìn)行干預(yù),然后分別采用MTT法,流式細(xì)胞術(shù)和DNA瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)KC增殖、凋亡情況。 結(jié)果：所制備的脂質(zhì)體直徑100-200nm,Clodronate包裹率為(5.8%),透射電鏡檢查見(jiàn)其大小均勻。獲得的KC形態(tài)正常,經(jīng)瑞氏染色法鑒定純度90%,臺(tái)盼藍(lán)染色,細(xì)胞存活率95%。在三種不同體積的LC干預(yù)24小時(shí)后,KC的抑制率分別為17.4%,24.2%和31.1%；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在三種不同體積LC干預(yù)下,KC凋亡率分別為(14.12±0.37)%,(18.74±0.43)%和(27.51±0.39)%,差異均有顯著性(P0.01)；經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳顯示,隨著Clodronate脂質(zhì)體體積的增加,KC的DNA出現(xiàn)降解,逐漸呈現(xiàn)漸清晰的特征性梯狀條帶。 結(jié)論：利用薄膜法制備LC操作簡(jiǎn)單,方法易于掌握,我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中成功制備出了LC,通過(guò)透射電鏡發(fā)現(xiàn)其大小均勻。在本實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn),LC對(duì)ANP大鼠KC生長(zhǎng)具有明顯抑制作用,并可誘導(dǎo)其凋亡。本實(shí)驗(yàn)為ANP的臨床治療提供了新的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R576
【圖文】：

腺被膜下注射均勻注射5%�；悄懰徕c4m城g制作AN甲模圖1ANP模型的建立Fig.IConstructionofANPmodelinfat的分離，純化與培養(yǎng)

圖3KC顯微鏡觀察(HEx40)Fig.3TheObservationofKCinmieroscope脂質(zhì)體形態(tài)、大小及脂質(zhì)體中dodronate包裹率所制備的LC平均直徑約100一200nm，包裹率為5.8%，透射電鏡檢查好，大小均勻。(圖4)

2.3脂質(zhì)體形態(tài)、大小及脂質(zhì)體中dodronate包裹率所制備的LC平均直徑約100一200nm，包裹率為5.8%，透射電鏡檢查見(jiàn)其形態(tài)良好，大小均勻。(圖4)圖4電鏡下脂質(zhì)體形態(tài)良好，大小均勻(x4000， x12000) Fig.4ThesPhericalshapeofliposome15goodandthesize15uniformin lransmissioneleetronmieroseope

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