【摘要】：目的:研究含白細(xì)胞介素2(IL-2)基因的重組質(zhì)粒pcDNA3.1/IL-2對(duì)乙肝重組蛋白疫苗(HBsAg)和乙肝DNA疫苗的免疫效果的影響。方法:利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建含IL-2基因的重組質(zhì)粒pcDNA3.1/IL-2并測(cè)序,堿裂解法大量提取并經(jīng)Sepharose 4FF柱層析純化重組質(zhì)粒pcDNA3.1/IL-2和pcDNA3.1/S。豚鼠分為六組:第1組為空白對(duì)照組;第2組為鋁佐劑+ HBsAg組;第3組為IL-2+ HBsAg組;第4組為重組質(zhì)粒pcDNA3.1/IL-2+ HBsAg組;第5組為重組質(zhì)粒pcDNA3.1/IL-2+pcDNA3.1/S組;第6組為重組質(zhì)粒pcDNA3.1/S組。于豚鼠的大腿內(nèi)側(cè)肌肉免疫,免疫質(zhì)粒200μg、HBsAg 10μg,各組于第一次免疫一月后分別加強(qiáng)免疫一次,心臟采血(第一月每周一次,加強(qiáng)免疫后兩周一次),分離血清,ELISA檢測(cè)豚鼠血清中抗HBsAg抗體的滴度和CTLL-2細(xì)胞株/MTT法測(cè)定IL-2活性。結(jié)果:序列測(cè)定和分析結(jié)果表明重組質(zhì)粒pcDNA3.1/IL-2構(gòu)建正確。血清中抗HBsAg抗體的滴度測(cè)定結(jié)果:12周后,第2組為2116mIU;第3組為1987mIU;第4組為2252mIU;第5組為67.19mIU;第6組為50.88mIU。IL-2活性的測(cè)定結(jié)果表明在重組質(zhì)粒pcDNA3.1/IL-2免疫一周后,IL-2表達(dá)水平達(dá)高峰,以后逐漸降低,但一月后IL-2水平仍高于空白對(duì)照組。對(duì)抗HBsAg抗體的滴度測(cè)定結(jié)果和IL-2活性的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明:各組之間比較p0.05,差異顯著。結(jié)論:含IL-2基因的重組質(zhì)粒pcDNA3.1/IL-2可以增強(qiáng)乙肝疫苗(乙肝重組蛋白疫苗和乙肝DNA疫苗)的免疫效果,可作為佐劑使用。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R512.62
【圖文】：

18圖 1. 真核表達(dá)質(zhì)粒 pcDNA3.1/IL-2 構(gòu)建示意圖Fig1. Construction of expression plasmid: pcDNA3.1/IL-2

26圖 2. IL-2 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物分析2. Analysis of IL-2 PCR products by amplificane 1：IL-2 gene PCR products Lane2：TaKaRa DL-20L-2 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ雙酶切的鑒定結(jié) 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ進(jìn)行雙酶切消化，于到預(yù)計(jì)的電泳帶，電泳照片見圖 3。L-2 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ雙酶切后 IL-2 片 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ進(jìn)行雙酶切消化，LM，紫外燈下觀察，得到一條 600bp 的電泳帶

18T/IL-2 EcoRⅠ/Hind Ⅲ酶切及 IL-2 片段. Analysis of PMD18T/IL-2 by restriction enz DNA/HindⅢ Marker Lane2：EcoRⅠ/Hind Ⅲ digestL-2000 Marker Lane4：DL-2000 Marker-2 products3.1 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ雙酶切后目的片 經(jīng) EcoRⅠ和 Hind Ⅲ雙酶切消化，LMP 回收外燈下觀察，得到一條大于 5kb 的電泳帶，電cDNA3.1/IL-2 的酶切鑒定結(jié)果 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ進(jìn)行雙酶切消化，于預(yù)計(jì)的電泳帶，電泳照片見圖 4。

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1 玉開利;;DNA免疫在抗鼠巨細(xì)胞病毒感染中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));1998年01期

2 趙斌華;荊永志;;自我識(shí)別所誘發(fā)的免疫應(yīng)答——自體淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)反應(yīng)[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1985年01期

3 ;文摘[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);2005年04期

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本文編號(hào)：2793480