【摘要】：背景及目的重型肝炎發(fā)病率高，危害大，發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，臨床缺乏特異有效的治療手段。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)EETs具有抗炎、促進(jìn)新生血管形成、調(diào)節(jié)離子通道、舒張血管以及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移等作用。EETs產(chǎn)生于花生四烯酸的第三條代謝途徑，由CYP450表氧化酶的亞家族CYP2C和CYP2J的同工酶催化花生四烯酸生成具有較高生物活性的四種形式EETs:5,6-EETs、8,9-EETs、11,12-EETs和14,15-EETs。正常情況下生成的EETs在很短的時間內(nèi)即被可溶性環(huán)氧化物水解酶(sEH)催化降解,產(chǎn)生DHET。通過抑制sEH（sEHI）可減慢EETs的降解速度，提高EETs的水平。目前關(guān)于EETs在病毒性暴發(fā)型肝炎中的研究在國內(nèi)外未見報道。CYP450表氧化酶可催化多種物質(zhì)的合成和代謝，亞家族以CYP2J和CYP2C家族為主，CYP2C9是CYP2C家族中的一員，主要分布在肝臟，約占肝微粒體CYP酶總量的20％，肝疾病對CYP2C9的影響比較明顯。近十年來sEH抑制劑（sEHI）在活體和臨床試驗中的應(yīng)用進(jìn)步顯著。研究表明注射sEHI可降低自發(fā)性高血壓大鼠及血管緊張素介導(dǎo)的高血壓大鼠的血壓，并能減緩其腎臟的損害。近年來sEHI作為心血管疾病的新的治療靶點已進(jìn)入臨床Ⅱ期試驗。本研究通過建立MHV-3病毒誘導(dǎo)的小鼠病毒性暴發(fā)型肝炎動物模型，研究花生四烯酸CYP450表氧化酶代謝物EETs在病毒性暴發(fā)型肝炎中的作用及其可能機(jī)制，同時加用sEH抑制劑AUDA減慢EETs降解，升高體內(nèi)內(nèi)源性EETs水平，觀察小鼠肝臟及血清內(nèi)EETs有無升高，對小鼠生存率有無影響，可否作為病毒性暴發(fā)型肝炎抗炎治療的新靶點。 方法建立Balb/c小鼠經(jīng)MHV-3病毒誘導(dǎo)的病毒性暴發(fā)型肝炎模型，用ELISA法檢測不同時間點肝臟、血清內(nèi)11,12-EETs、14,15-EETs含量變化；用免疫組化、western blot等方法檢測肝臟內(nèi)EETs是否由花生四烯酸經(jīng)CYP2C9產(chǎn)生；加用sEH抑制劑AUDA5mg/kg減慢EETs的降解速度,觀察小鼠肝臟及血清內(nèi)EETs有無增多，小鼠生存時間有無延長。 結(jié)果1、在暴發(fā)型肝炎病程中，11,12-EETs、4,15-EETs增多，在72h時P0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。提示在MHV-3誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)型肝炎的病理進(jìn)程中，肝臟EETs水平發(fā)生改變，可能參與了該病理過程。2、在MHV-3病毒誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)型肝炎肝組織切片中，免疫組化顯示CYP2C9無表達(dá)；在MHV-3病毒誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)型肝炎肝組織提取的蛋白中，western blot未見到陽性結(jié)果。證明肝組織內(nèi)EETs并非由花生四烯酸經(jīng)酶CYP2C9產(chǎn)生。3、加用sEH抑制劑AUDA后小鼠肝臟內(nèi)11,12-EETs增多，但P0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義，且小鼠的生存時間無明顯延長。 結(jié)論 1.EETs參與了MHV-3誘導(dǎo)的小鼠病毒性暴發(fā)型肝炎的病理過程，但不能阻斷暴發(fā)型肝炎的進(jìn)展，不能提高病毒性暴發(fā)型肝炎小鼠的生存時間。 2.sEH抑制劑AUDA未能使小鼠暴肝模型肝臟11,12-EETs明顯增多，小鼠生存率無改善；同時在該模型中，肝臟CYP2C9無表達(dá)，提示在該模型中，可能肝臟CYP2C9受損，導(dǎo)致上游EETs生成減少，未能發(fā)揮抗炎的保護(hù)作用。11,12-EETs、14,15-EETs增多，可能與其他類型的表氧化酶有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R575.1
【圖文】：

蘇木素復(fù)染15s±2s，控制鏡下核染色深度，流水沖洗7 ）梯度酒精脫水，80%乙醇3min 90%乙醇3min 無水乙醇）中性樹膠封片，封片后置烤箱內(nèi)烘干； ）切片干后于倒置顯微鏡下觀察。 結(jié) 果型肝炎病程中，11,12-EETs、14,15-EETs 增多，在 72h 時意義（圖 1、2）。提示在 MHV-3 誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)型肝炎的病 水平發(fā)生改變，可能參與了該病理過程。

暴發(fā)型肝炎病程中，14,15-EET 增多，在 72h 時 P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意3 病毒感染小鼠的暴發(fā)型肝炎肝組織提取的蛋白中，western b（圖 3）；同時，在 MHV-3 病毒感染小鼠的暴發(fā)型肝炎肝組織示 CYP2C9 無表達(dá)（圖 4、5、6、7）。證明肝組織內(nèi) EETs 并非 CYP2C9 產(chǎn)生。-3 病毒感染小鼠的暴發(fā)型肝炎肝組織提取的蛋白中，行 western blot 陽性結(jié)果；CYP2C9正常組 暴肝組

圖 2 在暴發(fā)型肝炎病程中，14,15-EET 增多，在 72h 時 P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義；2、在 MHV-3 病毒感染小鼠的暴發(fā)型肝炎肝組織提取的蛋白中，western blot 未見到陽性結(jié)果（圖 3）；同時，在 MHV-3 病毒感染小鼠的暴發(fā)型肝炎肝組織切片中，免疫組化顯示 CYP2C9 無表達(dá)（圖 4、5、6、7）。證明肝組織內(nèi) EETs 并非由花生四烯酸經(jīng)酶 CYP2C9 產(chǎn)生。圖 3 在 MHV-3 病毒感染小鼠的暴發(fā)型肝炎肝組織提取的蛋白中，行 western blot 亦未見到陽性結(jié)果；CYP2C9正常組 暴肝組

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2790144