【摘要】：研究背景和目的:潰瘍型結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)的發(fā)病率正在逐年增高,但病因尚不明確。潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌(ulcerative colitis related colorectal cancer,UCRCC)是潰瘍性結(jié)腸炎的主要并發(fā)癥之一。有研究顯示,結(jié)腸微炎癥的嚴(yán)重程度是UC發(fā)展為結(jié)腸腫瘤的一個獨(dú)立危險因素。多個研究證實(shí)miR-21、miR-223在UC和UCRCC患者的腸組織及血清中呈高表達(dá),但是這兩種miRNA在UC炎癥發(fā)生及癌變過程的作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。本研究旨在小鼠模型中檢測miR-21、miR-223及其對應(yīng)靶mRNA、炎癥因子的表達(dá)情況,并根據(jù)小鼠實(shí)驗結(jié)果進(jìn)一步在結(jié)腸癌細(xì)胞系中探索miRNA敲降及過表達(dá)細(xì)胞炎癥因子及相關(guān)靶mRNA的表達(dá)變化,以及對細(xì)胞周期及凋亡的影響。方法:利用DSS構(gòu)建小鼠急性結(jié)腸炎模型,利用AOM/DSS構(gòu)建小鼠炎癥性結(jié)腸癌模型。應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)在模型小鼠(結(jié)腸炎模型和炎癌模型)的腸組織中檢測miR-21、miR-223及對應(yīng)靶mRNA、炎癥因子的表達(dá)情況。構(gòu)建miR-21敲降及過表達(dá)結(jié)腸癌細(xì)胞系。應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測對應(yīng)靶mRNA及炎癥因子的表達(dá)情況,并應(yīng)用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)對敲降及過表達(dá)細(xì)胞的凋亡和周期進(jìn)行初步探究。結(jié)果:miR-21在結(jié)腸炎模型及炎癌模型小鼠較健康對照組小鼠腸組織中高表達(dá)(P0.01)。GAS5在結(jié)腸炎模型小鼠腸組織中低表達(dá)(P0.01),與miR-21在結(jié)腸炎模型小鼠腸組織中表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。IL-1β、IL-6、TNF-α在結(jié)腸炎模型及炎癌模型小鼠腸組織中高表達(dá)(P0.01,P0.01,P0.05),且與miR-21表達(dá)水平一致。miR-223在結(jié)腸炎模型及炎癌模型小鼠較健康對照組小鼠腸組織中的表達(dá)量均無顯著差異(P≥0.5)。miR-21 敲降細(xì)胞中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17A等炎癥因子表達(dá)降低(P0.001,P0.05,P0.05,P0.01,P=0.0001,P0.05);miR-21 敲降細(xì)胞G2/M期比例升高(31.6%→33.5%)。結(jié)論:1.miR-21可能通過下調(diào)GAS5的表達(dá)參與小鼠腸道炎癥的發(fā)生,miR-21可通過上調(diào)IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥因子的表達(dá)參與小鼠腸道炎癥發(fā)生和癌變的過程。2.miR-21 的敲降可能通過下調(diào)IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17A等炎癥因子的表達(dá)抑制炎癥發(fā)生;3.miR-21的敲降可能通過使細(xì)胞周期在G2/M期停滯抑制細(xì)胞增殖。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R735.34;R574.62
【圖文】：

注：ＮＣ組為健康對照組，ＤＳＳ組為急性結(jié)腸炎模型組逡逑１．１．２結(jié)腸大體表現(xiàn)逡逑處死小鼠取出全結(jié)腸后觀察大體表現(xiàn)（圖４），可見結(jié)腸炎組小鼠結(jié)腸出現(xiàn)充逡逑血、水腫、增厚。逡逑－：：－：…：７：邋Ｋ「逡逑Ｖ：邐１：邐，邐？邐；逡逑ｕ．邋：邐／邋ｕ邋Ｖ邋＊邐ｔ邋：逡逑Ｉｉｉ．邐Ｉ邐，１１－邐？邐＊邐ｉ邐ｔｔ－逡逑ｌｉｊｊｍ！邋ＪＢ邋；ｉ：邋ｉ．．ｉｌ邋｜？Ｕ逡逑Ｈ邐：邐：邐＾－３１－逡逑｜ｉ；邐（ｉ：邐｝邐１：邐ｆ：邐？：逡逑ｊ邋Ｉ邐ｍ＇邐＂ａ邐ｆ邐｜Ｋ－邐ｉ邋｜＇逡逑＿邐＂邐＊．￥邐－邋ｉＷ邐，＊ｒ邐＊邐署：？邋＊＊逡逑｛邋ｉ邋Ｉ１邐－邋Ｉ，逡逑圖４小鼠結(jié)腸大體表現(xiàn)逡逑２２逡逑

京協(xié)和醫(yī)學(xué)院２０１１級臨床８年制學(xué)生李映荷畢業(yè)課題間饋贈。逡逑１．１．１小鼠體重變化逡逑給予小鼠２．５％ＤＳＳ的飲用水后，每天測定小鼠體重，體重變化情況（圖３）如逡逑下�？梢钥闯�，大部分結(jié)腸炎組小鼠從第天開始出現(xiàn)體重下降，此后一直呈緩慢逡逑下降趨勢，而正常小鼠組的體重則穩(wěn)步上升，兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜逡逑０．０００１）。逡逑２６－ｉ逡逑＋邋ＮＣ逡逑２４－邐－ｍ－邋ＤＳＳ逡逑１８－邋１逡逑１６邋｜邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐Ｉ邐ｉ邐ｌ逡逑０１２３４５６７８逡逑Ｔｉｍｅ（ｄａｙｓ）逡逑圖３小鼠體重變化圖逡逑注：ＮＣ組為健康對照組，ＤＳＳ組為急性結(jié)腸炎模型組逡逑１．１．２結(jié)腸大體表現(xiàn)逡逑處死小鼠取出全結(jié)腸后觀察大體表現(xiàn)（圖４），可見結(jié)腸炎組小鼠結(jié)腸出現(xiàn)充逡逑血、水腫、增厚。逡逑－：：－：…：７：邋Ｋ「逡逑Ｖ：邐１：邐，邐？邐；逡逑ｕ．邋：邐／邋ｕ邋Ｖ邋＊邐ｔ邋：逡逑Ｉｉｉ．邐Ｉ邐，１１－邐？邐＊邐ｉ邐ｔｔ－逡逑ｌｉｊｊｍ！邋ＪＢ邋；ｉ：邋ｉ．．ｉｌ邋｜？Ｕ逡逑Ｈ邐：邐：邐＾－３１－逡逑｜ｉ；邐（ｉ：邐｝邐１：邐ｆ：邐？：逡逑ｊ邋Ｉ邐ｍ＇邐＂ａ邐ｆ邐｜Ｋ－邐ｉ邋｜＇逡逑＿邐＂邐＊．￥邐－邋ｉＷ邐，＊ｒ邐＊邐署：？邋＊＊逡逑｛邋ｉ邋Ｉ１邐－邋Ｉ

ＲＮＡ來源于北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院２０１６級博士生張慧敏畢業(yè)課題間饋贈。逡逑炎癌小鼠模型通過大體成瘤情況和病理組織學(xué)檢驗組織學(xué)檢驗建立成功（病逡逑理情況見圖５）�？梢娧装┙M小鼠結(jié)腸腺體結(jié)構(gòu)紊亂，可見篩狀結(jié)構(gòu)；還可見細(xì)胞逡逑大小及形態(tài)差異顯著的腫瘤細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞核大、深染、質(zhì)核比降低。逡逑畫逡逑漏逡逑圖５炎癌組小鼠結(jié)腸組織病理逡逑注：炎癌組小鼠結(jié)腸組織ＨＥ染色（左圖１０0ｘ，右圖４０0ｘ）逡逑１．３小鼠模型腸道中ｍｉＲＮＡ的表達(dá)情況逡逑１．３．１邋ｍｉＲ－２１在小鼠模型腸道中的表達(dá)逡逑結(jié)腸炎組小鼠與健康對照組小鼠腸組織中ｎｎＲ－２１的表達(dá)情況如下（圖６）：結(jié)逡逑腸炎組較健康對照組高表達(dá)（Ｐ＝０．００７０），且有統(tǒng)計學(xué)意義。逡逑炎癌組小鼠與健康對照組小鼠腸組織中ｍｉＲ－２１的表達(dá)情況如下（圖７）：炎癌逡逑組較健康對照組高表達(dá)（Ｐ＝0．00７９），且有統(tǒng)計學(xué)意義。逡逑２３逡逑

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