本文關(guān)鍵詞：NOD樣受體在實(shí)驗(yàn)性重癥急性胰腺炎大鼠腸道損傷中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是一種持續(xù)高死亡率的嚴(yán)重的全身疾病。急性胰腺炎可引起腸粘膜結(jié)構(gòu)和功能損傷,導(dǎo)致腸道屏障功能障礙。腸道粘膜屏障受損會(huì)導(dǎo)致腸道通透性增加,腸道細(xì)菌易位(bacterial translocation,BT)和內(nèi)毒血癥,以及釋放炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子,并引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)。與此同時(shí),腸粘膜屏障損傷在急性胰腺炎過程中發(fā)揮重要作用。急性胰腺炎引起腸道屏障損傷機(jī)制復(fù)雜,目前尚未完全清楚。先天免疫系統(tǒng)是抵御微生物的第一道防線,最近的研究發(fā)現(xiàn)一種新的蛋白質(zhì)家族-核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域(Nucleotide binding oligomerization domain,NOD)樣受體(NLRs),可以識(shí)別、抵御微生物病原體,兼有調(diào)控共生菌群和腸道穩(wěn)態(tài)的作用。NOD樣受體是高度保守的胞內(nèi)模式識(shí)別受體。這些蛋白的結(jié)構(gòu)包括:(1)中央的核苷酸結(jié)合寡聚化區(qū)域(NACHT/NOD),負(fù)責(zé)核苷酸的結(jié)合和自身寡聚化;(2)N末端效應(yīng)結(jié)合區(qū)域,即N-末端蛋白-蛋白相互作用的結(jié)構(gòu)域,如半胱氨酸蛋白酶激活和募集結(jié)構(gòu)域(activation and recruitment domain,CARD)一個(gè)熱蛋白結(jié)構(gòu)域(pyrin domain,PYD),負(fù)責(zé)下游接頭蛋白和效應(yīng)分子結(jié)合;(3)C末端富含亮氨酸的重復(fù)序列(leucine-rich repeat,LRR),負(fù)責(zé)識(shí)別微生物或內(nèi)源性信號(hào)。包含CARD的NOD蛋白NOD1和NOD2通過與包含CARD的激酶RIP2相互作用進(jìn)一步激活NF-κB、促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)、干擾素調(diào)節(jié)因子(interferon(IFN)regulatory factors,IRFs),可引起下游炎性細(xì)胞因子前體分泌,例如:IL-1,IL-6,IL-18,TNF-α和IFN。而包含PYD的NLRP蛋白與適配器蛋白ASC(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD)結(jié)合引起caspase-1的激活,加工炎性細(xì)胞因子。NOD樣受體可能參與了急性胰腺炎及自身免疫性胰腺炎無菌炎癥反應(yīng),但其在急性胰腺炎導(dǎo)致的腸道損傷中的作用,目前未見研究。本實(shí)驗(yàn)通過建立重癥急性胰腺炎大鼠模型,觀察SAP時(shí)出現(xiàn)的胰腺、腸道組織學(xué)方面的變化,及NOD蛋白和m RNA在腸道的表達(dá)情況;同時(shí)探索caspase-1抑制劑對(duì)SAP時(shí)腸道NOD樣受體以及腸道損傷的影響。從分子水平闡明SAP腸損傷的發(fā)病機(jī)制,為SAP腸損傷的臨床治療提供一個(gè)新的思路。方法:1將60只SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)(SO)組、SAP模型+腹腔注射生理鹽水(SAP-S)組和SAP模型+caspase-1抑制劑(SAP-ICE-I)組,每組再分為6 h、12 h 2個(gè)亞組,每組各10只。2采用胰管內(nèi)逆行注射5%牛磺膽酸鈉的方法誘發(fā)動(dòng)物模型。SAP-S組于造模后2h腹腔注射生理鹽水l ml;SAP-ICE-I組于造模后2 h腹腔注射ICE抑制劑0.25 mg(溶于l ml PBS)。SO組模擬胰膽管穿刺操作,但不注射藥物。3分別于造模后6 h、12 h留取血、胰腺、腸道組織,檢測(cè)血清內(nèi)IL-1β、IL-18水平,留取標(biāo)本通過HE染色觀察胰腺、腸道的病理變化,采用RT-PCR、Western-blot的方法觀察比較三組腸道NOD1、NOD2、NLRP3蛋白及m RNA的表達(dá)差異,Western-blot檢測(cè)caspase-1蛋白變化。4所有數(shù)據(jù)采用(x±S)表示,應(yīng)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理。設(shè)α=0.05,P0.05為差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 HE染色觀察,SAP-S組胰腺和腸道組織病理損傷程度隨時(shí)間延長(zhǎng)逐步加重,與SAP-S組相比,SAP-ICE-I組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)胰腺及腸道病變程度有所減輕。2血清IL-18:SAP-S組(6 h 48.8±12.2 pg/ml;12 h 63.98±14.27 pg/ml)與SO組(6 h 21.74±9.50 pg/ml;12 h 22.4±9.16 pg/ml)各時(shí)間點(diǎn)比較,大鼠血清IL-18含量顯著升高(P0.01);SAP-ICE-I組(6 h 32.90±6.69 pg/ml;12 h 33.29±10.99 pg/ml)與SO組相比,6 h組IL-18含量升高(P0.05),12 h組IL-18含量無明顯差異;SAP-ICE-I組與SAP-S組相比顯著下降(P0.01);各組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間相比,SAP-S組12 h組高于6 h組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3血清IL-1β:SAP-S組(6 h 107.85±13.70 pg/ml;12 h 126.77±15.23 pg/ml)與SO組(6 h 61.26±13.61 pg/ml;70.83±15.71 pg/ml)各時(shí)間點(diǎn)比較,大鼠血清IL-1β含量顯著升高(P0.01);SAP-ICE-I組與SO組相比,含量升高(P0.05);SAP-ICE-I組(6 h 78.51±10.67 pg/ml;12 h 87.58±16.61 pg/ml)與SAP-S組相比顯著下降(P0.01);各組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間相比,SAP-S血清IL-1β含量12 h組高于6 h組(P0.05)。4 RT-PCR檢測(cè)NOD1 m RNA表達(dá)情況:SAP-S組和SAP-ICE-I組NOD1 m RNA的量較SO組均上升(分別P0.01;P0.05);SAP-ICE-I組與SAP-S組相比m RNA的量下降(P0.05);SO組、SAP-ICE-I組NOD1 m RNA量6 h、12 h時(shí)間點(diǎn)相比無顯著差異(P0.05),SAP-S組6 h、12 h時(shí)間點(diǎn)相比,12 h m RNA的量高于6 h,且有顯著差異(P0.01)。5 RT-PCR檢測(cè)NOD2 m RNA表達(dá)情況:SAP-S組NOD2 m RNA的量較SO組上升,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)有顯著差異(P0.05);SAP-ICE-I組與SO組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);SAP-ICE-I組與SAP-S組比較NOD2 m RNA的量下降,有顯著差異(P0.05);SO組、SAP-ICE-I組NOD1 m RNA量6 h、12 h時(shí)間點(diǎn)相比無顯著差異(P0.05),SAP-S組6 h、12 h時(shí)間點(diǎn)相比,12 h m RNA的量高于6 h,且有顯著差異(P0.01)。6 RT-PCR檢測(cè)NLRP3 m RNA表達(dá)情況:SAP-S組NLRP3 m RNA的量較SO組明顯上升,有顯著差異(P0.01);SAP-ICE-I組與SO組比較無明顯差異(P0.05);SAP-ICE-I組NLRP3 m RNA的量較SAP-S組下降,有顯著差異(P0.01);SO組、SAP-ICE-I組NOD1 m RNA量6 h、12h時(shí)間點(diǎn)相比無顯著差異(P0.05),SAP-S組6 h、12 h時(shí)間點(diǎn)相比,6 h m RNA的量高于12 h,且有顯著差異(P0.01)。7 Western blot檢測(cè)NOD1蛋白表達(dá)情況:SAP-S組與SO組NOD1蛋白量各時(shí)間點(diǎn)比較均顯著升高(P0.01);SAP-ICE-I組與SO組NOD1蛋白量各時(shí)間點(diǎn)相比升高(P0.01);差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SAP-ICE-I組與SAP-S組相比顯著下降(P0.01);三組6 h、12 h組相比無顯著差異(P0.05)。8 Western blot檢測(cè)NOD2蛋白表達(dá)情況:SAP-S組與SO組NOD2蛋白量各時(shí)間點(diǎn)比較均顯著升高(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SAP-ICE-I組與SO組NOD1蛋白量各時(shí)間點(diǎn)相比升高(P0.01);SAP-ICE-I組與SAP-S組相比顯著下降(P0.01);三組個(gè)亞組相比無顯著差異(P0.05)。9 Western blot檢測(cè)NLRP3蛋白表達(dá)情況:SAP-S組與SO組NLRP3蛋白量各時(shí)間點(diǎn)比較均顯著升高(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SAP-ICE-I組與SO組6 h時(shí)間點(diǎn)相比NLRP3蛋白量無顯著差異(P0.05);SAP-ICE-I組與SO組12 h組相比NLRP3蛋白量升高(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SAP-ICE-I組與SAP-S組相比顯著下降(P0.01);SAP-S組6 h、12 h組相比,6 h蛋白的量高于12 h,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);SAP-ICE-I組6 h、12 h組相比,12 h蛋白的量高于6 h,(P0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。10 Western blot檢測(cè)caspase-1蛋白表達(dá)情況:SAP-S組與SO組caspase-1蛋白量各時(shí)間點(diǎn)比較均顯著升高(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SAP-ICE-I組與SO組caspase-1蛋白量相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);SAP-ICE-I組與SAP-S組相比顯著下降(P0.01);SAP-S組6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比,6 h蛋白的量高于12 h,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);SAP-ICE-I組6 h、12 h組相比,12 h蛋白的量高于6 h,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1 SAP時(shí)腸道中NOD1、NOD2、NLPR3蛋白及m RNA表達(dá)升高,提示三者均參與了重癥急性胰腺炎腸道損傷;2 caspase-1抑制劑通過抑制caspase-1的活性可以減少血清IL-1β、IL-18水平,對(duì)重癥急性胰腺炎腸道損傷起到保護(hù)作用;3使用caspase-1抑制劑后腸道NOD受體的表達(dá)均下降,提示NOD樣受體與caspase-1之間存在調(diào)節(jié)關(guān)系。NOD樣受體參與SAP時(shí)腸道損傷的機(jī)制可能為其與caspase-1相互作用,誘導(dǎo)IL-1β、IL-18分泌。
【關(guān)鍵詞】：NOD樣受體 重癥急性胰腺炎 腸粘膜屏障 半胱氨酸蛋白酶-1 白介素-1β 白介素-18
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R576
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-25
• 結(jié)果25-29
• 附圖29-35
• 附表35-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 綜述NOD樣受體在胰腺炎及腸道損傷中的作用45-59
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 致謝59-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Roland Andersson;;Acute lung injury and ARDS in acute pancreatitis: Mechanisms and potential intervention[J];World Journal of Gastroenterology;2010年17期

  本文關(guān)鍵詞：NOD樣受體在實(shí)驗(yàn)性重癥急性胰腺炎大鼠腸道損傷中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：278765