【摘要】： 目的:探討重組人尿胰蛋白酶抑制劑(rhUTI)對實驗性胰腺炎動物的保護作用及其可能的作用機制,為其申報國家一類新藥與臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法: 1.采用2%�；悄懰徕c(0.1mL/100g,0.2mL/min)胰膽管逆行注射法制備急性胰腺炎大鼠模型。將實驗大鼠隨機分成6組:即對照組、模型(AP)組、rhUTI(1.75、3.5、7萬U/kg)3個不同劑量組及陽性藥烏司他丁(UTI,3.5萬U/kg)組,每組10只。實驗結(jié)束時,分別檢測大鼠血清淀粉酶、尿液淀粉酶、血常規(guī)、腎功能、電解質(zhì)以及胰腺病理組織學(xué)損傷的變化。 2.采用2.5%�；悄懰徕c(1ml/kg)胰膽管逆行注射法制備急性胰腺炎犬模型。將實驗犬隨機分成6組:即對照組、模型(AP)組、rhUTI(0.75、1.5、3萬U/kg)3個不同劑量組及陽性藥烏司他丁(UTI,1.5萬U/kg)組,每組6只。實驗結(jié)束時,分別檢測犬血清淀粉酶、尿液淀粉酶、血常規(guī)、腎功能、電解質(zhì)以及胰腺病理組織學(xué)損傷的變化。 3.采用TUNEL法檢測急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡細胞凋亡情況;采用免疫組化染色法分別觀察急性胰腺炎大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白表達的變化;采用RT-PCR法分別檢測急性胰腺炎大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和Caspase-3mRNA表達的變化。 結(jié)果: 1.經(jīng)胰膽管逆行注射2%牛磺膽酸鈉成功制備急性胰腺炎大鼠模型,與對照組比較,AP組大鼠的血清淀粉酶、尿液淀粉酶,紅細胞計數(shù),尿素氮、肌酐升高,血清Ca2+降低,胰腺組織充血水腫、灶性壞死并伴有大量炎性細胞浸潤。與AP組比較,UTI(3.5萬U/kg)及rhUTI(3.5、7萬U/kg)對升高的血清淀粉酶、尿液淀粉酶有降低作用,UTI和rhUTI各劑量組胰腺組織充血水腫減輕、壞死灶減小,炎性細胞浸潤減輕,但UTI和rhUTI各劑量對急性胰腺炎大鼠血常規(guī)、腎功能和電解質(zhì)變化均未見明顯影響。 2.經(jīng)胰膽管逆行注射2.5%�；悄懰徕c成功制備急性胰腺炎犬模型,與對照組比較,AP組犬血清淀粉酶于造模后24h、28h和32h升高,且32h達到高峰,尿液淀粉酶于造模后32h升高,胰腺組織充血水腫、灶性壞死并伴有大量炎性細胞浸潤,血清K+和Ca2+分別于造模后24h、8h降低,血常規(guī)、腎功能均未見明顯變化。與AP組比較,UTI和rhUTI各劑量于造模后28h、32h對升高的血清淀粉酶有降低作用,rhUTI(1.5、3萬U/kg)和UTI(1.5萬U/kg)對升高的尿液淀粉酶有降低作用,胰腺病理組織學(xué)檢測結(jié)果表明:UTI和rhUTI各劑量組胰腺組織充血水腫減輕、壞死灶減小,炎性細胞浸潤減輕。 3. TUNEL法檢測結(jié)果顯示,正常組大鼠胰腺腺泡細胞凋亡極少,急性胰腺炎時腺泡細胞凋亡指數(shù)升高,病變程度較重的模型組凋亡細胞少見,與AP組比較,UTI及rhUTI各劑量組凋亡細胞明顯增多。免疫組化及RT-PCR結(jié)果顯示,在正常組大鼠胰腺組織中即有Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白及mRNA的弱陽性表達,與對照組比較, AP組大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和Caspase-3的蛋白及mRNA表達水平均降低;與AP組比較,UTI和rhUTI各劑量組大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和Caspase-3的蛋白及mRNA表達水平明顯升高,且Caspase - 3表達水平在各個組間的變化趨勢與Fas/Fas-L系統(tǒng)的變化趨勢相一致。 結(jié)論: rhUTI對急性胰腺炎大鼠和犬有一定的保護作用,可抑制淀粉酶活性,改善胰腺組織的病理性損傷,其作用機制可能與促進胰腺腺泡細胞凋亡,上調(diào)胰腺組織中Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白及mRNA表達有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R576
【圖文】：

圖 1 rhUTI 對急性胰腺炎大鼠胰腺組織病理形態(tài)學(xué)變化的影響（×200，n=8）Fig 1 Effect of rhUTI on pathological changes of the pancrea in acute pancreatitis rats（×200，n=8）A：control；B：model；C：UTI (35,000U/kg)；D：rhUTI(17,500U/kg)；E：rhUTI(35,000U/kg)；F：rhUTI(70,000 U/kg)4.2 rhUTI 對急性胰腺炎犬的保護作用4.2.1 rhUTI 對急性胰腺炎犬血清淀粉酶、尿液淀粉酶的影響采用化學(xué)比色法檢測犬血清淀粉酶和尿液淀粉酶的變化，結(jié)果顯示：與對照組比較，AP 組犬造模后 24h、28h、32h 血清淀粉酶明顯升高，且于 32h 達到高峰；與 AP 組比較，rhUTI 和 UTI 于造模后 28、32h 對升高的血清淀粉酶有降低作用。與對照組比較，AP 組犬造模后 32h 尿液淀粉酶顯著升高，用藥組中，rhUTI（1.5、

4.2.5.1 肉眼觀察犬胰腺組織變化行上腹部正中切口進腹，對照組犬胰腺正常，呈粉紅色扁平長帶狀；模型組犬可見大網(wǎng)膜、腹膜及腸壁多處皂化、黏連、脂肪壞死，并伴有不同程度的血性腹水，腸壁變薄、水腫，整個胰腺大部呈出血性或凝固性壞死；各用藥組胰腺輕度水腫、充血，灶性壞死，伴有不同程度腹水或血性腹水。4.2.5.2 鏡檢犬胰腺組織病理學(xué)改變?nèi)认俳M織病理學(xué)變化如圖2所示，對照組胰腺結(jié)構(gòu)基本正常，僅見葉間隙稍增寬；AP組胰腺組織間質(zhì)明顯水腫、小葉間隙增寬、腺體片狀出血、壞死，大量炎癥細胞浸潤，損傷程度明顯比對照組嚴重；UTI及rhUTI組腺體結(jié)構(gòu)清晰，胰腺組織輕度水腫，腺泡細胞灶性壞死，可見炎癥細胞浸潤及紅細胞溢出，但較模型組有所減輕，表明rhUTI對急性胰腺炎動物胰腺組織病理性損傷具有改善作用。

4.3 rhUTI對急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡細胞凋亡的影響Tunel法檢測顯示腺泡細胞凋亡表現(xiàn)為細胞核染成棕褐色，胞核固縮、空泡化，染色質(zhì)濃縮、邊聚，凋亡小體形成。結(jié)果可見正常組胰腺腺泡細胞凋亡極少，急性胰腺炎時腺泡細胞凋亡指數(shù)升高，病變程度較重的模型組凋亡細胞少見，與AP組比較，UTI及rhUTI各劑量組凋亡細胞明顯增多。表明rhUTI可促進急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡細胞凋亡。見圖3，表17。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張偉;;急性胰腺炎發(fā)病機制、診斷及治療新進展[J];包頭醫(yī)學(xué);2007年04期

2 路箏,徐桂芳,李兆申,劉巖,潘雪;犬重癥急性胰腺炎模型的制備[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2005年08期

3 夏時海,趙曉晏;犬急性胰腺炎動物模型的建立[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2001年08期

4 劉學(xué)民,劉青光,潘承恩,徐高峰,張濤,黃建勇,張梅;血管內(nèi)皮凋亡對大鼠重癥急性胰腺炎肺損傷的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2003年18期

5 李震東;馬清涌;徐軍;李明;;Fas和FasL在急性胰腺炎中的共表達及其與凋亡的關(guān)系[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年01期

6 尚東,關(guān)鳳林,楊佩滿,辛毅,陳海龍,劉忠;胰腺腺泡細胞凋亡在大鼠急性胰腺炎病程中的作用及凋亡調(diào)控基因的表達[J];肝膽胰外科雜志;2001年03期

7 常華,嚴際慎,王平瑜,閆俊嶺;大鼠急性胰腺炎胰腺細胞凋亡與外周血漿TNF-α的關(guān)系[J];肝膽胰外科雜志;2002年04期

8 ;Pathological changes at early stage of multiple organ injury in a rat model of severe acute pancreatitis[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年01期

9 ;Protective effects of MCP-1 inhibitor on a rat model of severe acute pancreatitis[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年02期

10 ;在實驗性重癥急性胰腺炎中腎小管的凋亡細胞死亡[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;1999年05期

本文編號：2785756