【摘要】： 肝纖維化(hepatic fibrosis)是各種致病因子引起慢性肝病,進(jìn)而發(fā)展為肝硬化的一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程,其主要病理改變是細(xì)胞外間質(zhì)(extracellular matrix, ECM)的過(guò)度合成與異常沉積。肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells, HSCs)是參與該過(guò)程的最重要細(xì)胞,它的激活導(dǎo)致自身增殖和膠原合成增加,可明顯促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展,而肝纖維化恢復(fù)期HSCs凋亡明顯增多。所以,HSCs在肝纖維化的形成和逆轉(zhuǎn)過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,被認(rèn)為是各種肝臟損傷引起肝纖維化的中心環(huán)節(jié)。 研究表明,HSCs可以表達(dá)神經(jīng)標(biāo)志物,并接受交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)纖維的神經(jīng)支配。HSCs可以合成和釋放去甲腎上腺素(norepinephrine, NE)、多巴胺(dopamine, DA)、5-羥色胺(hydroxytryptamine, 5-HT)等神經(jīng)遞質(zhì),HSCs還表達(dá)α1B、α1D、β1、β2等腎上腺素受體。提示HSCs可能來(lái)源于神經(jīng)嵴,并作為肝臟的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞接受交感神經(jīng)系統(tǒng)傳出信號(hào)的神經(jīng)支配,發(fā)生表型改變,調(diào)節(jié)肝臟功能。 交感神經(jīng)系統(tǒng)(sympathetic nervous system, SNS)分布廣泛,幾乎參與了體內(nèi)所有系統(tǒng)的功能調(diào)節(jié)。已有研究結(jié)果證實(shí),肝硬化患者的交感神經(jīng)系統(tǒng)活性升高、循環(huán)兒茶酚胺含量增加。體外實(shí)驗(yàn)研究也證實(shí),交感神經(jīng)遞質(zhì)NE可以明顯促進(jìn)HSCs的增殖。由此可知,交感神經(jīng)系統(tǒng)可以通過(guò)對(duì)HSCs生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)參與肝纖維化的進(jìn)展。但是,關(guān)于肝纖維化形成過(guò)程中,交感神經(jīng)遞質(zhì)與特定腎上腺素受體亞型結(jié)合后對(duì)HSCs生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制,目前國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)報(bào)告。因此,我們應(yīng)用膽總管結(jié)扎法建立膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型,檢測(cè)腎上腺素受體各亞型的表達(dá)與肝纖維化發(fā)展的關(guān)系;進(jìn)一步在細(xì)胞水平分別給予去甲腎上腺素α受體及β受體的阻滯劑,檢測(cè)其對(duì)HSCs增殖、凋亡以及膠原代謝的作用,并探討交感神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)控HSCs生物學(xué)行為的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,旨在闡明交感神經(jīng)系統(tǒng)在肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制,從而尋求有效的預(yù)防和治療肝纖維化的新思路、新策略。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括以下四部分: 第一部分肝纖維化過(guò)程中去甲腎上腺素各受體亞型表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化 目的:研究肝纖維化過(guò)程中去甲腎上腺素各受體亞型表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。 方法:膽總管結(jié)扎法建立膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型,HE、Masson染色觀察肝臟病理形態(tài)學(xué)變化,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HSCs活化指標(biāo)α-SMA的表達(dá),Western blot和Real-time Q-PCR檢測(cè)α-AR、β1-AR、β2-AR蛋白和mRNA的表達(dá)。 結(jié)果:①術(shù)后大鼠一般情況觀察:大鼠膽總管結(jié)扎后1 h～2 h恢復(fù)活動(dòng),48 h左右尿液變黃,3～4天后皮膚毛發(fā)開(kāi)始轉(zhuǎn)黃,精神逐漸變差,進(jìn)食量少于對(duì)照組,體重增加不明顯或稍有下降。5～6天一般狀況漸差,嗜睡,反應(yīng)遲緩,活動(dòng)減少,黃疸明顯,鼠糞呈灰白色。20天后進(jìn)食量明顯減少,體重與對(duì)照組相比明顯降低,并且部分大鼠逐漸出現(xiàn)腹部隆起。②肝組織病理組織學(xué)變化:模型大鼠肝臟肉眼觀呈褐綠色或棕色,表面略呈細(xì)顆粒狀,質(zhì)地變硬。HE及Masson三色染色顯示,假手術(shù)對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝板排列整齊,肝細(xì)胞無(wú)腫脹,無(wú)膽管增生,無(wú)淤膽及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),核仁清晰,少量結(jié)締組織局限于門管區(qū)。造模1 wk后,模型組肝細(xì)胞出現(xiàn)散在變性、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn),部分區(qū)域出現(xiàn)小片狀壞死,門管區(qū)小膽管樣上皮細(xì)胞增生。造模2 wk后,模型組肝板正常排列消失,肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,門管區(qū)小膽管廣泛增生,并向小葉內(nèi)延伸、肝小葉呈花環(huán)狀;新生小膽管周圍纖維組織增生,門管區(qū)面積擴(kuò)大,肝小葉內(nèi)亦有纖維組織增生。造模3 wk～4 wk后,模型組肝臟廣泛纖維結(jié)締組織增生,增生的纖維間隔互相連接、包繞、分割,改建原來(lái)的肝小葉甚至形成假小葉。Masson三色染色膠原面積密度測(cè)定結(jié)果顯示:模型組1 wk、2 wk、3 wk、4 wk膠原面積密度(10.11%±1.14%,21.14%±1.22%,28.87%±2.05%,37.44%±3.17%)均顯著高于假手術(shù)對(duì)照組(3.22%±0.77%),P0.01。③α-SMA免疫組織化學(xué)染色顯示:正常大鼠肝組織中僅在血管壁平滑肌細(xì)胞有弱陽(yáng)性表達(dá);隨著肝纖維化的發(fā)展,大鼠肝組織中α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多,主要分布于匯管區(qū)、纖維間隔、肝竇周圍及增生的膽管周圍細(xì)胞,造模1 wk～4 wk大鼠肝組織α-SMA的陽(yáng)性面積(10.58%±1.75%,24.14%±2.02%,29.74%±2.59%,34.28%±2.01%)均顯著高于假手術(shù)組(4.12%±1.51%),P0.01。即肝纖維化程度越重α-SMA染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量亦越多。④Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,分別在大約57 kD、50 kD、47 kD位置出現(xiàn)α-AR、β1-AR、β2-AR特異性條帶,在43 kD位置可見(jiàn)β-actin條帶。假手術(shù)組有少量腎上腺素受體蛋白表達(dá),隨著肝纖維化進(jìn)展其表達(dá)逐漸增加,造模1 wk～4 wk大鼠肝組織α-AR、β1-AR、β2-AR蛋白表達(dá)量明顯升高(1.54±0.08, 1.87±0.15, 2.72±0.09, 2.84±0.18 vs 0.85±0.12, P0.05;1.57±0.18, 1.92±0.11, 2.51±0.17, 2.89±0.19 vs 0.98±0.15, P0.05;1.84±0.20, 1.97±0.09, 2.85±0.14, 3.87±0.18 vs 1.24±0.18, P0.05)。⑤Real-time Q-PCR共擴(kuò)增檢測(cè)α-AR、β1-AR、β2-AR和內(nèi)參照GAPDH基因表達(dá),根據(jù):△c(t)實(shí)驗(yàn)組=c(t)目的基因-c(t)GAPDH,△c(t)對(duì)照組=c(t)目的基因-c(t)GAPDH,△△c(t)=△c(t)實(shí)驗(yàn)組-△c(t)對(duì)照組,目的基因的相對(duì)表達(dá)量folds=2-△△c(t)計(jì)算α-AR、β1-AR、β2-AR mRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果證實(shí),隨著肝纖維化的發(fā)展,α-AR、β1-AR、β2-AR mRNA表達(dá)逐漸上調(diào),造模4 wk表達(dá)最多(1.54±0.08, 2.98±0.09, 3.23±0.11, 3.94±0.13 vs 1.00±0.07, P0.01; 1.47±0.10, 2.13±0.09, 2.54±0.12, 2.81±0.10 vs 1.00±0.10, P0.01; 1.24±0.07, 2.78±0.10, 3.54±0.14, 4.24±0.15 vs 1.00±0.08, P0.01)。⑥α-SMA與α-AR、β1-AR、β2-AR的多元相關(guān)分析顯示,α-SMA與α-AR、β1-AR及β2-AR呈正相關(guān),r值分別為0.564、0.753和0.606。結(jié)論:膽總管結(jié)扎法成功建立膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型,肝纖維化形成過(guò)程中HSCs大量活化、增殖,α-SMA表達(dá)增加。隨著肝纖維化進(jìn)展,α-AR、β1-AR、β2-AR蛋白及mRNA含量明顯增加,與α-SMA呈明顯的正相關(guān)。 第二部分交感神經(jīng)遞質(zhì)NE對(duì)HSCs生物學(xué)行為的影響 目的:探討交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素對(duì)體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及膠原代謝的影響。 方法:體外培養(yǎng)HSCs,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)NE對(duì)HSCs增殖的影響;原位雜交凋亡檢測(cè)(TUNEL)法觀察NE對(duì)HSCs凋亡的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞凋亡調(diào)控基因bcl-2和bax的蛋白表達(dá)情況;倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;用Real-time Q-PCR檢測(cè)Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá);并用Western blot和Real-time Q-PCR檢測(cè)MMP-13和TIMP-1蛋白和mRNA的表達(dá)。 結(jié)果:①M(fèi)TT法顯示,不同濃度NE作用于HSCs,實(shí)驗(yàn)組A值均高于對(duì)照組;NE濃度為10μmol·L-1時(shí)促增殖作用達(dá)峰值(0.262±0.085 vs 0.084±0.053, P0.05);不同濃度NE作用于HSCs,隨作用時(shí)間延長(zhǎng)NE的促增殖作用增強(qiáng);②10μmol·L-1濃度NE作用于HSCs 24 h,TUNEL和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HSCs凋亡率均顯著低于對(duì)照組(6.60%±3.05% vs 12.60%±4.76%, P0.01;2.29%±0.22% vs 3.06%±0.57%, P0.05);③并伴有凋亡調(diào)控基因的改變:NE作用HSCs 24 h后,bax表達(dá)下降,對(duì)照組和NE組分別為9.60%±1.76%和6.60%±2.75%,P0.05;而bcl-2表達(dá)增加,對(duì)照組和NE組分別為7.06%±0.54%和14.29%±0.41%, P0.05;④NE對(duì)細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有明顯影響:肝星狀細(xì)胞系接種于培養(yǎng)瓶中,貼壁生長(zhǎng),大多數(shù)細(xì)胞呈多角形,約24 h后,細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,即貼壁生長(zhǎng)成致密的單細(xì)胞層。NE作用后72 h,細(xì)胞增殖顯著,顯微鏡下未見(jiàn)明顯細(xì)胞形態(tài)改變;⑤Real-time Q-PCR檢測(cè)NE對(duì)HSCs表達(dá)Ⅰ型膠原的影響:加入不同濃度NE (1、10、100μmol·L-1),Ⅰ型膠原mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(1.47±0.09,1.91±0.11,2.46±0.15,P0.05);⑥Western blot檢測(cè)NE對(duì)HSCs表達(dá)MMP-13和TIMP-1的影響:結(jié)果顯示,在大約60 kD位置出現(xiàn)MMP-13特異性條帶,在大約28 kD位置出現(xiàn)TIMP-1特異性條帶,在43 kD位置可見(jiàn)β-actin條帶。加入不同濃度NE(1、10、100μmol·L-1),MMP-13蛋白相對(duì)表達(dá)量(0.75±0.24,0.57±0.11,0.37±0.08)均顯著低于對(duì)照組(0.98±0.21),P0.05;TIMP-1蛋白相對(duì)表達(dá)量(0.57±0.09,1.01±0.14,1.15±0.17)均顯著高于對(duì)照組(0.55±0.05),P0.01。MMP-13/TIMP-1比值明顯降低(1.32±0.05,0.56±0.10,0.32±0.09 vs 1.78±0.10, P0.01);⑦Real-time Q-PCR檢測(cè)NE對(duì)HSCs表達(dá)MMP-13和TIMP-1的影響:以對(duì)照組MMP-13、TIMP-1 mRNA表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn),各實(shí)驗(yàn)組MMP-13、TIMP-1的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組的變化用以下公式計(jì)算:△c(t)實(shí)驗(yàn)組=c(t)目的基因-c(t)GAPDH,△c(t)對(duì)照組=c(t)目的基因-c(t)GAPDH,△△c(t) =△c(t)實(shí)驗(yàn)組-△c(t)對(duì)照組,目的基因的相對(duì)表達(dá)量folds =2-△△c(t)計(jì)算MMP-13、TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果證實(shí),加入不同濃度NE(1、10、100μmol·L-1),MMP-13 mRNA相對(duì)表達(dá)量(0.81±0.13,0.59±0.07,0.48±0.08)均顯著低于對(duì)照組,P0.05;TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量(1.47±0.12,1.91±0.14,2.06±0.11)均顯著高于對(duì)照組,P0.05。以同一個(gè)對(duì)照得出MMP-13/TIMP-1基因表達(dá)比值,結(jié)果顯示比值顯著降低(0.55±0.09,0.31±0.10,0.23±0.07,P0.05)。 結(jié)論:交感神經(jīng)遞質(zhì)NE對(duì)體外活化的HSCs具有促進(jìn)增殖和抑制凋亡的作用,并引起凋亡調(diào)控基因bax表達(dá)下降,而bcl-2表達(dá)增加。NE還可以使HSCs MMP-13表達(dá)降低,TIMP-1表達(dá)升高,進(jìn)而降低MMP-13/TIMP-1比值,從而減少其對(duì)肝臟膠原降解的作用,使HSCsⅠ型膠原表達(dá)量增加,從而加速肝纖維化的進(jìn)展。 第三部分去甲腎上腺素各受體亞型對(duì)HSCs生物學(xué)行為的調(diào)控作用目的:探討交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素各受體亞型對(duì)肝星狀細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。 方法:體外培養(yǎng)HSCs,Western blot檢測(cè)HSCs腎上腺素受體(α-AR、β1-AR及β2-AR)蛋白的表達(dá);免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)腎上腺素受體亞型在HSCs的分布與定位;Real-time Q-PCR檢測(cè)HSCs腎上腺素受體(α-AR、β1-AR及β2-AR)mRNA的表達(dá)。細(xì)胞干預(yù)分為以下6組:①空白對(duì)照組,為單純HSCs培養(yǎng);②交感興奮組(NE);③α-AR阻滯組(酚妥拉明);④β1-AR阻滯組(CGP20712A);⑤β2-AR阻滯組(ICI118551);⑥交感抑制組(酚妥拉明+普萘洛爾)。MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖;TUNEL法觀察HSCs凋亡狀況;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及凋亡調(diào)控基因bax和bcl-2的變化;Real-time Q-PCR檢測(cè)Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá);并用Western blot和Real-time Q-PCR檢測(cè)MMP-13和TIMP-1蛋白和mRNA的表達(dá)。結(jié)果:①Western blot檢測(cè)HSCsα-AR、β1-AR及β2-AR蛋白的表達(dá),分別在大約57 kD、50 kD、47 kD位置出現(xiàn)α-AR、β1-AR、β2-AR特異性條帶,在43 kD位置可見(jiàn)β-actin條帶;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)腎上腺素受體亞型定位于的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿;Real-time Q-PCR檢測(cè)HSCs表達(dá)α-AR、β1-AR及β2-AR mRNA。②MTT法顯示,10μmol·L-1的NE作用于HSCs,實(shí)驗(yàn)組A值明顯高于對(duì)照組,加入α-AR、β1-AR、β2-AR阻滯劑后,實(shí)驗(yàn)組A值均顯著下降,HSCs增殖受抑制,α-AR和β-AR阻滯劑合用增殖受抑制更明顯。③TUNEL法顯示加入受體阻滯劑后HSCs凋亡率升高,其中α-AR和β2-AR阻滯劑作用最顯著,凋亡百分比分別為17.40%±4.51%和21.40%±3.51%,P0.01;加入β1-AR阻滯劑CGP20712A凋亡率也升高,凋亡百分比為13.60%±3.29%,P0.05。④同時(shí),流式細(xì)胞術(shù)顯示加入受體阻滯劑后HSCs凋亡率升高,其中α-AR和β2-AR阻滯劑作用最顯著,凋亡率分別為5.04%±1.44%和5.99%±2.14%,P0.05;加入β1-AR阻滯劑CGP20712A凋亡率也升高,與對(duì)照組相比P0.05。⑤流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡調(diào)控基因的變化:加入α和β2受體阻滯劑后凋亡調(diào)控基因表達(dá)改變,bax表達(dá)上調(diào)(11.40±2.51, 10.40±1.41 vs 9.60±1.76, P0.05),而bcl-2表達(dá)下降(5.04±1.44, 4.99±1.41 vs 7.06±0.54, P0.05);加入β1-AR阻滯劑CGP20712A凋亡基因變化不明顯,與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。⑥Real-time Q-PCR檢測(cè)NE受體阻滯劑對(duì)HSCs表達(dá)Ⅰ型膠原的影響:結(jié)果顯示,加入α-AR、β1-AR、β2-AR阻滯劑后HSCsⅠ型膠原表達(dá)降低,mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.40±0.11、0.74±0.10和0.31±0.09,P0.05;α和β受體阻滯劑合用效果更明顯。⑦Western blot檢測(cè)NE受體阻滯劑對(duì)HSCs表達(dá)MMP-13、TIMP-1蛋白的變化情況。結(jié)果顯示,在大約60 kD位置出現(xiàn)MMP-13特異性條帶,在大約28 kD位置出現(xiàn)TIMP-1特異性條帶,在43 kD位置可見(jiàn)β-actin條帶。加入α-AR、β1-AR、β2-AR阻滯劑后HSCs表達(dá)MMP-13蛋白明顯升高(0.99±0.08, 1.26±0.13, 1.27±0.07 vs 0.98±0.21, P0.05);TIMP-1蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(0.37±0.02, 0.54±0.21, 0.44±0.09 vs 0.55±0.05);MMP-13/TIMP-1的比值升高(2.68±0.07, 2.33±0.08, 2.89±0.12 vs 1.78±0.10, P0.01)。α和β受體阻滯劑合用效果更明顯。⑧Real-time Q-PCR檢測(cè)NE受體阻滯劑對(duì)HSCs表達(dá)MMP-13和TIMP-1 mRNA的影響:以對(duì)照組MMP-13、TIMP-1 mRNA表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn),各實(shí)驗(yàn)組MMP-13、TIMP-1的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組的變化用以下公式計(jì)算:△c(t)實(shí)驗(yàn)組=c(t)目的基因-c(t)GAPDH,△c(t)對(duì)照組=c(t)目的基因-c(t)GAPDH,△△c(t) =△c(t)實(shí)驗(yàn)組-△c(t)對(duì)照組,目的基因的相對(duì)表達(dá)量folds=2-△△c(t)計(jì)算MMP-13、TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量。加入α-AR、β1-AR、β2-AR阻滯劑后HSCs MMP-13表達(dá)升高,mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.98±0.18、1.08±0.15和1.83±0.14,P0.05;TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(0.54±0.08, 0.89±0.10, 0.49±0.07, P0.05) ,MMP-13/TIMP-1比值升高(3.67±0.08, 1.21±0.11, 3.73±0.12, P0.01)。α和β受體阻滯劑合用效果更明顯。 結(jié)論:HSCs可以表達(dá)α-AR、β1-AR和β2-AR腎上腺素受體蛋白和mRNA,主要分布于HSCs的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿。α-AR、β1-AR和β2-AR特異性阻滯劑均可以抑制HSCs增殖、誘導(dǎo)其凋亡。并可以拮抗NE引起的凋亡基因的變化,使bax表達(dá)下降,bcl-2表達(dá)升高。其中,α-AR阻滯劑酚妥拉明和β2-AR阻滯劑ICI118551效果最明顯。NE受體阻滯劑促進(jìn)HSCs MMP-13表達(dá),顯著降低TIMP-1表達(dá),MMP-13/TIMP-1比值回升;Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)亦明顯降低。 第四部分NE調(diào)控HSCs生物學(xué)行為的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制 目的:探討交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素對(duì)肝星狀細(xì)胞生物學(xué)行為影響的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。 方法:體外培養(yǎng)HSCs,加入PI-3K信號(hào)通路抑制劑LY294002,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)NE對(duì)HSCs增殖的影響;TUNEL法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡情況;Western blot檢測(cè)PI-3K蛋白表達(dá)的變化情況。結(jié)果:①NE促進(jìn)HSCs增殖,加入PI-3K信號(hào)通路抑制劑LY294002后細(xì)胞增殖受抑制;②NE作用于HSCs 24 h,TUNEL法和流式細(xì)胞術(shù)均證實(shí)HSCs凋亡率顯著低于對(duì)照組,加入PI-3K信號(hào)通路抑制劑LY294002后HSCs凋亡率升高(14.40%±4.51% vs 6.60%±3.05% by TUNEL, P0.05; 5.04%±1.44% vs 2.29%±0.22% by FCM, P0.05);③加入PI-3K信號(hào)通路抑制劑LY294002后,Western blot證實(shí)PI-3K蛋白表達(dá)減少。 結(jié)論:交感神經(jīng)遞質(zhì)NE可以促進(jìn)HSCs增殖,抑制HSCs凋亡,與PI-3K信號(hào)通路相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 夏鋒,何振平,王曉麗,劉麗梅,董家鴻;大鼠肝臟內(nèi)神經(jīng)分布的形態(tài)學(xué)觀察[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年22期

2 胡慶偉;劉耕陶;;抗肝纖維化藥物研究的進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2006年01期

3 陳雷,朱繼業(yè),冷希圣,杜如昱;肝硬化門靜脈高壓癥患者肝組織α_1腎上腺素受體亞型的mRNA表達(dá)[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2000年02期

4 朱繼業(yè),杜如昱,冷希圣,趙華,韓建德;肝硬變門靜脈高壓癥患者血腎上腺素、去甲腎上腺素濃度測(cè)定[J];中華外科雜志;1996年03期

5 徐新保,冷希圣,何振平,梁志清,林凱,于鑫,魏玉華;反義Smad_4基因?qū)A脂細(xì)胞系CFSC生物學(xué)特性的影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2004年07期

6 張有成,冷希圣,魏玉華,朱繼業(yè),彭吉潤(rùn),杜如昱;肝硬化肝組織α_1－腎上腺素受體的放射配基結(jié)合研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;1996年03期

7 李立,陳剛,郭永章;神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)肝細(xì)胞增殖的影響[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2002年04期

8 ;Expression of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in hepatic stellate cells during rat hepatic fibrosis and its intervention by IL-10[J];World Journal of Gastroenterology;2005年12期

9 ;Effects of augmentation of liver regeneration recombinant plasmid on rat hepatic fibrosis[J];World Journal of Gastroenterology;2005年16期

10 ;Adeno-associated virus mediated interferon-gamma inhibits the progression of hepatic fibrosis in vitro and in vivo[J];World Journal of Gastroenterology;2005年26期

本文編號(hào)：2784182