【摘要】：目的 近年疾病監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)直報(bào)數(shù)據(jù)顯示,我國(guó)丙型肝炎報(bào)告病例數(shù)呈遞增態(tài)勢(shì),而丙型肝炎感染后癥狀的隱匿性使其易發(fā)展成慢性肝炎、肝硬化甚至是肝細(xì)胞癌,丙型肝炎已經(jīng)成為重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題。我國(guó)關(guān)于丙型肝炎流行病學(xué)、病原學(xué)方面的研究較少,而福建省僅在1992年進(jìn)行過(guò)自然人群丙型肝炎抗體陽(yáng)性率的調(diào)查,此后未見大規(guī)模的流行病學(xué)研究,也未見報(bào)道福建省丙型肝炎病毒基因型的分布特征。另外,不同基因型間對(duì)抗病毒藥物的敏感性不同,而丙型肝炎病毒體外培養(yǎng)模型的缺乏使其在致病機(jī)制、疫苗研究、藥物篩選等方面的研究長(zhǎng)期停滯不前。因此,為了更好地預(yù)防和控制丙型肝炎,非常有必要對(duì)福建省丙型肝炎的流行特征進(jìn)行分析,獲取丙型肝炎流行現(xiàn)狀的基礎(chǔ)資料,建立丙型肝炎報(bào)告數(shù)的預(yù)測(cè)模型,為丙型肝炎防治策略的制定提供數(shù)據(jù)支持;此外,建立福建省丙型肝炎流行基因型病毒株的體外培養(yǎng)模型,為丙型肝炎基礎(chǔ)研究提供平臺(tái),在此基礎(chǔ)上進(jìn)行藥物篩查等工作,從實(shí)踐意義上指導(dǎo)丙型肝炎臨床用藥。 方法 1、采用多階段抽樣的方法,通過(guò)橫斷面調(diào)查研究,獲取丙型肝炎流行現(xiàn)狀的基礎(chǔ)資料;應(yīng)用間接ELISA方法檢測(cè)血清中的丙型肝炎病毒抗體,分析2006年福建省自然人群抗-HCV陽(yáng)性率; 2、通過(guò)收集無(wú)償獻(xiàn)血者、吸毒者以及醫(yī)院來(lái)源的抗-HCV陽(yáng)性的血清標(biāo)本,采用RT-PCR方法,分別進(jìn)行C/E1區(qū)和NS5B區(qū)基因的擴(kuò)增、克隆和測(cè)序,應(yīng)用生物學(xué)軟件對(duì)序列進(jìn)行分析比較,構(gòu)建序列的系統(tǒng)發(fā)育樹,分析福建省不同人群間基因分布的特征; 3、根據(jù)《中國(guó)疾病預(yù)防控制信息系統(tǒng)》疫情數(shù)據(jù)庫(kù)中福建省2004～2010年HCV的月報(bào)發(fā)病數(shù)據(jù),分析其數(shù)據(jù)特征,建立最優(yōu)的發(fā)病預(yù)測(cè)模型; 4、應(yīng)用長(zhǎng)片段核酸擴(kuò)增和基因克隆技術(shù),獲取不同亞型HCV基因組的全長(zhǎng)序列,構(gòu)建重組質(zhì)粒;將福建流行株全長(zhǎng)基因與JFH1株的非編碼區(qū)進(jìn)行嵌合,經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄、Huh7細(xì)胞轉(zhuǎn)染,構(gòu)建不同亞型嵌合的體外細(xì)胞培養(yǎng)模型,經(jīng)IFA、RT-PCR等方法對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證鑒定,并初步將該模型用于體外藥物篩選。 結(jié)果 1、福建省自然人群抗-HCV陽(yáng)性率為0.7%,地區(qū)分布無(wú)差異,男女無(wú)差異,隨著年齡增長(zhǎng),抗-HCV陽(yáng)性率有增加趨勢(shì),尤其是50歲以上年齡組,抗-HCV陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于50歲以下年齡組;雖然1992年人群抗-HCV陽(yáng)性率的調(diào)查存在假陽(yáng)性率等問(wèn)題,結(jié)合其他資料,可以認(rèn)為人群抗-HCV陽(yáng)性率呈下降趨勢(shì),但HCV防治形勢(shì)不容樂(lè)觀; 2、福建省丙型肝炎主要流行基因型為6a和1b,其次為3b和2a,不同人群間流行基因型有差別,臨床病例的主要流行基因型為1b,而無(wú)償獻(xiàn)血者和吸毒者主要流行基因型為6a,從不同人群間流行基因型分布的差異可以推論,可能存在主要流行基因型由1b向6a轉(zhuǎn)變的情況;還發(fā)現(xiàn)可能存在混合感染的情況,主要表現(xiàn)為3b亞型與其他型別的重組; 3、《中國(guó)疾病預(yù)防控制信息系統(tǒng)》疾病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示,自2004年實(shí)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)后,丙型肝炎報(bào)告數(shù)呈逐年上升趨勢(shì),且報(bào)告數(shù)的上升是由臨床診斷病例數(shù)上升引起的,實(shí)驗(yàn)室確診病例數(shù)基本保持穩(wěn)定,臨床診斷病例數(shù)的上升可能有幾個(gè)方面原因:責(zé)任人報(bào)告意識(shí)增強(qiáng)、感染者發(fā)展為病人、報(bào)告人掌握的HCV診斷標(biāo)準(zhǔn)不嚴(yán)謹(jǐn); 4、建立的ARIMA(2,1,0)(2,1,0)12(無(wú)常數(shù))模型對(duì)丙型肝炎月報(bào)數(shù)進(jìn)行了較好的跟蹤與預(yù)測(cè),但由于外界其他因素變化的影響,用于中短期預(yù)測(cè)效果優(yōu)于長(zhǎng)期預(yù)測(cè)。 5、擴(kuò)增并拼接了6株不同亞型的丙型肝炎病毒全長(zhǎng)基因(其中1b亞型兩株,3a、3b、6a及6n亞型各一株)以及1a亞型半長(zhǎng)片段;構(gòu)建了全長(zhǎng)重組質(zhì)粒pBS1、pBR2、pBSR5、pXX4、pXX19及pXQ124; 6、成功構(gòu)建了pBS1/JFH1(6a/2a)嵌合體外細(xì)胞培養(yǎng)模型。pBS1/JFH1經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的感染性RNA轉(zhuǎn)染Huh7細(xì)胞后產(chǎn)生的衍生病毒可以引起新的Huh7細(xì)胞的感染,與pJFH1相比,構(gòu)建的嵌合株感染力相對(duì)較弱; 7、將構(gòu)建的pBS1/JFH1(6a/2a)嵌合體外細(xì)胞培養(yǎng)模型初步應(yīng)用于藥物篩選。研究結(jié)果表明INFα能有效抑制病毒復(fù)制,而且這種抑制呈劑量依賴性,RBV、NTZ和CsA單獨(dú)應(yīng)用也都能抑制HCV病毒的復(fù)制,但需要較大劑量,而這三種藥物與INFα聯(lián)合應(yīng)用,都能顯著提高INFα的抗病毒作用。 結(jié)論 1、福建省自然人群抗-HCV陽(yáng)性率呈現(xiàn)下降趨勢(shì),但由于受HCV易慢性化特點(diǎn)的影響,使多年前HCV較高的陽(yáng)性率表現(xiàn)為目前發(fā)病率的逐年增加。 2、完成福建省不同人群HCV基因流行型分析,發(fā)現(xiàn)可能存在主要流行基因型由1b向6a轉(zhuǎn)變的情況以及目前存在較多HCV混合感染的情況。 3、擴(kuò)增并拼接了6株5個(gè)亞型的HCV全長(zhǎng)基因,成功構(gòu)建出pBS1/JFH1(6a/2a)嵌合體外細(xì)胞培養(yǎng)模型。該模型用于藥物篩選具有可行性,可為深入研究HCV的毒力基因、致病機(jī)制等基礎(chǔ)性研究提供有利的工具。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R512.63
【圖文】：

意義（經(jīng) Fisher’s 精確概率法檢驗(yàn) P=0.036）。結(jié)果見表 1-2 及圖 1-1。表 1-2 福建省自然人群抗-HCV 陽(yáng)性率年齡別、性別分布表男 女 合計(jì)檢測(cè)數(shù) 陽(yáng)性數(shù) 陽(yáng)性率(%) 檢測(cè)數(shù) 陽(yáng)性數(shù) 陽(yáng)性率(%) 檢測(cè)數(shù) 陽(yáng)性數(shù) 陽(yáng)性 177 0 0.00 160 0 0.00 337 0 0. 142 0 0.00 134 2 1.49 276 2 0. 184 2 1.09 280 0 0.00 464 2 0. 174 0 0.00 240 3 1.25 414 3 0. 163 1 0.61 221 2 0.90 384 3 0.9 127 2 1.57 149 3 2.01 276 5 1. 967 5 0.52 1184 10 0.84 2151 15 0. 0.44 0.88 0.

30～40 歲1992 年 33 740 773 4.272006 年 3 411 414 0.7211.517 0.001合計(jì) 36 1151 1187 -40～50 歲1992 年 27 536 563 4.802006 年 3 381 384 0.7811.994 0.001合計(jì) 30 917 947 -50 歲～1992 年 11 279 290 3.792006 年 5 271 276 1.812.021 0.155合計(jì) 16 550 566 -合計(jì)1992 年 152 3657 3809 3.9954.741 <0.002006 年 15 2136 2151 0.70合計(jì) 167 5793 5960 -

3b 型分支形成一個(gè)大簇，各株間基因進(jìn)化距離比較接近。6a 型分支中形成了五簇，僅一簇與香港株及英國(guó)株進(jìn)化距離較為接近，其余各簇基因間親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。2a 型分支形成一簇，與日本株及印尼株在進(jìn)化關(guān)系上均較為接近。不同人群間應(yīng)用 C/E1 分型法得到的分型結(jié)果，其核苷酸序列同源性及變異頻率的結(jié)果見表 2-5 及圖 2-7。可以看到各人群不同亞型間核苷酸序列的同源性皆在 88％以上，符合亞型的判斷標(biāo)準(zhǔn)。表 2-5 不同人群 C/E1 分型法各亞型間核苷酸序列同源性1a 1b 2a 3a 3b 6a 6n臨床病例 92.01% 89.8% 93.23% - - 93.61% -吸毒者 96.20% 91.39% 93.88% 92.30% 92.88% 90.67% 97.26%無(wú)償獻(xiàn)血者 95.83% 90.11% 93.92% - 96.46% 92.00% 100.00%

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本文編號(hào)：2783891