【摘要】：背景： 丙型肝炎是一種由HCV感染引起的全世界范圍的傳染病。HCV感染慢性化導(dǎo)致患者肝臟纖維化和肝硬化，甚至肝細(xì)胞癌。HCV基因組學(xué)，尤其是E2區(qū)域序列的高突變率，使得基因分型越來(lái)越多樣化、HCV及基因分型的檢測(cè)要求越來(lái)越嚴(yán)格，慢性感染者對(duì)常規(guī)抗病毒治療應(yīng)答不佳以及預(yù)防HCV感染的疫苗研制工作舉步維艱�；谛蛄械谋Ｊ匦栽u(píng)估和表位預(yù)測(cè)合成的表位多肽，由于具有高度的保守性及良好的抗原活性，成為當(dāng)今科學(xué)界研究的熱點(diǎn)。利用該技術(shù)構(gòu)建合成的HCV保守性表位多肽，在HCV感染性疾病的診斷、治療及預(yù)防的探索研究也已得到廣泛開展。 目的： 基于HCV E2區(qū)序列的保守性評(píng)估和B-cell表位預(yù)測(cè)合成表位多肽，分析其與HCV組和對(duì)照組血清結(jié)合性的差異，篩選基因型特異性表位多肽；基于此類表位多肽預(yù)期：建立HCV及基因分型血清學(xué)ELISA檢測(cè)技術(shù)；識(shí)別此類表位多肽的特異性抗體通過(guò)抗原抗體結(jié)合，封閉HCV感染人體靶細(xì)胞的位點(diǎn)或滅活病毒，起到有效的抗病毒作用；通過(guò)誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生中和抗體，而成為預(yù)防HCV感染的候選免疫原，為制備新型肽類疫苗提供依據(jù)。 方法： 本研究利用MEGAv5.05軟件，對(duì)NCBI protein數(shù)據(jù)庫(kù)中HCV1a、1b、4d基因型的各40條E2序列進(jìn)行保守性評(píng)估及B-cell表位預(yù)測(cè)和表位設(shè)計(jì)，得到此3種基因型特異及共有的保守性B-cell表位序列，化學(xué)合成表位多肽。通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)，測(cè)定4種表位多肽分別與29例HCV感染者及25例非HCV感染者血清結(jié)合的OD450值，使用SPSS v20.0軟件進(jìn)行差異性分析，兩組間比較應(yīng)用t/t’檢驗(yàn)方法（P＜0.05），明確HCV感染組與對(duì)照組數(shù)據(jù)差異及統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)合成4條HCV B-cell表位多肽，分別為1a特異性序列DC-13（434-DTGWLAGLFYYHK-446）、1b特異性序列HC-13（434-HTGFLAALFYAKS-446）、4d特異性序列NC-13（434-NTGFLASLFYTHK-446）和共有序列FC-9（447-FNSSGCPER-455）。ELISA實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)分析顯示：DC-13、NC-13和FC-9與HCV感染組血清結(jié)合OD450值均高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HC-13與HCV-1b感染組血清結(jié)合OD450值高于HCV-2a感染組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但與HCV-1b感染組和對(duì)照組的血清結(jié)合OD450值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 實(shí)驗(yàn)合成4條HCV B-cell表位多肽，即1a、1b、4d型特異性表位多肽及共有表位多肽；其中，1a、4d型特異性表位多肽及共有表位多肽與HCV感染者血清結(jié)合性均高于非HCV感染者，1b型特異性表位多肽與HCV1b感染者血清結(jié)合性明顯高于HCV2a感染者。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R512.63

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1 祁凌霞;基于HCV E2序列保守性評(píng)估及B-cell表位預(yù)測(cè)篩選基因型特異性表位多肽[D];吉林大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2779255