發(fā)布時間：2020-07-31 19:04

【摘要】：目的選擇軟脂酸建立體外NAFLD脂肪變性肝細胞模型,動態(tài)觀察脂肪變性肝細胞凋亡及線粒體促凋亡蛋白Smac/DIABLO的表達情況；并以還原性谷胱甘肽作為干預(yù)因素,探討其對NAFLD肝細胞凋亡的影響及可能的機制。 方法 1、選用軟脂酸誘導(dǎo)L02細胞建立體外NAFLD肝細胞脂肪變性模型,實驗分為正常對照組和軟脂酸模型組,設(shè)24、48、72小時3個時間點,油紅0染色觀察細胞內(nèi)脂肪變性情況,Annexin/PI結(jié)合流式細胞儀檢測細胞凋亡率,免疫細胞化學(xué)法測定Smac/DIABLO蛋白的表達。 2、根據(jù)第一部分實驗結(jié)果選擇軟脂酸誘導(dǎo)肝細胞凋亡中凋亡率(?)PSmac/DIABLO表達最明顯的時間點作為干預(yù)時間,MTT法確定還原性谷胱甘肽最適濃度范圍,實驗分為正常對照組、軟脂酸模型組及還原型谷胱甘肽(低、中、高濃度)干預(yù)組,采用上述方法觀察各組凋亡率及Smac/DIABLO蛋白的表達。 結(jié)果 1、(1)用軟脂酸誘導(dǎo)L02肝細胞脂肪變性成功建立NAFLD體外細胞模型。油紅0染色顯示,軟脂酸孵育24小時即見肝細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)橘紅色的脂滴,隨著誘導(dǎo)時間的延長,脂滴逐漸增多甚至互相融合。 (2)軟脂酸模型組的細胞凋亡率隨誘導(dǎo)時間延長呈明顯的上升趨勢,24、48、72h組與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 (3)免疫細胞化學(xué)結(jié)果顯示正常對照組肝細胞在48、72h時有個別細胞出現(xiàn)Smac/DIABLO表達,呈弱陽性；軟脂酸模型組Smac/DIABLO陽性率隨培養(yǎng)時間延長逐漸增強,與正常對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 2、(1)MTT的結(jié)果顯示不同濃度GSH對L02細胞產(chǎn)生不同影響。當(dāng)GSH濃度≤20μmol/L時,細胞存活率在80%以上；而當(dāng)GSH濃度≥40μmol/L時,細胞存活率明顯下降,表現(xiàn)出明顯的抑制效應(yīng)。故選擇GSH5、10、20μmol/L作為適宜的后續(xù)濃度。 (2)給予GSH干預(yù)后發(fā)現(xiàn),GSH(低、中、高)濃度組能均減少細胞凋亡率和Smac/DIABLO的表達,與軟脂酸模型組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),并且隨著濃度增加其保護作用越明顯。 結(jié)論 1、軟脂酸可成功誘導(dǎo)L02肝細胞脂肪變性,建立體外NAFLD細胞模型。 2、線粒體促凋亡蛋白Smac/DIABLO可能參與了軟脂酸誘導(dǎo)的體外NAFLD肝細胞凋亡； 3、還原性谷胱甘肽可能通過下調(diào)Smac/DIABLO蛋白的表達,抑制細胞凋亡發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R575.5

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本文編號：2776880