【摘要】：研究背景及目的:酒精性慢性胰腺炎(ACP)的發(fā)病率逐年升高。乙醇可激活PSC被認(rèn)為是ACP形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,然而5-10%的長(zhǎng)期嗜酒者發(fā)生胰腺纖維化。內(nèi)毒素脂多糖(LPS)是ACP發(fā)生的重要觸發(fā)因素之一,體內(nèi)、外研究證明LPS可引起PSC激活和合成Col1增加。TGF-β1是重要的致纖維化因子,通過PSC自分泌和旁分泌調(diào)節(jié)自身激活過程,增加α-SMA和Col1表達(dá)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)IL-6在許多疾病纖維化的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。IL-6通過其受體(IL-6R)激活JAK2/STAT3信號(hào)通路可促進(jìn)肝臟、肺、腎臟等多器官纖維化,但是IL-6及JAK2/STAT3通路在ACP胰腺纖維化的作用和機(jī)制尚不十分明確。本研究旨在通過人和大鼠整體水平與巨噬細(xì)胞(Mφ)和胰腺星狀細(xì)胞(PSC)細(xì)胞水平研究IL-6/JAK2/STAT3通路在ACP胰腺纖維化發(fā)生學(xué)的作用與機(jī)制。材料和方法:將33只120±20 g雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組:(1)對(duì)照飼料喂養(yǎng)組,(2)Lieber-DeCarli酒精飼料喂養(yǎng)組,(3)對(duì)照飼料喂養(yǎng)+LPS反復(fù)注射組。LPS組于8,9,10周末每周經(jīng)尾靜脈注射LPS(3mg/kg)1次,其它兩組尾靜脈注射生理鹽水1 ml。10周末接受LPS或生理鹽水24 h后3組大鼠被異氟烷麻醉,留取胰腺組織塊。其中部分組織塊放入10%中性福爾馬林液固定,用于制備石蠟切片,部分組織塊放入液氮中保存。采用本研究室經(jīng)RSV啟動(dòng)子/增強(qiáng)子驅(qū)動(dòng)SV T抗原建立的永生化人胰腺星狀細(xì)胞系(HP-1細(xì)胞)進(jìn)行體外研究。采用淋巴細(xì)胞分離液分離人末梢血單核細(xì)胞,經(jīng)粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)誘導(dǎo)培養(yǎng)6天獲得巨噬細(xì)胞(Mφ)用于ALC和LPS體外造模。采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)人胰腺組織IL-6表達(dá),免疫雙染用于識(shí)別PSC表達(dá)IL-6R,免疫細(xì)胞化學(xué)法分別檢測(cè)Mφs和HP-1細(xì)胞IL-6和IL-6R表達(dá)。ELISA法檢測(cè)大鼠胰腺組織、人血清Mφs和HP-1細(xì)胞IL-6、TGF-β1、α-SMA和Col1α1產(chǎn)生。采用RT-qPCR檢測(cè)HP-1細(xì)胞IL-6、TGF-β1、α-SMA和Col1α1 mR NA轉(zhuǎn)錄水平。Western blot法檢測(cè)HP-1細(xì)胞p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3的含量。結(jié)果:在人ACP胰腺免疫組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn):ACP患者與健康對(duì)照者相比胰腺組織IL-6及其受體表達(dá)上調(diào),IL-6+Mφs和IL-6+PSCs與IL-6R+Mφs和IL-6R+PSCs數(shù)量均明顯增加(各組P0.001)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn):不伴有或伴有內(nèi)毒素血癥ACP患者血清IL-6,TGF-β1和Col1α1水平明顯升高(各組P0.001),升高的IL-6與TGF-β1或Col1α1水平呈正相關(guān)(r=0.6609,P0.05;r=0.6293,P0.05;r=0.6422,P0.01;r=0.5006,P0.05)。在乙醇或LPS制備的大鼠胰腺炎模型研究發(fā)現(xiàn):乙醇和LPS還可使大鼠胰腺組織IL-6,TGF-β1和Col1α1合成增加(各組P0.001),增加的IL-6與TGF-β1或Col1a1含量呈正相關(guān)(r=0.7369,P0.01;r=0.6445,P0.05;r=0.7380,P0.01;r=0.6344,P0.05)。體外研究發(fā)現(xiàn):乙醇或LPS均可誘導(dǎo)人Mφs和HP-1細(xì)胞IL-6R表達(dá)上調(diào)與IL-6和TGF-β1分泌增加(各組P0.001)。外源性IL-6可誘導(dǎo)HP-1細(xì)胞分泌TGF-β1,而TGF-β1也可誘導(dǎo)HP-1細(xì)胞分泌IL-6。IL-6中和抗體可部分抑制乙醇或LPS誘導(dǎo)HP-1細(xì)胞α-SMA和Col1α1 mR NA轉(zhuǎn)錄和蛋白合成(各組P0.001),提示IL-6是ALC和LPS誘導(dǎo)HP-1細(xì)胞合成α-SMA和Col1α1的一種途徑。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)IL-6經(jīng)IL-6R/JAK2/STAT3通路誘導(dǎo)TGF-β1合成。TGF-β1ab可明顯抑制IL-6誘導(dǎo)HP-1細(xì)胞產(chǎn)生α-SMA和Col1α1,推測(cè)TGF-β1是IL-6誘導(dǎo)HP-1細(xì)胞合成α-SMA和Col1a1的中間介導(dǎo)者。IL-6能誘導(dǎo)HP-1細(xì)胞延遲出現(xiàn)Smad2/3磷酸化,而小干擾RNA si-Smad2能有效抑制IL-6誘導(dǎo)的α-SMA mR NA表達(dá),si-Smad3能有效抑制IL-6誘導(dǎo)的Col1α1 mR NA表達(dá)(兩者P0.001)。結(jié)論:IL-6是ACP胰腺纖維化形成的重要因素之一。IL-6經(jīng)IL-6R/JAK2/STAT3通路誘導(dǎo)TGF-β1合成,通過上調(diào)TGF-β1/Smads通路促進(jìn)PSC激活和Col1合成,本研究提示IL-6可能作為防治乙醇相關(guān)胰腺纖維化的一個(gè)靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R576
【圖文】：

圖 1.1 IL-6 受體結(jié)合分類自 Mihara M et al, Clinical Science. 2012,122(4):143 159..2 IL-6 信號(hào)通路L-6 與 IL-6R 結(jié)合形成 IL-6/IL-6R 復(fù)合物誘導(dǎo) gp130 二聚體形活細(xì)胞內(nèi)兩種信號(hào)通路[67]：gp130 YXXQ（X 是任何氨基酸 JAK/STAT 信號(hào)途徑和 gp130 Tyr759位點(diǎn)介導(dǎo)的 Ras/Raf/ER分別發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)作用。1）IL-6 經(jīng) gp130 YXXQ 位點(diǎn)的 JAK/STAT 信號(hào)途徑：

2.3.1 ACP 胰腺組織 IL-6 及其受體表達(dá)人胰腺組織石蠟切片免疫組化結(jié)果顯示：正常胰腺組織僅有少量腺泡細(xì)胞表達(dá) IL-6，ACP 患者胰腺組織腺泡細(xì)胞、Mφs、PSCs 和中性粒細(xì)胞均易見 IL-6 表達(dá)（Fig 2.1A，B）；免疫組化雙染結(jié)果顯示：正常胰腺組織僅有少量腺泡細(xì)胞弱表達(dá) IL-6R，ACP 患者胰腺組織有較多的腺泡細(xì)胞和一些 Mφs、PSCs 高表達(dá) IL-6R（Fig 2.1C，D）；對(duì)每個(gè)染色標(biāo)本隨機(jī)拍照10 個(gè)高倍視野，經(jīng)計(jì)數(shù)和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理顯示：ACP 患者胰腺組織表達(dá)IL-6或IL-6R的Mφs和PSCs數(shù)量顯著增加（各組均P<0.001）（Fig2.1E，F(xiàn)，G，H）。2.3 結(jié) 果

第 2 章 IL-6 在酒精性慢性胰腺炎胰腺星狀細(xì)胞介導(dǎo)纖維化的作用和機(jī)制研究2.3.2 ACP 患者血清 IL-6，TGF-β1 和 Col1α1 水平增加ELISA 結(jié)果顯示：ACP 患者血清 IL-6、TGF-β1 和 Col1α1 水平較正常對(duì)照組明顯升高，伴有內(nèi)毒素血癥的 ACP 患者上述三種指標(biāo)又高于不伴有內(nèi)毒素血癥 ACP 的水平（各組間均 P<0.001）（Fig 2.2A，B，C）；相關(guān)性分析結(jié)果顯示不伴有或伴有內(nèi)毒素血癥 ACP 患者血清 IL-6 水平與血清TGF-β1 或 Col1α1 水平均呈正相關(guān)（r=0.6609，P<0.05；r=0.6293，P<0.05；r=0.6422，P<0.01；r=0.5006，P<0.05）（Fig 2.2D，E，F(xiàn)，G）。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周昊;劉奕;廖楚航;郭駿;費(fèi)偉;;TGFβ/Smad信號(hào)通路在口腔鱗癌熱療中的表達(dá)變化[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2019年01期

2 Zhang Yali;Wang Bingyu;Guo Xueying;Yang Lei;Li Dandan;Yuan Xingxing;;Wulong Xiaozheng Wan medicated serum inhibits epithelial-mesenchymal transition in human gastric carcinoma cell line BGC823 by modulation of transforming growth factor-β_1/Smad signaling[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2019年03期

3 ANWAR Reheman;TULAILIJIANG Hamutai;JUKEN Aniwashen;YIMING Sulaiman;;The Analysis of Relationship between MSTN/Smad Signal Path and Turpan Black Sheep Meat Production[J];Agricultural Science & Technology;2016年01期

4 劉欣欣;馮愛平;和義敏;李延;吳艷;連昕;胡楓;李家文;涂亞庭;陳善娟;;Association of Down-regulation of CD109 Expression with Up-expression of Smad7 in Pathogenesis of Psoriasis[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2016年01期

5 馬志君;吉潔;李春輝;謝云鵬;王維興;邢恩鴻;;腦星形細(xì)胞瘤組織TGF-β1、Smad7與VEGF的表達(dá)及意義[J];健康之路;2016年12期

6 Zhen-Chang Wang;Shan Yang;Jing-Jing Huang;Song-Lin Chen;Quan-Qiang Li;Yuan Li;;Effect of bone marrow mesenchymal stem cells on the Smad expression of hepatic fibrosis rats[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2014年04期

7 馮愛平;和義敏;劉欣欣;李家文;涂亞庭;胡楓;陳善娟;;Expression of USP15, TβR-Ⅰand Smad7 in Psoriasis[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年03期

8 龐莉;王晶;蔣延文;;Smad蛋白研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2013年12期

9 任章朋;孫立平;夏幼辰;童巧霞;;Effect of the Protease Inhibitor MG132 on the Transforming Growth Factor-β/Smad Signaling Pathway in HSC-T6 Cells[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2013年04期

10 Giovanni Monteleone;Roberta Caruso;Francesco Pallone;;Role of Smad7 in inflammatory bowel diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2012年40期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 尹丹丹;;去甲斑蝥素抑制蛋白磷酸酶2A介導(dǎo)的Smad3 C-端磷酸化發(fā)揮抗腎間質(zhì)纖維化作用的機(jī)制研究[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì)2018年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2018年

2 Yu Ying;Su Zhaoliang;Wang Shengjun;Xu Huaxi;;Th2 cells may be an intermediate during converting na?ve T cells to Th9 cells,which associate with Smad3/Smad4 and IRF4 pathway[A];第十二屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要匯編[C];2017年

3 Yijia Xiang;Ning Zhu;Junchong Chen;Xuyong Zhao;Shiyong Ye;Chunlai Zeng;;Icariin Attenuates Monocrotaline-induced Pulmonary Arterial Hypertension via inhibition of TGF-β1/Smad2/3 Signaling pathway in Rats[A];2015年浙江省心電生理與起搏學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2015年

4 張雪瑩;王慶陽;張紀(jì)巖;;Smad4 inhibits cell migration via suppressing JNK activity in human PANC-1 pancreatic cancer cells[A];第九屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2014年

5 Bensoussan D.;Stoltz J.F.;de Isla N;;Differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells induced by biaxial tension involves Smad3 activation[A];中國生理學(xué)會(huì)第23屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

6 ;Function of TGF-β/Smad4 Signaling in the Maintenance of Tissue Homeostasis[A];中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

7 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

8 ;Maternal Smad3 Deficiency Compromises Decidualization in Mice[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

9 Jing Zhou;李芷懿;Jeng-Jiann Chiu;;Force-specific activation of Smad1/5 regulates vascular endothelial cell cycle and progression in response to disturbed flow[A];2012年中國科協(xié)海峽兩岸青年科學(xué)家學(xué)術(shù)活動(dòng)月——第九屆海峽兩岸細(xì)胞生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

10 Juan Li;Jun Wang;Zhi-he Zhao;;Compressive Stress Relayed Chondrogenic Differentiation Through Smad-dependent and Smad-independent Pathways[A];第十屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第十二屆全國生物流變學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2012年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 記者 李天舒;先天性心臟病病因被發(fā)現(xiàn)[N];健康報(bào);2009年

2 ;探秘?zé)齻膬?nèi)源性損傷[N];健康報(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 金曉東;Erbin對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)功能的影響和機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2019年

2 任萬軍;bFGF通過TGF-β1/Smad3信號(hào)通路調(diào)控動(dòng)靜脈瘺狹窄機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2019年

3 畢建鋼;MiR-181a-5p通過靶向調(diào)控Egr1抑制Egr1/TGF-β/Smad信號(hào)通路延緩肝細(xì)胞癌的增殖[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

4 王鵬;長(zhǎng)鏈非編碼RNA lnc-TSI通過負(fù)向調(diào)節(jié)TGF-β/Smad3信號(hào)通路抑制腎臟纖維化[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

5 李心怡;TSG-6通過調(diào)節(jié)TGF-β1/Smad信號(hào)通路抑制人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

6 李紅巖;IL-6在酒精性慢性胰腺炎胰腺星狀細(xì)胞介導(dǎo)纖維化的作用和機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2019年

7 方萌;復(fù)方芪參提取物調(diào)節(jié)miR-145/miR-21與pSmad3C/pSmad3L串話發(fā)揮抗肝細(xì)胞癌作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

8 楊立;間充質(zhì)源性肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子通過抑制Smad4支持肺祖細(xì)胞的增殖[D];天津醫(yī)科大學(xué);2017年

9 劉劍郁;三氯化鋁誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松的TGF-β_1/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 華方方;miR-205靶向調(diào)控Smad4影響[卑┰鮒場(chǎng)⒌蟯黽扒窒幕蒲芯縖D];鄭州大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陶相明;丹酚酸B調(diào)控Smad2/3不同位點(diǎn)磷酸化及Nrf-2/HO-1信號(hào)通路抗肝損傷[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

2 牛播寧;核受體Nur77調(diào)控轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β的下游靶基因Id1的研究[D];廈門大學(xué);2017年

3 彭偉;BMP-7通過Smad1/5上調(diào)SnoN表達(dá)抑制糖尿病腎病進(jìn)展[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2019年

4 周雨曦;口腔cGVHD患者外周血Smads及miRNA155表達(dá)水平和相關(guān)性研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

5 馬彬溪;Myostatin、Smad3、MuRF-1在慢性阻塞性肺疾病合并肺動(dòng)脈高壓患者血清中的表達(dá)[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

6 徐雅琴;TGFβ/Smad信號(hào)通路與miR-21在哮喘小鼠早期氣道重塑中的作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

7 王柳然;Mongersen在牙周炎癥微環(huán)境中抗炎作用的體外研究[D];吉林大學(xué);2019年

8 趙爽;Smad4對(duì)靜壓力下PLGA三維支架人牙齦成纖維細(xì)胞Caspase-3及Bcl-2表達(dá)的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

9 李振文;補(bǔ)腎壯骨法對(duì)骨質(zhì)疏松癥模型大鼠股骨中BMP-2、Smad1/5、Smad6蛋白表達(dá)的影響[D];湖北民族學(xué)院;2018年

10 趙春蓮;TGF-β1/Smad信號(hào)通路參與幽門螺桿菌Tipα誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞EMT形成[D];南華大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2770023